乜照燕 張 娜 甄秀麗 趙素英 張 軼 吳海峰

1.河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院(石家莊，050011)；2.河北省胸科醫(yī)院

染色體多態(tài)性存在于不同人群個體之間，主要包括1、9、16 號染色體次縊痕增加或缺失，D/G組染色體隨體區(qū)變異，9號染色體臂間倒位以及Y染色體長臂長度等變異[1]。一般認為染色體多態(tài)性不會引起個體臨床表型變化，但近年研究表明染色體多態(tài)性可能導致某些臨床效應，如不孕不育、習慣性流產(chǎn)[2-3]等。在體外受精(IVF)過程中，不同類型的男性染色體多態(tài)性的臨床結(jié)局存在爭議。本文旨在探討男性染色體多態(tài)性與輔助生育結(jié)局的關系，為輔助生殖咨詢提供相關臨床依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 研究對象

經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準及患者知情同意選擇 2014年6月-2016年6月在本院接受常規(guī)IVF治療的夫婦198對，為排除女性年齡和不孕因素對卵子質(zhì)量、受精、著床等因素的影響，女性配偶以年齡<35歲、單純輸卵管因素不孕、基礎卵泡生成素( FSH)水平≤8 U/L、基礎竇卵泡數(shù)≥8個、染色體正常、首次行新鮮周期胚胎移植、黃體期長方案為入組條件。根據(jù)男方染色體多態(tài)性分為4組，D/G隨體增加為A組21例，次溢痕增加( 包括1號、9 號、16號染色體)為B組20例，9號染色體臂間倒位者為C組17例，Y染色體變異( 包括大Y和小Y)為D組20例，男性染色體正常者120例作為對照組。

1.2 研究方法

1.2.1外周血淋巴細胞染色體核型分析于IVF-ET術(shù)前, 所有對象進行常規(guī)外周血淋巴細胞培養(yǎng)，染色體制備主要采用G顯帶技術(shù)進行染色，對至少30個分裂中期細胞進行分析，配對3個核型，顯帶分辨率在400～550條帶，按人類細胞學國際命名體制(ISCN2016)進行染色體核型分析。

1.2.2精液常規(guī)檢查取卵當日男方收集精液，精液液化后按照參考文獻[4]行精液常規(guī)檢查。精子形態(tài)學分析采用Diff-Quick快速染色方法染色，采用Kruger精子形態(tài)學標準，頭、頸、中段和尾部均正常的精子認定為正常，所有形態(tài)學處于臨界狀態(tài)的精子均列為異常。計數(shù)精子200條計算正常精子形態(tài)百分率(≥4%為正常)。精子存活率采用伊紅-苯胺黑染色(深圳華康生物醫(yī)學工程有限公司)，計算著色和不著色精子的比例。

1.2.3體外受精及妊娠結(jié)局采用黃體期長方案控制性促排卵，女方取卵同時男方收集精液，精液充分液化后，用Spermgrad 梯度離心處理精液，調(diào)整精子濃度為10×106/ml，取卵后3～4 h加入精子，16～20h觀察受精情況。72 h觀察胚胎發(fā)育情況，并評定胚胎質(zhì)量，移植胚胎。優(yōu)質(zhì)胚胎標準：第3天胚胎細胞總數(shù)≥7個，碎片≤20%。取卵日開始每日肌注黃體酮60 mg支持黃體。胚胎移植后14d尿妊娠試驗或血β-hCG確定生化妊娠，移植后35d B超見孕囊診斷臨床妊娠，≤12周妊娠終止為早期流產(chǎn)。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料采用χ2檢驗，多樣本率兩兩比較的χ2分割法，計量資料采用單因素方差分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 基本情況

男方年齡23～45歲，女方年齡27～34歲；不孕年限1～8年。5組對象在女方年齡、體質(zhì)量指數(shù)、基礎性激素水平和卵泡數(shù)等比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。

2.2 女方促排卵情況

5組對象女方促性腺激素(Gn)用量、Gn天數(shù)、人絨毛膜促性腺激素(hCG)日E2、hCG日內(nèi)膜厚度、獲卵數(shù)比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0. 05)。

