李雪麗，王 偉，王佩佩，弓 銘，鄧 冬，李韶菁，任瑩璐，馬雪玲，趙慧輝

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029；2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京 100700）

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為“不通則痛，不榮則痛”，以平肝熄風(fēng)、清腦開(kāi)竅、活血化瘀、通絡(luò)止痛為主要治療原則[1-2]?！端貑?wèn)·至真要大論》謂“驚者平之”，所以中醫(yī)主要以安神藥來(lái)達(dá)到重鎮(zhèn)安神、養(yǎng)心安神的目的，而近年來(lái)平肝熄風(fēng)藥、補(bǔ)虛藥、活血化瘀藥、滲濕利尿藥、清熱藥、解表藥、開(kāi)竅藥等的鎮(zhèn)靜作用逐漸被人們發(fā)現(xiàn)且證實(shí)，相關(guān)研究報(bào)道也越來(lái)越多[3]。五味降壓散由地骨皮、葛根、丹參、山楂、牛蒡根5味藥組成，為民間降壓驗(yàn)方。方中地骨皮涼血除蒸，清肺降火；葛根辛散發(fā)表以退熱，長(zhǎng)于緩解外邪郁阻、經(jīng)氣不利、筋脈失養(yǎng)所致的項(xiàng)背強(qiáng)痛；丹參活血調(diào)經(jīng)，祛瘀止痛，除煩安神；山楂行氣散結(jié)止痛，通氣活血止痛；牛蒡根疏風(fēng)散熱，解毒消腫。前期在五味降壓散的降壓實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)該方對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的狂躁?duì)顟B(tài)有一定的改善[4-5]。因此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)五味降壓散鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜作用進(jìn)行進(jìn)一步研究。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)ICR小鼠，體質(zhì)量18～22 g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（京）2012-0001。

1.2實(shí)驗(yàn)藥物與試劑 五味降壓散藥物組成為地骨皮3 g，葛根 3 g，丹參 3 g，生山楂3 g，牛蒡根3 g。中藥飲片均購(gòu)自北京同仁堂藥店。其他藥物及試劑包括：阿司匹林腸溶片（拜耳醫(yī)藥保健有限公司，生產(chǎn)批號(hào)為BJ28179）；氯化鈉注射液（石家莊四藥有限公司，生產(chǎn)批號(hào)為1601091909）；地西泮注射液（天津金耀藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)為1503141）；冰醋酸（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，生產(chǎn)批號(hào)為20131114）。

1.3實(shí)驗(yàn)儀器 智能熱板儀（RB-200，成都泰盟軟件有限公司）；熱刺痛儀（PL-200，成都泰盟軟件有限公司）；懸尾儀（TST-100，成都泰盟軟件有限公司）；電子天平（JY6001，上海精科公司天平廠）。

1.4實(shí)驗(yàn)方法 按照動(dòng)物與人體表面積換算公式計(jì)算小鼠五味降壓散試用劑量為原生藥2.75 g/kg，本實(shí)驗(yàn)設(shè)置小鼠五味降壓散用藥低、中、高劑量均為試用劑量的 1、2、4 倍，即 2.75、5.5、11.0 g/kg。小鼠阿司匹林給藥劑量為55 mg/kg，小鼠地西泮注射液給藥劑量為1.8 mg/kg。

1.4.1醋酸扭體法實(shí)驗(yàn) ICR小鼠，雄性，按體質(zhì)量隨機(jī)分成5組，分為生理鹽水對(duì)照組（9只）、阿司匹林陽(yáng)性藥組（9只）、五味低劑量組（9只）、五味中劑量組（9只）、五味高劑量組（10只）。各組均灌胃給藥，每日1次，連續(xù)給藥5 d，于末次給藥后將0.6%醋酸注入小鼠腹腔內(nèi)，沉積在臟層和壁層腹膜，引起深部較大面積較長(zhǎng)時(shí)間的炎性疼痛，致使小鼠出現(xiàn)腹部?jī)?nèi)凹，軀干與后肢伸張，臀部高起的行為反應(yīng)。觀察注射醋酸后15 min內(nèi)扭體次數(shù)，計(jì)算抑制率作為比較指標(biāo)。抑制率（%）=（陰性對(duì)照組扭體次數(shù)-給藥組扭體次數(shù)）/陰性對(duì)照組扭體次數(shù)×100%。

1.4.2熱刺激法實(shí)驗(yàn) ICR雌性小鼠，按體質(zhì)量隨機(jī)分為5組，分為生理鹽水對(duì)照組（11只）、阿司匹林陽(yáng)性藥組（10只）、五味低劑量組（10只）、五味中劑量組（10只）、五味高劑量組（10只）。各組均灌胃給藥，每日1次，連續(xù)給藥3 d。分別于給藥前及給藥后30、90 min，將小鼠置于熱刺痛儀上部容器中，待小鼠平靜之后，將紅外燈對(duì)準(zhǔn)小鼠足底，記錄小鼠因刺痛而移開(kāi)的時(shí)間。

