黃鴻娜，黃晶晶，毛德文，王振常，潘 哲

(廣西中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，廣西 南寧 530023)

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指除外乙醇和其他明確的損肝因素所致的肝細胞內脂肪過度沉積為主要特征的臨床病理綜合征，目前研究熱點是胰島素抵抗和遺傳易感性密切相關的獲得性代謝應激性肝損傷，包括單純性脂肪肝(SFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)及其相關病因導致的肝硬化[1-3]。絕大部分NAFLD屬于可逆性疾病，早期診斷并給予飲食及運動治療，一般預后良好。目前現(xiàn)代醫(yī)學對 NAFLD缺乏特效的治療藥物，如何阻斷NAFLD進展、改善患者預后已成為研究的熱點。本研究觀察了祛瘀化濁方對NAFDL大鼠脂代謝及肝功能的影響，旨在為其臨床應用提供參考依據(jù)。

1 實驗資料

1.1 實驗動物 健康成年清潔級雄性SD大鼠80只，體質量150～180 g，購于廣西醫(yī)科大學動物實驗中心，合格證號：SCXK(桂)2014-0009。

1.2 藥物與試劑 高脂飼料主要配方由我院實驗中心提供(膽固醇2%+膽酸鈉0.5%+丙硫氧嘧啶0.2%+蔗糖5%+豬油10%+基礎飼料82.3%)。豬油為市售；多烯磷脂酰膽堿膠囊為北京安萬特制藥有限公司生產(國藥準字H20100418，232.5 mg×24粒)；祛瘀化濁方組成：澤瀉15 g、海藻15 g、決明子10 g、浙貝母10 g、丹參15 g、山楂15 g、水飛薊15 g、柴胡6 g，10 g/袋，均由廣西中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院中藥房提供本方顆粒。D-右旋糖酐,上海酶聯(lián)實業(yè)有限公司，批號：140646-201002。鼠用胰島素ELISA試劑盒,博燦生物科技(上海)有限公司。

1.3 主要儀器 PUZS-300型全自動生化分析儀，南京基蛋生物科技有限公司；HWS-24型電熱恒溫水浴鍋，上海齊欣科學儀器有限公司；1455型拜安捷2血糖儀；血糖檢測試紙( 葡萄糖氧化酶法)，拜耳醫(yī)藥保健有限公司，產品批號：1A6591AA；GL-20G-Ⅱ型高速冷凍離心機，上海安亭科學儀器廠生產。

1.4 造模、分組及干預 從80只大鼠中隨機取20只作為正常組，給予普通飲食喂養(yǎng)84 d；其余大鼠均參照文獻[4]方法，給予高脂飼料喂養(yǎng)84 d。將造模成功NAFLD大鼠隨機分為模型組、多烯磷脂酰組、祛瘀化濁湯組，每組20只。多烯磷脂酰組給予多烯磷脂酰膠囊水溶液(3粒/次)灌胃56 d，祛瘀化濁湯組給予祛瘀化濁湯(劑量根據(jù)《人和動物間按體表面積折算的等效劑量比值表》計算，150～180 g大鼠用量為標準體質量人的0.018倍，即10 g×0.018=0.18 g，則每只大鼠每天中藥用量為0.18 g)灌胃56 d，模型組和正常組給予等量生理鹽水灌胃56 d，均3次/d。所有大鼠均提供自來水，自由飲用，并于每天傍晚給予相應飼料(1次/d)供其食用。

1.5 血清生化指標檢測 灌胃結束后所有大鼠均禁食不禁水12 h，于第2天稱質量后經戊巴比妥鈉40 mg/kg 腹腔內麻醉，腹主動脈取血，于3 000 r/min離心15 min分離血清，測定空腹血糖、空腹胰島素水平和肝功能(ALT、AST)、血脂(TG、TC、LDL-C、HDL-C)指標水平，計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)，HOMA-IR=空腹胰島素水平(IU/mL)×空腹血糖水平(mmol/L)/22.5。

1.6 肝臟脂質含量的測定 取血后立即取出完整肝臟，用冷生理鹽水漂洗，拭干，濾紙吸干表面水分，切取肝左葉，放入4% 多聚甲醛固定液中固定。后置于預冷的異丙醇中，參照Floch法，從液氮中取出0.5 g肝組織加入20倍體積的氯仿-甲醛(2∶1)勻漿液，充分剪碎勻漿，氯仿∶甲醛∶蒸餾水比例為2∶2∶1.8。然后向勻漿液中再加入0.1 mL 氯仿充分混勻30 s，再加入0.1 mL蒸餾水充分混勻30 s，渦旋混勻后，將勻漿液3 000 r/min離心20 min，將部分肝組織置于預冷的異丙醇(武漢市國泰化昌化工有限公司)中,冰浴勻漿為10%的勻漿液,4 ℃靜置抽提48 h后3 000 r/min離心10 min,棄上清液，將剩下的肝組織研磨后置于預冷的等滲鹽水中,加等滲鹽水稀釋至濃度為2%后,4 ℃ 3 000 r/min離心10 min,取上清液，制成10%的組織勻漿液，按試劑盒說明書方法測定TG和TC水平。

