李舟，蔡小軍，向錚

（1.溫州出入境檢驗(yàn)檢疫局，浙江 溫州 325027；2.溫州醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，浙江 溫州 325035）

鄰苯二甲酸酯（phthalic acid esters，PAEs）是最常見的一種增塑劑[1]，被廣泛應(yīng)用于玩具、食品包裝材料、藥品包裝材料及醫(yī)療器械等上百萬種產(chǎn)品中。它是一類環(huán)境激素[2]，可通過飲水、進(jìn)食、皮膚接觸和呼吸等途徑進(jìn)入人體[3]，造成內(nèi)分泌失調(diào)，阻害生物體生殖機(jī)能，長期累積會(huì)導(dǎo)致畸形、基因突變和癌變，對(duì)人和動(dòng)物的健康構(gòu)成潛在的危害，是一種不可低估的危險(xiǎn)因素[4]，因此，食品、藥品及其包裝中PAEs的檢測(cè)研究具有非常重要的意義。歐盟、美國，以及我國臺(tái)灣、澳門、香港地區(qū)將塑化劑列入食品、藥品的常規(guī)檢測(cè)范圍，制定了相關(guān)測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)用于PAEs的檢測(cè)[5-6]，已有文獻(xiàn)[7-9]報(bào)道各種物質(zhì)如食品或食品塑料包裝中PEAs化合物的含量測(cè)定。

檢測(cè)PAEs的方法主要有紫外分光光度法（ultraviolet and visible spectrophotometry，UV）、薄層色譜法（thin layer chromatography，TLC）、氣相色譜法（gas chromatography，GC）、高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）等，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）作為PAEs最常用的分析方法，相對(duì)于高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（high performance liquid chromatography-mass spectrometry，HPLC-MS），具有本體干擾小、重復(fù)性好、檢測(cè)快速的優(yōu)點(diǎn)，國標(biāo)規(guī)定采用該方法測(cè)定食品及其包裝中16種PEAs的含量。因此，本研究建立GC-MS同時(shí)測(cè)定16種PAEs化合物的檢測(cè)方法，并將其應(yīng)用于臨床常用藥物及其包裝的PAEs含量測(cè)定。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 儀器與試劑：Agilent7890A-5975C氣相色譜-質(zhì)譜儀（美國Agilent公司），P300H超聲波清洗器（德國Elma公司），分析天平（JBT5374-1991，上海梅特勒-卡利多儀器有限公司），40 mL反應(yīng)瓶；正己烷、乙睛均為色譜純（德國MERCK公司），蒽D10（Anthracene-d10）為內(nèi)標(biāo)物，鄰苯二甲酸二甲酯（dimethyl phthalate，DMP）、鄰苯二甲酸二乙酯（diethyl phthalate，DEP）、鄰苯二甲酸二異丁酯（diisobutyl phthalate，DIBP）、鄰苯二甲酸二丁酯（dibutyl phthalate，DBP）、鄰苯二甲酸二甲氧基乙酯（dimethoxyethyl phthalate，DMEP）、鄰苯二甲酸二（4-甲基-2戊基）酯[bis（4-methyl-2-pentyl）phthalate，BMPP]、鄰苯二甲酸二（2-乙氧基）酯（diethoxyethyl phthalate，DEEP）、鄰苯二甲酸二戊酯（di-N-pentyl phthalate，DPP）、鄰苯二甲酸二己酯（dihexyl phthalate，DHXP）、鄰苯二甲酸丁基芐基酯（benzyl butyl phthalate，BBP）、鄰苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯[bis（2-butoxyethyl）phthalate，DBEP]、鄰苯二甲酸二環(huán)己酯（dicyclohexyl phthalate，DCHP）、鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯[di（2-ethylhexyl）phthalate，DEHP]、鄰苯二甲酸二苯酯（diphenyl phthalate，DOP）、鄰苯二甲酸二正辛酯（dioctyl phthalate，DNOP）、鄰苯二甲酸二壬酯（dinonyl phthalate，DNP）等16種標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥98%，德國Dr.Ehrenstorfer公司）。

1.1.2 藥品及其包裝：板藍(lán)根顆粒及其包裝（浙江藥通醫(yī)藥有限公司），至靈膠囊及其包裝（杭州天緣藥業(yè)有限公司），復(fù)方磺胺甲噁唑片及其包裝（上海信誼藥廠有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 質(zhì)譜條件：色譜與質(zhì)譜接口溫度為280 ℃，電離方式為電子轟擊源（EI），檢測(cè)方式選擇離子掃描模式（見表1），電離能量為70 eV，溶劑延時(shí)5 min。

1.2.2 色譜條件：色譜柱為HP-35 MS；進(jìn)樣口溫度為250 ℃；升溫程序?yàn)槌跏贾鶞?0 ℃，保持1 min，以20 ℃/min升溫至220 ℃，保持1 min，再以5 ℃/min升溫至280 ℃，保持4 min；載氣為氮?dú)猓贿M(jìn)樣方式為不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量1 μL。

1.2.3 定性確證：在儀器條件下，待測(cè)液和標(biāo)準(zhǔn)品選擇離子色譜峰在相同保留時(shí)間處（±0.5%）出現(xiàn)，并且對(duì)應(yīng)質(zhì)譜碎片離子的質(zhì)荷比與標(biāo)準(zhǔn)品一致，其豐度比與標(biāo)準(zhǔn)品相比應(yīng)符合：相對(duì)豐度＞50%時(shí)，允許±10%偏差；相對(duì)豐度20%～50%時(shí)，允許±15%偏差；相對(duì)豐度10%～20%時(shí)，允許±20%偏差；相對(duì)豐度≤10%時(shí)，允許±50%偏差，此時(shí)可定性確證目標(biāo)分析物。