2.3 男方精液基本情況

5組精液量、精子濃度、前向運動精子百分率、精子存活率以及精子正常形態(tài)相比無差異(P>0.05)。見表1。

表1 各組對象精液基本情況比較±s)

2.4 男方IVF結(jié)局情況

5組對象間正常受精率、總受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、植入率、妊娠率、流產(chǎn)率差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 各組對象體外受精情況比較[%(例)]

3 討論

傳統(tǒng)醫(yī)學認為染色體多態(tài)性多是無意義重復序列，不引起臨床表型異常。但隨著分子細胞遺傳學檢測技術(shù)的發(fā)展和對非編碼基因研究的深入，越來越多的研究認為染色體的多態(tài)部分可能會在細胞分裂過程中造成同源染色體配對困難，導致染色體不分離，形成異常配子，胚胎發(fā)生染色體非整倍性改變引發(fā)流產(chǎn)、不育不孕及其它臨床效應[5-7]。此外，異染色質(zhì)在著絲粒功能方面起著重要的作用，它是姐妹染色單體結(jié)合和分離所必需的[7]，染色體主縊痕區(qū)著絲粒-動粒復合體(CKC)是染色體運動和均等分離的結(jié)構(gòu)和功能基礎。CKC形態(tài)發(fā)生變化，可能會干擾染色體正常運動和分離[8]。有研究認為染色體多態(tài)性可降低妊娠率增加流產(chǎn)率[9-12]。也有學者認為染色體多態(tài)性與生殖異常沒有直接關系，不影響生育[13-14]。染色體多態(tài)性對生殖功能的影響一直存在爭議。大部分關于多態(tài)性的研究都是針對所有多態(tài)性對結(jié)局的影響，對于不同類別多態(tài)性對助孕結(jié)局影響尚需進一步研究。

戴小凡等[15]研究發(fā)現(xiàn)染色體多態(tài)性與精液質(zhì)量無明顯的相關性。本文資料顯示，不同類型的染色體多態(tài)性男性精液質(zhì)量與對照組相比未見統(tǒng)計學差異。有研究稱在Y染色體上有一些與男性生殖相關的基因，Y染色體的結(jié)構(gòu)多態(tài)性變異，可能會對這些功能區(qū)域產(chǎn)生影響，導致精子質(zhì)量下降。由于本研究數(shù)量有限，且所選病例接受常規(guī)IVF助孕，一般都是精液正常或者精液質(zhì)量稍差男性，故在本研究中未發(fā)現(xiàn)男性染色體多態(tài)對精液質(zhì)量影響。

Bhasin等[16]對1978對行IVF不孕不育夫婦進行染色體多態(tài)性研究，認為染色體多態(tài)性對于IVF-ET的臨床妊娠率、早期流產(chǎn)率及活產(chǎn)率無明顯影響。高輝[17]報道染色體多態(tài)性對于IVF/ICSI-ET治療患者的胚胎種植率、臨床妊娠率和早期流產(chǎn)率均無明顯影響。而郭威等[18]研究認為男性染色體多態(tài)性可能導致ICSI-ET中多原核受精率上升，但對IVF/ICSI-ET結(jié)局均無明顯影響。本研究對象為常規(guī)IVF受精，未發(fā)現(xiàn)染色體多態(tài)性患者受精率有異常；不同類型多態(tài)性組與正常組相比，受精率、卵裂率、優(yōu)胚率、胚胎種植率、臨床妊娠率及早期流產(chǎn)率均無差異；在染色體多態(tài)性組，流產(chǎn)率有增高趨勢但無統(tǒng)計學差異，可能與病例數(shù)較少有關。

本研究結(jié)果顯示，男性染色體多態(tài)并不影響IVF助孕治療的結(jié)局。未來可能需要通過分子遺傳學技術(shù)對特定的多態(tài)區(qū)域的關鍵基因進行檢測確診，以為臨床和遺傳咨詢提供更詳細的指導。