2 結 果

2.1 各組大鼠血清ALT、AST、TG、TC、LDL-C、HDL-C水平及HOMA-IR比較 模型組大鼠血清ALT、AST、TG、TC、LDL-C水平及HOMA-IR均明顯高于正常組(P均<0.05)，HDL-C水平明顯低于正常組(P<0.05)；多烯磷脂酰組和祛瘀化濁湯組血清ALT、AST、TG、TC、LDL-C水平及HOMA-IR均明顯低于模型組(P均<0.05)，HDL-C水平明顯高于模型組(P均<0.05)，且祛瘀化濁湯組各指標改善情況均明顯優(yōu)于多烯磷脂酰組(P均<0.05)。見表1。

表1 各組大鼠血清ALT、AST、TG、TC、LDL-C、HDL-C水平及HOMA-IR比較

注：①與正常組比較，P<0.05；②與模型組比較，P<0.05；③與多烯磷脂酰組比較，P<0.05。

2.2 各組大鼠肝組織中TC、TG水平比較 模型組大鼠肝組織勻漿中TC、TG水平顯著高于正常組(P均<0.05)，多烯磷脂酰組和祛瘀化濁湯組肝組織勻漿中TC、TG水平顯著低于模型組(P均<0.05)，且祛瘀化濁湯組明顯低于多烯磷脂酰組(P均<0.05)。見表2。

表2 各組大鼠肝組織中TC、TG水平比較

注：①與正常組比較，P<0.05；②與模型組比較，P<0.05；③與多烯磷脂酰組比較，P<0.05。

3 討 論

肝臟是糖原合成、分解及糖異生的主要場所，是胰島素抵抗發(fā)生的主要器官之一。研究表明，胰島素信號傳導減弱或受阻是導致肝臟糖代謝調節(jié)能力下降的主要原因[5-6]。肝臟是胰島素作用的主要靶器官，對機體糖代謝起重要的調節(jié)作用[7]。本研究發(fā)現(xiàn)模型組大鼠血清ALT、AST、TG、TC、LDL-C水平及HOMA-IR均和肝組織勻漿中TC、TG水平明顯高于正常組，HDL-C水平明顯低于正常組。提示NAFLD大鼠胰島素抵抗指數(shù)升高，肝臟糖異生的調控作用減弱，輸出的葡萄糖增多，肝糖原合成作用減弱，加快肝組織脂肪變性。

非酒精性脂肪肝屬于中醫(yī)“痞滿”“積聚”“脅痛”“肝癖”“黃疸”“腹痛”等范疇，主要病因為飲食不節(jié)，過食肥甘厚味，損傷脾胃，肝氣不舒，氣機不暢，脾虛不運，痰瘀互結，積于脅下，日久成病[8-9]。通過臨床經驗并結合前人的研究理論，筆者認為本病以肝郁脾虛、痰濁血瘀證型為多見，其主要病因病機為肝木失于涵養(yǎng)，肝郁不舒，木郁克土，脾胃氣機不暢，升清降濁不利，氣血、痰濁瘀滯，閉阻肝絡，且外邪內侵，正氣虧虛，臟腑功能失調，日久損傷肝絡[10]。祛瘀化濁方中澤瀉利濕化痰，導濁下行；柴胡、郁金取逍遙散之意，針對土虛木郁之病理變化，健脾疏肝，以復脾土運化之職及肝木條達之性；丹參、海藻疏肝活血，健脾化痰，軟堅散瘀；山楂、雞內金消食導滯，化瘀散結；決明子清肝化痰，泄?jié)嵬ū?；諸藥合用，肝脾并調，痰瘀同治，使脾土健運，肝木條達，痰消瘀祛，津液輸布正常，肝癖自復有望?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，丹參中有效成分丹參總酮和總酚酸能增強NAFLD大鼠肝組織中PPARαmRNA的表達，降低血清 TC、TG、ALT、AST水平，改善肝組織病理學形態(tài)[11]；山楂葉總黃酮可通過有效增加超氧化物歧化酶活性，降低丙二醛含量，改善肝內脂質代謝[12]。本研究結果顯示，多烯磷脂酰組和祛瘀化濁湯組血清ALT、AST、TG、TC、LDL-C、HOMA-IR及肝組織勻漿中TC、TG水平均明顯低于模型組，HDL-C水平明顯高于模型組，且祛瘀化濁湯組各指標改善情況均明顯優(yōu)于多烯磷脂酰組。提示祛瘀化濁方祛瘀化濁方能夠改善大鼠脂肪代謝紊亂,在一定程度上延緩大鼠肝臟脂肪沉積，糾正胰島素抵抗，為該藥的臨床應用提供了一定理論依據(jù)。

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