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        黃體酮對(duì)大鼠外傷性腦損傷模型中18kDa轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)的影響

        2018-03-07 04:53:27包卿卞曉星龔幸春王存祖
        中外醫(yī)療 2017年36期
        關(guān)鍵詞:黃體酮外傷性腦損傷

        包卿+卞曉星+龔幸春+王存祖

        [摘要] 目的 觀察和探討黃體酮干預(yù)對(duì)大鼠外傷性腦損傷(TBI)后線粒體膜18kDa轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(TSPO)的表達(dá)變化。 方法 2017年1—7月該院選取雄性清潔型的SD大鼠共72只用作實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,72只SD雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、腦損傷對(duì)照組,黃體酮治療組。采用Feeneys自由落體打擊法制作腦外傷模型,治療組傷后給予腹腔注射黃體酮16 mg/kg,對(duì)照組給予等量生理鹽水。免疫組化法檢測(cè)損傷腦組織中TSPO、OX-42表達(dá)。 結(jié)果 黃體酮治療組傷后12 h、傷后24 h、傷后3 d、傷后7 d的TSPO分別是(32.88±2.95)、(33.50±3.34)、(21.88±3.04)、(19.75±2.25),黃體酮治療組傷后12 h、傷后24 h、傷后3 d、傷后7 d的OX-42分別是(42.13±3.84)、(38.25±4.13)、(28.25±2.49)、(26.25±1.04),黃體酮治療組中除7 d組外,TSPO、OX-42與外傷對(duì)照組明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論TBI后早期應(yīng)用外源性黃體酮,可抑制TSPO的表達(dá)及抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的活化增殖。

        [關(guān)鍵詞] 外傷性腦損傷;黃體酮;18kDa轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白;小膠質(zhì)細(xì)胞

        [中圖分類(lèi)號(hào)] R651 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742(2017)12(c)-0044-03

        [Abstract] Objective This paper tries to explore the effect on the expression of translocator protein after traumatic brain injury by using progesterone. Methods From January to July 2017, a total of 72 male clean SD rats were selected as experimental animals and were randomly divided into two groups: sham group, trauma control group and progesterone treatment group. Rat models with contusion and laceration of brain were established by Feeneys impact with free falling. Treatment group was given progesterone 16 mg/kg after injury, the control group were injected with equivalent saline. Expression of TSPO, OX-42 in brain injury region were detected by immunosihtochemistry. Results Progestin treatment group of 12 h, 24 h after injury, 3 d, 7 d after injury of the TSPO were (32.88±2.95), (33.50±3.34), (21.88±3.04), (19.75±2.25), progestin treatment group 12 h, 24 h after injury, 3 d, 7 d after injury of OX-42 (42.13±3.84), (38.25±4.13), (28.25±2.49), (26.25±1.04). Except 7 d group of progesterone treatment group, OX-42, TSPO decreased which compared with trauma control group, and there was statistical significance(P<0.05). Conclusion By using exogenous progesterone early after TBI may inhibite the expression of TSPO, and then inhibite the activation proliferation of microglia.

        [Key words] Traumatic brain injury; Progesterone; 18 kDa translocator protein; Microglia cell

        近幾年來(lái),較多臨床資料表示,線粒體膜相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白對(duì)神經(jīng)損傷、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的活性會(huì)產(chǎn)生一定的反應(yīng),也是其敏感指標(biāo)之一[1]。另外,黃體酮能夠有效促使外傷性腦損傷之后出現(xiàn)的相關(guān)炎癥反應(yīng)降低,進(jìn)而具備一定的腦保護(hù)效果,不過(guò),其是否和線粒體膜相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白具備一定的相關(guān)關(guān)系尚不明確。筆者2017年1—7月該院選取雄性清潔型的SD大鼠共72只對(duì)大鼠TBI模型進(jìn)行構(gòu)建,對(duì)行黃體酮治療之后的傷側(cè)相關(guān)腦組織內(nèi)TSPO水平和OX-42水平情況進(jìn)行測(cè)定,分析黃體酮用于治療TBI的分子學(xué)相關(guān)機(jī)制。

        1 材料與方法

        1.1 大鼠TBI模型制作

        該文實(shí)驗(yàn)資料是雄性清潔型的SD大鼠共72只,其體重是(220±30)g,隨機(jī)將其分成假手術(shù)組、腦損傷對(duì)照組和黃體酮治療組,并將對(duì)照組和治療組再次分為12 h、24 h、3 d、7 d,區(qū)分成9組,一組8只大鼠。Feeneys自由落體相關(guān)硬膜外撞擊方法將大鼠TBI模型構(gòu)建。予以大鼠麻醉處理之后使其固定在立體的定向儀上面,采取40 g砝碼在25 cm的高度進(jìn)行落下對(duì)其產(chǎn)生重度的損傷,保證打擊力是1 000 g/cm。對(duì)于假手術(shù)組大鼠只顱骨開(kāi)窗,并不引發(fā)其出現(xiàn)腦損傷情況。另外,治療組在1 h給予黃體酮(16 mg/kg)進(jìn)行治療,主要是采取腹腔注射的方法進(jìn)行治療,之后還需要在6 h、24 h、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d進(jìn)行皮下注射,而對(duì)照組則采取等量生理鹽水進(jìn)行注射。endprint