1.4.3懸尾法實(shí)驗(yàn) ICR小鼠，雄性，按體質(zhì)量隨機(jī)分成5組，分為生理鹽水對(duì)照組（10只）、地西泮陽(yáng)性藥組（10只）、五味低劑量組（9只）、五味子中劑量組（10只）、五味高劑量組（10只）。各組均灌胃給藥，每日1次，連續(xù)給藥3 d。分別于給藥前與給藥后30、60、90 min，固定小鼠尾部使其頭向下懸掛，兩端用擋板隔開(kāi)小鼠視線，利用圖像跟蹤系統(tǒng)記錄5 min內(nèi)小鼠懸尾狀態(tài)過(guò)程中的一系列參數(shù)。

1.5統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較進(jìn)行單因素方差分析，組間比較若方差齊可用LSD法檢驗(yàn)，若方差不齊可用Dunnett’s T3 法檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)扭體次數(shù)、抑制率 阿司匹林及五味降壓散中劑量能夠顯著減少小鼠的扭體次數(shù)（P＜0.05）。見(jiàn)表 1。

表1 各組小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)情況比較（±s）

表1 各組小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)情況比較（±s）

注：與生理鹽水對(duì)照組比較，*P＜0.05。

組別 n 15 min扭體次數(shù)（次） 抑制率（%）生理鹽水對(duì)照組 9 40.9±10.6 -阿司匹林陽(yáng)性藥組 9 30.8±9.4* 31.0五味低劑量組 9 33.0±11.8 23.9五味中劑量組 9 30.9±8.6* 28.6五味高劑量組 10 32.9±10.2 25.9

2.2小鼠熱刺激法鎮(zhèn)痛作用比較 生理鹽水對(duì)照組小鼠的痛閾值給藥前后無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；五味降壓散低劑量在給藥時(shí)間達(dá)到90 min時(shí)，小鼠的痛閾值明顯高于給藥前小鼠的痛閾值；五味降壓散高劑量給藥30、90 min時(shí)小鼠痛閾值均明顯高于給藥前小鼠痛閾值（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組小鼠熱刺激實(shí)驗(yàn)情況比較±s） 分

表2 各組小鼠熱刺激實(shí)驗(yàn)情況比較±s） 分

注：與給藥前比較，*P＜0.05。

組別 n 痛閾給藥前 給藥30 min 給藥90 min生理鹽水對(duì)照組 11 5.7±1.4 5.8±1.1 5.9±1.5阿司匹林組 10 3.7±1.6 4.4±0.7 5.6±1.7*五味低劑量組 10 4.7±1.3 5.9±2.2 7.1±1.2*五味中劑量組 10 5.3±2.1 6.9±1.5 7.2±2.1五味高劑量組 10 4.0±1.4 5.7±1.1* 5.8±1.1*

2.3小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)鎮(zhèn)靜作用 對(duì)照組給藥前后無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，地西泮給藥30、60、120min時(shí)小鼠5min內(nèi)懸尾活動(dòng)時(shí)間與給藥前和對(duì)照組比較，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；五味降壓散高劑量給藥120 min時(shí)小鼠5 min內(nèi)懸尾活動(dòng)時(shí)間和給藥前相比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），表明一定劑量的五味降壓散可以減少5 min懸尾實(shí)驗(yàn)中小鼠的活動(dòng)時(shí)間。見(jiàn)表3。

表3 各組小鼠5 min內(nèi)懸尾實(shí)驗(yàn)情況比較（±s）s

表3 各組小鼠5 min內(nèi)懸尾實(shí)驗(yàn)情況比較（±s）s

注：與給藥前比較，*P＜0.05。

組別 n 給藥前 給藥30 min給藥60 min給藥120 min生理鹽水對(duì)照組 10 227.2±54.7 233.2±53.4 215.4±63.8 215.6±67.4地西泮陽(yáng)性藥組 10 245.2±50.9 111.0±74.4*129.7±57.7*167.9±53.2*五味子低劑量組 9 250.2±69.8 257.0±32.8 243.8±43.9 239.0±49.2五味子中劑量組 10 280.3±20.0 296.8± 4.5*291.0±13.1 291.9± 7.6五味子高劑量組 10 263.5±23.0 267.5±22.7 265.1±26.1 200.6±63.1*

