黃鉅略 黃承樂 鄭若洋

【摘要】?目的?探討急性白血病骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)的臨床診斷價(jià)值。方法?回顧性分析2013年1月～2018年3月收治的268例急性白血病患者的臨床資料，對(duì)患者進(jìn)行骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析（FAB分型），并與MICM綜合診斷方法（WHO分型）相對(duì)比。結(jié)果?268例急性白血病患者經(jīng)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)確診258例，確診率為96.27%，誤診10例，誤診率為3.73%。13例骨髓原始細(xì)胞為21%～29%，根據(jù)WHO新的分型標(biāo)準(zhǔn)，將原FAB分型的MDS-RAEB-T歸入急性白血病。10例骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)難以分型，經(jīng)骨髓細(xì)胞免疫分型、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)檢測(cè)而確診。10例骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)誤診的急性白血病中，6例FAB誤診為ALL的白血病，過氧化物酶染色陰性，其中3例形態(tài)似淋系，經(jīng)單抗檢測(cè)，伴有髓系、無淋系抗原表達(dá)而診斷為Mo;2例表達(dá)單核細(xì)胞抗原，無淋系抗原而診斷M5;1例L2和1例M1抗原表達(dá)髓系、淋系積分均>2分，定為雜合型白血病。另外，1例FAB誤診M5a患者，過氧化物酶染色陰性，僅有淋系CD19、CD10、CD22抗原表達(dá)而診斷為B-ALL。1例FAB診斷為M3b，經(jīng)染色體核型和融合基因檢測(cè)，診斷為AML伴t（8;21）（q22;q22）（國(guó)內(nèi)為M2b分型）。1例FAB診斷為M2b，經(jīng)染色體核型和融合基因檢測(cè)，診斷為APL。結(jié)論?骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析是診斷急性白血病較為直接、有效的手段之一。在形態(tài)學(xué)分析的基礎(chǔ)上，與細(xì)胞免疫分型、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)相結(jié)合的MICM法可有效提高準(zhǔn)確率。

【關(guān)鍵詞】?急性白血病;骨髓細(xì)胞;形態(tài)學(xué);免疫分型

中圖分類號(hào)：R552?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A?DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2018.06.021

急性白血病是臨床上較為常見的惡性血液疾病之一，其發(fā)病率及致死率均較高，以白血病細(xì)胞惡性、異常性增殖為主，導(dǎo)致細(xì)胞分化成熟障礙[1～2]。早期確定白血病分型及亞型對(duì)后續(xù)治療方案的確定、臨床效果評(píng)價(jià)及預(yù)后具有重要指導(dǎo)價(jià)值。骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析法在1976年被提出[3]，為急性白血病的分型及診斷提供重要依據(jù)。本研究觀察2013年1月～2018年3月我院268例急性白血病骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)診斷結(jié)果，現(xiàn)匯報(bào)如下。

1?資料與方法

1.1?一般資料

回顧性分析2013年1月～2018年3月北京大學(xué)深圳醫(yī)院收治的268例急性白血病患者的臨床資料，對(duì)患者進(jìn)行骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析、免疫分型檢測(cè)。其中男性145例，女性123例;年齡0.5～76歲，平均（43.6±5.8）歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：①患者均符合急性白血病的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4];②患者及家屬均簽署檢查知情同意書;③無嚴(yán)重臟器功能衰竭者;④本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn);⑤患者均為初診，未行抗白血病治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤者;②重要臟器嚴(yán)重功能障礙者;③未簽署研究知情同意書者;④妊娠期或哺乳期婦女。

1.2?方法

1.2.1?形態(tài)學(xué)檢查

根據(jù)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作流程》實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)[5]，對(duì)骨髓及血涂片進(jìn)行瑞氏-吉姆薩染色，在低倍鏡下觀察染色效果和有核細(xì)胞的增生情況，在油鏡下觀察其類型及形態(tài)學(xué)改變，并進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。行過氧化物酶、非特異性酯酶+氟化物抑制試驗(yàn)、糖原等細(xì)胞化學(xué)染色以判定白血病細(xì)胞的來源系別，后根據(jù)FAB診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行急性白血病的分型。

1.2.2?免疫學(xué)檢查

采用EDTA抗凝管對(duì)2 mL骨髓液進(jìn)行抗凝，按比例取抗凝標(biāo)本與相關(guān)抗體相結(jié)合，形成帶有熒光的抗原抗體復(fù)合物，后采用流式細(xì)胞儀測(cè)定其表達(dá)率，得到細(xì)胞群的不同抗原位點(diǎn)表達(dá)情況，從而對(duì)白血病進(jìn)行免疫分型。T系單抗為 CD2、cCD3、CD7等;B 系單抗為CD10、CD19、cCD22、CD79 等;髓系單抗為CD13、CD14、CD15、CD33、CD64、MPO等;巨核單抗為CD41、CD61、CD42b;紅系單抗為CD71。細(xì)胞發(fā)育階段單抗為HLA-DR、CD38、CD34、TdT。設(shè)門試劑：CD45。上述試劑盒均由美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特（Beckman Coulter，Inc.）有限公司提供。

