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高血壓(essential hypertension，EH)是目前臨床上最常見的心血管疾病之一。隨著人類社會的不斷發(fā)展和人們生活方式的轉(zhuǎn)變，該病的發(fā)病率、患病率呈逐漸上升的趨勢；若血壓控制不佳，將會導(dǎo)致心、腦、腎等重要靶器官的損害，甚至最終導(dǎo)致冠心病、心肌梗死、腦卒中、終末期腎病等嚴(yán)重疾病，給人類的健康帶來巨大威脅。

近年來，高血壓病人的勃起功能障礙 (erectile dysfunction，ED)問題日益引起臨床重視。有統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，高血壓病人同時患有勃起功能障礙的比例遠高于普通人群[1]，高血壓病人中男性病人同時伴隨有ED 比例高達55.5%[2]。更值得注意的是，高血壓病人中已經(jīng)接受治療的病人，其ED發(fā)生的比例甚至高于高血壓未開始治療的病人[1]，這一結(jié)果可能與目前降血壓西藥所引起和(或)加重的勃起功能障礙密切相關(guān)[3]。

目前的降血壓西藥主要包括：血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)、血管緊張素Ⅱ受體(AngⅡ)拮抗劑(ARB)、β- 受體阻滯劑(β- B)、鈣通道阻滯劑(CCB)、噻嗪類利尿劑(Thiazine Diuretic)等幾大類藥物。高血壓伴有ED嚴(yán)重影響生理心理健康、日常工作、生活質(zhì)量及家庭和諧，影響病人的治療依從性及降壓藥物療效，影響高血壓治療的預(yù)后和轉(zhuǎn)歸。研究發(fā)現(xiàn)，目前降血壓藥物可能引起勃起功能障礙的種類中，以β- 受體阻滯劑和噻嗪類利尿劑等為最多。有報道認為血管緊張素Ⅱ拮抗劑和ACEI有助于改善高血壓引起的ED[4]，因此，若能尋找到既可以協(xié)助降低血壓又能幫助改善勃起功能的藥物，提高高血壓病人的生活質(zhì)量，逐漸成為近些年來高血壓藥物研究的新關(guān)注點。

廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院心血管科是國家臨床重點?？啤＝陙硪恢辈捎弥嗅t(yī)中藥辨證治療高血壓，臨床實踐顯示中醫(yī)藥的療效確切，而且安全性高。補清結(jié)合法中成藥補腎益心片是陳宏珪教授經(jīng)驗方。該藥物主要由淫羊藿和車前子組成，淫羊藿的藥性偏溫，具有補腎壯陽之功；車前子的藥性偏涼，具有清肝利水之力。兩者配伍，一溫一涼、一補一清，具有補腎清肝、補清結(jié)合法的功效。補腎益心方針對臨床上常見的男性高血壓勃起功能障礙療效良好，對降血壓藥物所引起勃起功能障礙有較理想的治療效果，并且對輕中度高血壓也具有明確的降壓作用。補腎益心片的降壓機制可能與其促進NO合成和分泌、車前子所具有的明確利尿作用等密切有關(guān)[5- 9]。為探索補清結(jié)合法中成藥補腎益心片對原發(fā)性高血壓大鼠(SHR)的降血壓作用和其改善雄性SHR大鼠勃起功能的作用，課題組設(shè)計了下列實驗。

1 材料與方法

1.1 動物 選擇8周齡的SPF級雄性SHR大鼠16只，體重160 g～190 g，均購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，實驗動物許可證號為 SCXK(京)2012—0001。動物實驗地點選在廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院SPF級動物實驗中心，實驗單位使用許可證號：SYXK(粵)2013—0092。正式實驗前，先適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.2 藥品、試劑和儀器 補腎益心片購自廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中成藥房，成藥每1片相當(dāng)于原生藥約5 g，該藥是我院我科的特色院內(nèi)制劑，藥品批準(zhǔn)文號：粵藥制字 Z20070847。陽性對照藥采用纈沙坦膠囊(商品名：代文，北京諾華制藥有限公司，每粒80 mg，國藥準(zhǔn)字H20040216)。阿撲嗎啡(APO)25 mg購自廣州外顯子生物技術(shù)有限公司。Rat Ang(1- 7) ELISA Kit試劑盒(批號BPE36118)由上海浩本生物科技有限公司分裝。主要設(shè)備和儀器包括：上海佑科儀器儀表有限公司的VIS- 721型可見光分光光度計；上海奧爾科特公司的ALC- NIBP大鼠尾動脈測壓儀系統(tǒng)；長沙湘智離心機儀器有限公司的TG- 16W型臺式離心機；美國伯樂BIO- RAD公司的iMARK酶標(biāo)儀等。