        1.2 標(biāo)本采集及檢測(cè)

        按時(shí)間點(diǎn)取腦損傷區(qū)域的腦組織。經(jīng)4%多聚甲醛固定后石蠟包埋,切取4 μm厚的腦組織切片,嚴(yán)格按照SABC免疫組化試劑盒步驟操作顯色后封片。

        1.3 統(tǒng)計(jì)方法

        采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件計(jì)算大鼠數(shù)據(jù),TSPO水平和OX-42表達(dá)水平等用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,予以t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 TSPO水平改變

        TSPO于3組大鼠的腦組織內(nèi)都存在表達(dá)現(xiàn)象,不同時(shí)間點(diǎn)的假手術(shù)組相對(duì)比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);黃體酮治療組的不同時(shí)間中除了傷后7d之外,不同時(shí)間點(diǎn)的TSPO水平比較于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表1。

        2.2 OX-42表達(dá)變化

        假手術(shù)組0X-42表達(dá)較少,黃體酮治療組、外傷對(duì)照組大鼠的0X-42水平比較于假手術(shù)組大鼠,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);黃體酮治療組的不同時(shí)間中除了傷后7 d之外,不同時(shí)間點(diǎn)的0X-42水平比較于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表1。

        3 討論

        黃體酮具備一定的腦保護(hù)作用,而且其在臨床上或者是對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均具備腦保護(hù)作用,但是其確切機(jī)理還不明確。近幾年來(lái),TSPO由于參與到中樞神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)病變中逐漸受到重視,一般情況下, TBI之后,其TSPO水平會(huì)出現(xiàn)明顯提升,于小膠質(zhì)細(xì)胞中出現(xiàn)明顯提升,和其活化以及增殖的狀態(tài)具備密切相關(guān)關(guān)系[1]。黃體酮可以抑制TBI后小膠質(zhì)細(xì)胞的活性,減輕炎癥[2]。將腦內(nèi)相關(guān)類(lèi)固醇含量提升,對(duì)于TSPO含量具備降低作用,說(shuō)明早期的TSPO產(chǎn)生提升,對(duì)于小膠質(zhì)細(xì)胞的活化具備促進(jìn)效果,將甾體激素增多,對(duì)增殖進(jìn)行適宜調(diào)節(jié),于后期的時(shí)候,因?yàn)殓摅w類(lèi)激素含量存在明顯提升,通過(guò)反饋?zhàn)饔脤?dǎo)致TSPO的產(chǎn)生減少[3-6],而且,類(lèi)固醇還具備抗炎效果,導(dǎo)致炎癥得到有效緩解[7-9]。

        筆者實(shí)驗(yàn)結(jié)果呈現(xiàn),黃體酮治療組傷后12 h、傷后24 h、傷后3 d、傷后7 d的TSPO分別是(32.88±2.95)、(33.50±3.34)、(21.88±3.04)、(19.75±2.25),黃體酮治療組傷后12 h、傷后24 h、傷后3 d、傷后7 d的OX-42分別是(42.13±3.84)、(38.25±4.13)、(28.25±2.49)、(26.25±1.04),黃體酮治療組中除7d組外,TSPO、OX-42與外傷對(duì)照組明顯降低,TBI之后的小膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)活化以及增殖現(xiàn)象,其OX-42水平以及TSPO水平均出現(xiàn)明顯提升,和小膠質(zhì)細(xì)胞的活化以及增殖也具有一定的關(guān)系;在進(jìn)行黃體酮相關(guān)治療后,早期的OX-42水平和TSPO水平都得到顯著降低。包卿等[10]實(shí)驗(yàn)中,正常組大鼠和假手術(shù)組大鼠的TSPO水平相對(duì)比較少,重型組大鼠0 h、12 h、24 h、3 d、7 d的TSPO水平是(0.94±0.19)、(4.08±0.47)、(3.77±0.27)、(2.71±0.23)、(1.40±0.40),輕型組大鼠0 h、12 h、24 h、3 d、7 d的TSPO水平是(0.97±0.24)、(3.06±0.18)、(3.15±0.23)、(2.35±0.21)、(1.37±0.23),和正常組相對(duì)比,輕型TBI組大鼠和重型TBI組大鼠損傷之后的TSPO水平出現(xiàn)顯著提升,具有顯著差異,重型組大鼠TSPO水平和輕型組大鼠TSPO水平相對(duì)比,具有顯著差異。

        綜上所述,筆者將黃體酮對(duì)于TSPO產(chǎn)生的反饋抑制作用進(jìn)行證實(shí),外源性采取TSPO所介導(dǎo)產(chǎn)生的黃體酮用于TBI的治療中,相關(guān)機(jī)理有可能是對(duì)TSPO產(chǎn)生減少,對(duì)活化的小膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行明顯減少,對(duì)于炎癥具有緩解效果,對(duì)于腦保護(hù)作用具備重要影響作用。不過(guò),對(duì)于黃體酮具體的作用通路和TSPO相關(guān)作用情況尚不明確,需要予以進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)探究。

        [參考文獻(xiàn)]

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        (收稿日期:2017-09-21)endprint

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