1.2.3?染色體檢查

應(yīng)用肝素鈉對(duì)2～4 mL骨髓液進(jìn)行抗凝，采用直接法、24 h培養(yǎng)法制備染色體，使用G帶技術(shù)進(jìn)行顯帶。核型確診采用1995年《人類細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體制規(guī)定》[6]。

1.3?觀察項(xiàng)目

分析和記錄急性白血病患者骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫分型等情況。

2?結(jié)果

2.1?骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)

268例急性白血病患者經(jīng)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)確診258例，確診率為96.27%，誤診10例，誤診率為3.73%。10例骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)難以分型，經(jīng)骨髓細(xì)胞免疫分型、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)檢測(cè)而確診。見表1。

2.2?免疫分型

10例骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)誤診的急性白血病中，6例FAB分型誤診為急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）的患者，過氧化物酶染色陰性，其中3例形態(tài)似淋系，經(jīng)單抗檢測(cè)，伴有髓系、無淋系抗原表達(dá)而診斷為Mo;2例表達(dá)單核細(xì)胞抗原，無淋系抗原而診斷M5;1例L2和1例M1抗原表達(dá)髓系、淋系積分均>2分，定為雜合型白血病。另外，1例FAB分型誤診為M5a患者，過氧化物酶染色陰性，僅有淋系CD19、CD10、CD22抗原表達(dá)而診斷為B-ALL。1例FAB診斷為M3b，經(jīng)染色體核型和融合基因檢測(cè)，診斷為急性髓性白血?。ˋML）伴t（8;21）（q22;q22）（國(guó)內(nèi)為M2b分型）。1例FAB分型診斷為M2b，經(jīng)染色體核型和融合基因檢測(cè)，診斷為急性早幼粒細(xì)胞白血病（APL）。

2.3?細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)

10例FBA難以分型的病例中，2例染色體核型正常，8例能檢出特征性異常核型。2例急性髓系白血病（M2b和M3b），形態(tài)學(xué)、細(xì)胞化學(xué)染色和細(xì)胞免疫學(xué)不易鑒別，經(jīng)染色體核型和融合基因檢測(cè)，得以確診。

3?討論

急性白血病是危害人類健康較為多見的惡性血液疾病之一，其為惡性、克隆性增殖，細(xì)胞分化阻斷，異常惡性增生，異常細(xì)胞在不同患者中有異質(zhì)性的變化。骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析結(jié)合化學(xué)染色是診斷急性白血病較為重要、基礎(chǔ)的方法[7～8]，骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)在檢查過程中根據(jù)血液病本身的形態(tài)學(xué)特征，結(jié)合臨床資料，從而做出肯定性、符合性的診斷，具有較高的診斷準(zhǔn)確性。

但骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查需要閱片者有豐富的經(jīng)驗(yàn)，易受檢驗(yàn)者的主觀性影響，同時(shí)重復(fù)性檢測(cè)也受到限制[9]。FAB對(duì)急性淋巴細(xì)胞、急性髓系白血病的細(xì)胞化學(xué)染色鑒別診斷主要通過過氧化物酶染色POX而定[10]。由于白血病細(xì)胞高度異質(zhì)性，同一類型白血病在不同患者中，其細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果表現(xiàn)差異較大，常出現(xiàn)染色結(jié)果不典型、臨界表現(xiàn)或結(jié)果與形態(tài)結(jié)果不相符的現(xiàn)象，容易干擾判讀結(jié)果。根據(jù)細(xì)胞表面免疫學(xué)進(jìn)行免疫分型，具有重復(fù)性高、客觀性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，與骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查結(jié)合可提高診斷的準(zhǔn)確性[11]。對(duì)于常規(guī)形態(tài)和細(xì)胞化學(xué)染色特點(diǎn)難以鑒別的Mo以及POX陰性的ALL患者，免疫分型的檢查較為關(guān)鍵，既可分析白血病細(xì)胞的來源，又可判斷白血病所處的具體階段[12]，對(duì)后續(xù)臨床診斷和治療具有重要價(jià)值。此外，對(duì)于M3b、M2b難以通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)判斷的，尚需進(jìn)一步結(jié)合染色體核型分析和分子生物學(xué)檢查進(jìn)行確診。

綜上所述，骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析是診斷急性白血病較為直接、有效的手段之一，臨床上需結(jié)合免疫分型、染色體核型分析和分子生物學(xué)檢查以提高準(zhǔn)確率。

參?考?文?獻(xiàn)

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