1.3 實驗方法 各組大鼠在適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，稱凈重，并在藥物干預(yù)前先進行尾動脈測壓，經(jīng)測量證實均為原發(fā)性高血壓大鼠再進入正式實驗。

1.3.1 分組及給藥 將SHR大鼠按隨機數(shù)字表分為3組。A組為補腎益心片組，B組為纈沙坦組，C組為模型對照組。 各組分別予以相應(yīng)處理，A組即補腎益心片(中藥復(fù)方)組，共5只，先將5片補腎益心片溶于生理鹽水25 mL中，按照25 g/ kg (約成人用量的20倍)予以灌胃，每天1次，持續(xù)4周。B組即纈沙坦組：共5只，先將纈沙坦膠囊80 mg每粒，溶于生理鹽水28 mL中，按照4 mg/kg (約成人用量的20倍)予以灌胃，每天1次，持續(xù)4周。C組即模型對照組(SHR大鼠)，共6只，常規(guī)飼養(yǎng)，予生理鹽水灌胃，每只予以灌胃2 mL，每天1次，持續(xù)4周。藥物干預(yù)前及干預(yù)4周后，分別測量無創(chuàng)尾動脈壓，并記錄大鼠血壓變化。用大鼠尾動脈測壓儀測定大鼠清醒狀態(tài)下的尾動脈血壓。夾尾法測量大鼠尾動脈收縮壓(SBP)方法：將大鼠置于儀器配套的固定約束籠中，置于30℃恒溫箱中預(yù)熱15 min，待大鼠完全安靜后，將鼠尾套袖帶放置于鼠尾的根部進行測量，數(shù)值穩(wěn)定后，出現(xiàn)的第一個血壓波值即為收縮壓。

1.3.2 大鼠性活動(勃起功能)觀察 勃起功能測定方法采用Heaton方法進行。小劑量頸部皮下注射100 μg/kg阿樸嗎啡(APO)即可引起正常大鼠100%的陰莖勃起。在本實驗中，將每只SHR大鼠在注射適量的APO后觀察30 min，陰莖頭充血及末端陰莖體露出為勃起1次，記錄每只大鼠陰莖勃起次數(shù)和每組大鼠的勃起率數(shù)據(jù)，并用陰莖勃起次數(shù)作為評價大鼠性活動功能的主要指標(biāo)。

1.3.3 動物實驗取材 動物實驗結(jié)束時，采用10%的水合氯醛腹腔注射麻醉SHR大鼠，局部消毒后再剪下大鼠陰莖，置于干凈離心管中，放置在-20℃條件下保存。采用BCA蛋白定量法分別測定大鼠陰莖海綿體組織一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)的含量；采用ELISA法檢測Ang(1- 7)的含量。

2 結(jié) 果

2.1 藥物干預(yù)后對SHR大鼠性活動(勃起功能)的影響 治療前各組間均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。治療后，補腎益心片組和纈沙坦組勃起次數(shù)均明顯增多，與模型對照組比較，兩組均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。治療后，補腎益心片組、纈沙坦組兩兩比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。提示補腎益心片和纈沙坦均具有確切的改善SHR勃起功能的作用。詳見表1。

表1 各組勃起次數(shù)比較(±s) 次

2.2 藥物干預(yù)后對一氧化氮合酶的影響 補腎益心片組、纈沙坦組陰莖海綿體的NOS數(shù)值均有明顯升高，與模型對照組進行比較，兩組均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；補腎益心片組與纈沙坦組兩兩比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表2。

表2 各組一氧化氮合酶比較(±s)

2.3 藥物干預(yù)后對一氧化氮的影響 補腎益心片組、纈沙坦組陰莖海綿體的NO數(shù)值均有明顯升高，與SHR模型對照組比較，兩組均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，提示補腎益心片、纈沙坦均具有降壓作用。治療后補腎益心片組與纈沙坦組，兩兩比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。詳見表3。

表3 各組藥物干預(yù)后對一氧化氮的影響(±s)