3 討論

疼痛是許多疾病的癥狀，是機(jī)體受到傷害性刺激時(shí)的一種保護(hù)性反應(yīng)，并伴有不愉快的情緒反應(yīng)。疼痛由體感和情感兩種成分組成。西醫(yī)學(xué)上，嗎啡及其類(lèi)似物對(duì)疼痛的兩種成分，特別是情感成分具有獨(dú)特的抑制作用；解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥對(duì)疼痛的情感成分幾乎無(wú)效。鎮(zhèn)靜藥一般能引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)輕度抑制，使患者由興奮、激動(dòng)和躁動(dòng)轉(zhuǎn)為安靜的藥物?，F(xiàn)代藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究表明，地骨皮能明顯抑制小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，提高鼠痛閾值，具有鎮(zhèn)痛作用[6]。一定劑量的葛根素對(duì)神經(jīng)病理性痛具有明顯的鎮(zhèn)痛作用；葛根素與嗎啡或曲馬多小劑量聯(lián)合應(yīng)用可用于慢性神經(jīng)病理性痛的臨床治療[7-8]。丹參酮ⅡA不但可通過(guò)抑制NF－κB信號(hào)通路提高神經(jīng)病理性痛大鼠痛閾值，而且具備安神鎮(zhèn)靜的作用[9-11]。牛蒡提取物有明顯的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜作用[12]。

本次研究，通過(guò)小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，五味降壓散中劑量能夠顯著減少小鼠的扭體次數(shù)，表示五味降壓散中劑量具有一定的外周鎮(zhèn)痛作用。通過(guò)小鼠熱刺激實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，五味降壓散的低劑量給藥90 min時(shí)、高劑量給藥30 min和90 min時(shí)均能顯著延長(zhǎng)小鼠的痛閾值，表明五味降壓散在一定劑量下、給藥一定時(shí)間后具有中樞鎮(zhèn)痛作用。通過(guò)懸尾實(shí)驗(yàn)說(shuō)明五味降壓散高劑量在給藥120 min時(shí)具有一定的鎮(zhèn)靜作用。

綜上所述，五味降壓散在一定劑量下、給藥達(dá)到一定時(shí)間后具有鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜作用。不同劑量，表現(xiàn)出不同強(qiáng)度的外周鎮(zhèn)痛、中樞鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜作用。作為降壓驗(yàn)方，五味降壓散的降壓作用可能與鎮(zhèn)靜作用有一定的相關(guān)性，該鎮(zhèn)靜作用可能會(huì)有助于其降壓作用的發(fā)揮。臨床上也有部分高血壓患者通過(guò)調(diào)整睡眠質(zhì)量而引起血壓下降的現(xiàn)象[13]。因此推測(cè)鎮(zhèn)靜作用可能是引起血壓下降的原因之一，當(dāng)然這一假設(shè)還需在以后的實(shí)驗(yàn)中深入進(jìn)行驗(yàn)證。

[1] 方 選,李昇剛,扆雪濤,等.清腦鎮(zhèn)痛液的鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志,2012,28(11):846-848.

[2]陳震霖,張景明.《內(nèi)經(jīng)》對(duì)疼痛內(nèi)涵及分類(lèi)的認(rèn)識(shí)[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2009,20(8):2089-2090.

[3] 王 瓊,王立為,劉新民.常用鎮(zhèn)靜中藥配伍和藥理研究概況[J].中國(guó)中藥雜志,2007,32(22):2342-2346.

[4] 鄧 冬,趙慧輝,李雪麗,等.五味降壓散對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓、血脂的影響[J].中醫(yī)學(xué)報(bào)，2017,32(232):1679-1682.

[5]鄧 冬.五味降壓散的藥效學(xué)研究及作用機(jī)制的探討[D].北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2017.

[6] 衛(wèi)琮玲,閆杏蓮,柏 李.地骨皮的鎮(zhèn)痛作用[J].中草藥,2000,31(9):688-689.

[7] 羅敬華,曾曉艷,范桂香,等.葛根素對(duì)神經(jīng)病理性痛模型小鼠的鎮(zhèn)痛作用[J].西北藥學(xué)雜志,2013,28(1):48-50.

[8] 段美婷,王 婧,余 婧,等.葛根素與阿片類(lèi)藥物聯(lián)合應(yīng)用對(duì)神經(jīng)病理性痛的鎮(zhèn)痛作用[J].西北藥學(xué)雜志,2015,30(2):162-164.

[9]吳小精.丹參酮ⅡA磺酸鈉對(duì)神經(jīng)病理性痛大鼠脊髓CX3CR1、NF-κB 及 TNF-αmRNA 表達(dá)的影響[D].蘭州:蘭州大學(xué),2015.

[10]周奇韜,李 軍.丹參酮ⅡA磺酸鈉對(duì)神經(jīng)病理性疼痛大鼠痛閾影響的研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技,2016,23(3):276-278.

[11]尹 創(chuàng).一測(cè)多評(píng)法測(cè)定棗仁安神膠囊中丹參酮ⅡA、五味子醇甲與五味子醇乙的含量[J].安徽醫(yī)藥,2016,20(8):1494-1497.

[12]徐 力.牛蒡提取物的鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜作用研究[J].中國(guó)醫(yī)藥指南,2011,9(20):244-245.

[13]郭瀟繁,張曉宇,王 軍,等.睡眠時(shí)間與高血壓關(guān)系的薈萃分析[J].中華高血壓雜志,2013,21(9):748-754.