表1 離子掃描模式參數(shù)

1.2.4 定量分析：本實(shí)驗(yàn)采用內(nèi)標(biāo)校準(zhǔn)曲線定量測(cè)定。以各PAEs化合物的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，以樣品和內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程，根據(jù)試樣的峰面積與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量計(jì)算。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 精密稱取0.1 g標(biāo)準(zhǔn)PAEs（16種標(biāo)準(zhǔn)品混合）置10 mL容量瓶，用正己烷溶解、定容搖勻，得到濃度為10 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。使用時(shí)稀釋該標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

2.2 樣品前處理 取藥品或其包裝材料3 g置40 mL反應(yīng)瓶中，加入正己烷10 mL，超聲30 min，40 ℃。之后取出反應(yīng)瓶加入20 mL正己烷，靜置30 min，加入內(nèi)標(biāo)100 μL，來回振搖5次，靜置10 min，GCMS檢測(cè)PAEs的含量。

本實(shí)驗(yàn)選用了正己烷、甲醇、四氫呋喃-乙腈（2∶1）3種溶液作為提取溶劑，利用這3種溶劑分別對(duì)16種PAEs進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表2。由表2可見正己烷作為溶劑時(shí)提取效果最好，因此本實(shí)驗(yàn)采用其作為提取溶劑。

表2 3種不同溶劑提取后提取液中16種PAEs化合物濃度的GCMS分析結(jié)果

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 用正己烷將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液逐級(jí)稀釋成50、100、200、300、500 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在選定的色譜條件和質(zhì)譜條件下進(jìn)行測(cè)定，得到16種PAEs化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液離子選擇色譜圖（見圖1），線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限見表3。結(jié)果表明16種PAEs化合物在50～500 ng/mL范圍內(nèi)具有良好的線性（R2≥0.9991）。以3倍信噪比為方法檢出限，16種PAEs檢出限為10 ppb；以10倍信噪比為方法定量限，16種PAEs定量限為50 ppb。

圖1 16種PAEs化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 ng/mL）離子選擇色譜圖

2.4 回收率的測(cè)定 分別將藥品及其包裝材料剪碎混勻，置于40 mL反應(yīng)瓶中，向反應(yīng)瓶中分別添加水平為0.05、0.10和0.50 mg/kg的16種目標(biāo)化合物，按照2.2的條件進(jìn)行提取、衍生和檢測(cè)，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，利用GC-MS方法測(cè)定的回收率見表4。未檢出的藥品及其包裝材料包括板藍(lán)根顆粒、復(fù)方磺胺甲噁唑片、至靈膠囊、板藍(lán)根顆粒包裝材料、至靈膠囊包裝材料，對(duì)這幾種樣品進(jìn)行加標(biāo)回收，每個(gè)樣品做了9次平行實(shí)驗(yàn)。

2.5 精密度試驗(yàn) 選擇0.05、0.10、0.50 mg/kg 3個(gè)低、中、高濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定，平行3次，計(jì)算精密度。16種PAEs化合物的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為1.12%～8.95%。

2.6 實(shí)際樣品的測(cè)定 對(duì)板藍(lán)根顆粒、至靈膠囊、復(fù)方磺胺甲噁唑片、板藍(lán)根顆粒包裝材料、至靈膠囊包裝材料5種樣品進(jìn)行測(cè)定，每份樣品平行測(cè)定3次，均未檢測(cè)出PAEs的存在。

3 討論

表3 16種PAEs化合物的保留時(shí)間、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

表4 16種PAEs化合物不同濃度下的回收率（%）

PAEs屬于干擾生物體內(nèi)分泌的環(huán)境荷爾蒙類化合物，對(duì)人類的健康構(gòu)成潛在的危害，但是人們一開始并沒有意識(shí)到在由口而入的食品及藥品中會(huì)殘留包裝材料遷入的PAEs類物質(zhì)，直到2011年5月起臺(tái)灣地區(qū)食品中先后檢出DEHP、DINP、DNOP、DBP、DMP、DEP等6種PAEs增塑劑成分，進(jìn)口葡萄酒中檢出包括DIBP、DBP、DEHP等多種塑化劑[10]，藥品中也檢出DIDP。我國醫(yī)藥衛(wèi)生部門隨后檢測(cè)發(fā)現(xiàn)保健品如靈芝孢子粉片和美中清素牌的多種氨基酸片及鈣片、阿司匹林等常用藥均含有PAEs。

本研究建立了測(cè)定藥品及其包裝材料中16種PAEs化合物的GC-MS質(zhì)譜法，采用選擇離子檢測(cè)確證，內(nèi)標(biāo)法定量，為目標(biāo)化合物的定性與定量分析提供了可靠依據(jù)。方法的線性范圍為50～500 ng/mL，相關(guān)系數(shù)≥0.9991；方法的定量限為50 ppb，平均回收率為99.85%～100.10%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于8.95%。采用該方法對(duì)板藍(lán)根顆粒、至靈膠囊、復(fù)方磺胺甲噁唑片、板藍(lán)根顆粒包裝材料、至靈膠囊包裝材料5種樣品進(jìn)行了測(cè)定，其提取液中均未檢測(cè)出PAEs的存在。該方法具有操作簡便、靈敏度好等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)樣品中16種PAEs化合物的測(cè)定有重要意義。

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