2.4 干預(yù)后對Ang(1- 7)的影響 補腎益心片組、纈沙坦組與SHR模型對照組各組之間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；補腎益心片組與纈沙坦組之間兩兩比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表4。

表4 各組干預(yù)后對Ang(1- 7)的影響(±s)

3 討 論

高血壓病根據(jù)其臨床特點屬于祖國醫(yī)學(xué)眩暈、頭痛等范疇，多數(shù)醫(yī)家從肝腎論證。現(xiàn)代社會的人群，經(jīng)常進食過多肥膩之品，內(nèi)傷脾胃，繼而熱盛傷陰，再加上睡眠時間不足，更易傷陰，易于發(fā)展成肝腎虧虛證型。勃起功能障礙屬于祖國醫(yī)學(xué)陽痿、早泄等范疇，歷代醫(yī)家亦多從肝腎論證。肝主疏泄而藏血，肝主筋；腎主水液而藏精，腎主骨，且為先天之本。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)也逐漸認識到，心血管疾病與ED有時常常并存，二者存在著一些共同的致病因素和發(fā)病機制，在治療上常常關(guān)系密切。目前在臨床上治療ED的西地那非最早研發(fā)時就是用來治療心血管疾病的。

SHR大鼠是高血壓實驗研究中最常用的模型，SHR在疾病發(fā)展階段也形成典型的高血壓心血管病變[10]。原發(fā)性高血壓大鼠情緒比較緊張，小便量少偏黃，大便偏干且顆粒小，突眼較明顯，心率較快，痛覺較敏感等，綜合SHR的這些行為特征和體征，通過臨床觀察發(fā)現(xiàn)，高血壓病人多表現(xiàn)出頭痛眩暈、面紅目赤、煩躁易怒、大便偏干、小便短赤等特征；可以初步判定SHR大鼠模型的早期高血壓癥狀與傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)中肝腎虧虛、肝火亢盛型高血壓病人的病例特征十分類似[11]。而大鼠交配實驗和勃起功能觀察在科學(xué)研究中，也是被廣泛地運用于雄性大鼠的性行為評價和機制研究，是評價實驗動物性功能的重要觀察指標(biāo)[12]。高血壓可以引起勃起功能障礙，高血壓損害了SHR大鼠的性欲和性喚醒能力，這在臨床實踐和動物模型中都得到了證實。既往有實驗研究表明，一氧化氮可導(dǎo)致陰莖海綿體血管平滑肌舒張，血管管徑增加，動脈血流加速，靜脈血液回流也有一定增加[13- 14]，高血壓大鼠陰莖海綿體中NO、NOS的含量較正常大鼠是偏低的[13- 15]，其陰莖海綿體組織之內(nèi)的NOS降低可能是SHR勃起功能下降，從而發(fā)生ED的機制之一，NO，NOS是治療高血壓性ED的靶點之一。

本研究結(jié)果顯示，經(jīng)過治療后，SHR大鼠陰莖海綿體組織中的NO、NOS含量得到一定程度的升高，纈沙坦組及補腎益心片組與模型對照組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義，提示經(jīng)過補腎益心片或纈沙坦等藥物治療后通過升高陰莖海綿體組織中的NO，NOS含量來發(fā)揮藥物的治療作用。補腎益心片組與纈沙坦組之間兩兩比較NO含量也有統(tǒng)計學(xué)意義。補腎益心片與纈沙坦均可提高陰莖海綿體中Ang(1- 7)含量，均優(yōu)于模型對照組；但補腎益心片組與纈沙坦組之間無統(tǒng)計學(xué)意義。

本研究探討了從ACE2- Ang(1- 7)- MAS軸的角度研究補腎益心片對高血壓大鼠的影響。研究發(fā)現(xiàn)補腎益心片與血管緊張素受體Ⅱ拮抗劑類藥物有類似功效，對大鼠陰莖海綿體中的NO，NOS，Ang(1- 7)等指標(biāo)具有明顯的升高效應(yīng)，并可以改善SHR大鼠的勃起功能，對于改善抗高血壓藥物使用的依從性和改善生活質(zhì)量具有積極意義。

本研究結(jié)果有助于闡明補清結(jié)合法中成藥補腎益氣片降血壓的微觀機制，補腎益心片改善高血壓性ED的作用機制，改善降血壓西藥本身所引起ED的可能機制，為進一步研制具有明確降壓作用和保護心、腦、腎等靶器官作用的中成藥奠定了基礎(chǔ)。

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