楊 俊，胡如芳

（衡陽(yáng)市公安局 刑偵支隊(duì)，湖南 衡陽(yáng)421001）

Goldeneye 25A身份識(shí)別系統(tǒng)（基點(diǎn)認(rèn)知技術(shù)（北京）有限公司）是在Goldeneye 20A身份識(shí)別系統(tǒng)的基礎(chǔ)上，新增加了4個(gè)在中國(guó)人群中多態(tài)性豐富的歐洲核心基因座（D1S1656，D2S441，D10S1248，D19S253）以及一個(gè)用于排除因 Amelogenin（Amel）等位基因丟失造成性別誤判的Y-STR基因座DYS391[1]。該試劑盒可以一次完成23個(gè)常染色體STR基因座、一個(gè)性別基因座以及一個(gè)Y-STR基因座，兼容了歐洲及美國(guó)的數(shù)據(jù)庫(kù)建設(shè)要求，在五色熒光檢測(cè)的基礎(chǔ)上盡量多的獲取遺傳信息。鑒于該試劑盒尚無在回族人群中進(jìn)行群體數(shù)據(jù)調(diào)查，本研究采用這一身份識(shí)別系統(tǒng)對(duì)200名回族個(gè)體的遺傳多態(tài)性進(jìn)行調(diào)查，以期為法醫(yī)學(xué)應(yīng)用及研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

表1 Goldeneye 25A身份識(shí)別系統(tǒng)中STR基因座在回族人群中的等位基因及頻率分布（n=200）

1 材料與方法

1.1 樣本

本研究共采集200名回族健康自愿者的血樣，其中男性100名，女性100名。對(duì)每名志愿者均進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)告知，并簽署知情同意書。

1.2 試劑與儀器

Goldeneye 25A身份識(shí)別系統(tǒng)（基點(diǎn)認(rèn)知技術(shù)（北京）有限公司）、9700型擴(kuò)增儀和3130 XL型遺傳分析儀（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）。

1.3 PCR擴(kuò)增和STR分型

采用Chelex-100法進(jìn)行血樣DNA的提取[2]。按照說明書標(biāo)準(zhǔn)體系對(duì)其中包含的23個(gè)常染色體STR基因座、DYS391基因座和 Amelogenin進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物變性后在3130 XL型遺傳分析儀上進(jìn)行毛細(xì)管電泳，用GeneMapper ID v3.2.1軟件對(duì)STR基因座進(jìn)行分型。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法

采用PowerMarker v3.25軟件[3]對(duì)試劑盒中涉及的23個(gè)常染色體STR基因座進(jìn)行Hardy-Weinberg（H-W）平衡檢驗(yàn)和等位基因分布頻率的計(jì)算；根據(jù)等位基因頻率，進(jìn)行法醫(yī)學(xué)參數(shù)（個(gè)體識(shí)別能力、雜合度、非父排除率和多態(tài)信息含量）計(jì)算。對(duì)其中的DYS391基因座采用直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行等位基因頻率的調(diào)查，基因變異度和父權(quán)排除概率的計(jì)算參見文獻(xiàn)[4]。

2 結(jié)果與討論

本次檢測(cè)中共涉及200份樣本，其中100份男性樣本在DYS391基因座均檢測(cè)到1個(gè)等位基因，Amel檢測(cè)結(jié)果為X/Y，100份女性樣本在DYS391基因座檢測(cè)結(jié)果均為陰性，Amel檢測(cè)結(jié)果為X/X。

經(jīng)H-W平衡檢驗(yàn)，23個(gè)基因座的檢驗(yàn)p值均大于0.05，等位基因頻率分布見表1，法醫(yī)學(xué)相關(guān)參數(shù)見表2。其中，檢測(cè)到最多等位基因的基因座為Penta E，本次共檢測(cè)到19個(gè)，個(gè)體識(shí)別能力達(dá)0.9848，非父排除率為0.8162，多態(tài)信息含量為0.9060。但是在CODIS基因座D3S1358上僅檢測(cè)到5種等位基因，且等位基因15和16在人群中的頻率總和達(dá)0.66。檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)TPOX和TH01基因座在回族人群中的多態(tài)性最差，多態(tài)信息含量分別為 0.6338和0.6411，這一檢測(cè)結(jié)果與Sinofiler檢測(cè)試劑盒中嘗試采用多態(tài)性更為豐富的D12S391和D6S1043基因座替代TPOX和TH01的初衷一致[5]。經(jīng)連鎖不平衡檢驗(yàn)，Goldeneye 25A身份識(shí)別系統(tǒng)中含有的23個(gè)常染色體STR基因座之間相互獨(dú)立，采用乘積定律計(jì)算，累積個(gè)體識(shí)別概率為1-6.88×10-29，累積非父排除概率為1-7.67×10-11，可以應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)個(gè)體識(shí)別及親權(quán)鑒定案件中。對(duì)其中含有的Y-STR基因座共檢測(cè)到6種等位基因，在回族人群中的基因變異度為0.4547，父權(quán)排除概率為0.4524，在樣本的性別判斷及父系關(guān)系上可以輔助提供一定的遺傳信息。以上數(shù)據(jù)均表明該身份鑒定系統(tǒng)在回族人群中遺傳信息豐富，可以為法醫(yī)學(xué)實(shí)際檢案及建庫(kù)應(yīng)用。

表2 Goldeneye 25A身份識(shí)別系統(tǒng)中23個(gè)常染色體STR基因座在回族人群中的法醫(yī)學(xué)參數(shù) （n=200）

[1]Suhua Zhang， Yingnan Bian， Huaizhou Tian， et al.Development and Validation of a new STR 25-plex Typing System[J].Forensic Science International:Genetics，2015，（17）：61-69.

[2]Walsh PS，Petzger DA，Higuchi R.Chelex-100 as Medium for Simple Extraction of DNA for PCR-based Typing from Forensic Material[J].Biotechniques， 1991，（10）:506-513.

[3]Liu K， Muse SV.（2005） PowerMarker:an Integrated Analysis Environment for Genetic Marker Analysis[J].Bioinformatics， 2005，（21）：2128-2129.

[4]Buckleton JS，Triggs CM，Walsh SJ.Forensic DNA Evidence Interpretation[M].CRC Press， Boca Raton， FL， 2005.

[5]張茂修，韓淑毅，高洪梅，等.山東漢族人群19個(gè)STR基因座的遺傳多態(tài)性[J].法醫(yī)學(xué)雜志，2013，29 （6）:440-446.