周平 鄭強(qiáng) 胡深 談暠媛 王峻

摘要：探討了利用QuEChFRS凈化柱快速處理飼料樣品，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀準(zhǔn)確測(cè)定豬濃縮飼料、精料補(bǔ)充料、預(yù)混合飼料等不同飼料樣品中金霉素、土霉素含量的可行性，結(jié)果表明：該方法試驗(yàn)結(jié)果的相對(duì)平均偏差在2.09%～3.74%，回收率在71.5%～83.7%，說明該方法準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，可用于飼料中金霉素、土霉素含量的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法;飼料;金霉素;土霉素;測(cè)定

中圖分類號(hào)：S859.796;TQ465.4? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? 文章編號(hào)：1007-273X（2018）12-0007-02

金霉素、土霉素均為四環(huán)素類抗生素藥，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌均有抑制作用，是一種高效廣譜抗生素，普遍用于動(dòng)物各種傳染性疾病的治療，是常用的生產(chǎn)和臨床用抗生素藥物，也具有良好的促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的作用，常應(yīng)用于飼料添加，但長(zhǎng)期使用會(huì)產(chǎn)生耐藥性和藥物殘留[1]。為規(guī)范飼料中金霉素、土霉素的使用，2005、2008年我國(guó)分別頒布了飼料中金霉素、土霉素的高效液相色譜法測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)[2，3]，部分地區(qū)也相繼頒布了地方標(biāo)準(zhǔn)來(lái)規(guī)范金霉素、土霉素等抗生素的使用，同時(shí)也在逐步優(yōu)化測(cè)定方法[4，5]。目前，金霉素、土霉素的檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法[2，3]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定法[4]、紫外分光光度法[6]等。本試驗(yàn)對(duì)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定飼料中金霉素、土霉素的含量進(jìn)行了研究，旨在為生產(chǎn)實(shí)際中相關(guān)檢測(cè)提供參考。

1? 材料與方法

1.1? 儀器設(shè)備

QTRAP4500液質(zhì)聯(lián)用儀（美國(guó)Sciex）;AE-200型電子天平; QuEChFRS凈化柱;離心機(jī)。

1.2? 試劑

試驗(yàn)用水為雙重蒸餾水;金霉素、土霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（純度≥95%）：德國(guó)DR公司;甲醇、乙腈、甲酸為色譜純;檸檬酸、磷酸氫二鈉、乙二胺四乙酸二鈉、氨水為分析純。

Na2EDTA-Mcllvaine緩沖液（0.1 mol/L）：稱取11.8 g檸檬酸-水合物，13.72 g磷酸氫二鈉二水合物，33.62 g EDTA-2Na溶解于1 L水中，溶解搖勻后用氫氧化鈉和鹽酸調(diào)節(jié)pH至4.5。

甲酸水0.1%。

復(fù)溶液：甲酸水∶乙腈（90∶10，體積比）。

1 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取適量的金霉素、土霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分別用甲醇配成1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（-18 ℃保存）。

1.3? 方法

1.3.1? 樣品前期處理? 準(zhǔn)確稱取5 g樣品于100 mL容量瓶中，加入60～70 mL Na2EDTA-Mcllvaine混勻，超聲20 min，用Na2EDTA-Mcllvaine定容至100 mL備用。

取5 mL超聲后的溶液于QuEChFRS凈化柱中，混勻，5 000 r/min離心10 min，取中間層清液2 mL，40 ℃氮?dú)獯蹈桑尤? mL復(fù)溶液復(fù)溶，過0.2 μm膜后供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

1.3.2? 最佳儀器條件的選擇? 對(duì)儀器進(jìn)行調(diào)試和調(diào)整，確定最佳的儀器測(cè)定參數(shù)。

液相色譜條件：色譜柱，C18柱，150 mm×3.0 μm;粒徑3.0 μm;柱溫，33 ℃;進(jìn)樣量，20 μL。

質(zhì)譜條件：離子源，電噴霧離子源;掃描方式，正離子掃描模式;檢測(cè)方式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè);電噴霧電壓、碰撞電壓等條件優(yōu)化至最佳。

1.3.3? 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定? 用金霉素、土霉素基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)樣，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量，樣品溶液中金霉素、土霉素的響應(yīng)值應(yīng)在曲線范圍內(nèi)。

1.3.4? 加標(biāo)回收率試驗(yàn)? 分別于空白樣品中各加入5 μg的金霉素、土霉素標(biāo)準(zhǔn)使用液，利用“1.3.1”的前處理方式對(duì)樣品進(jìn)行處理，進(jìn)行加標(biāo)回收率的測(cè)定。

1.3.5? 精密度試驗(yàn)

（1）平行性試驗(yàn)。將含有金霉素、土霉素的樣品分別按照“1.3.1”的前處理方式對(duì)樣品進(jìn)行處理，每組3個(gè)平行，進(jìn)行平行性試驗(yàn)。

（2）重現(xiàn)性試驗(yàn)。分別對(duì)樣品進(jìn)行連續(xù)3 d的測(cè)定，對(duì)此方法的穩(wěn)定性進(jìn)行檢測(cè)。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 線性范圍和檢出限結(jié)果

用標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制成0、10、20、50、100、200、500 ng/mL的濃度，以峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明其線性關(guān)系較好（圖1、圖2、圖3）。

2.2? 樣品加標(biāo)回收率結(jié)果

由表1可見，樣品加標(biāo)回收率在71.5%～83.7%。表明該方法有較高的準(zhǔn)確性。

2.3? 精密度試驗(yàn)結(jié)果

由表2可見，3種樣品本底測(cè)定值之間的相對(duì)平均偏差在2.09%～3.74%。由此可看出該種方法有較好的重復(fù)性。

對(duì)3種飼料進(jìn)行連續(xù)3 d的試驗(yàn)結(jié)果見表3。由表3可見，其相對(duì)平均偏差在2.27%～3.23%，可看出該方法重現(xiàn)性良好，有較高的精密度。

3? 結(jié)論

本試驗(yàn)利用QuEChFRS凈化柱對(duì)豬的幾種飼料進(jìn)行處理，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定飼料中金霉素、土霉素的含量，結(jié)果表明，該方法的重復(fù)性、平行性良好，精密度高、準(zhǔn)確性好，回收率在71.5%～83.7%，試驗(yàn)前處理較為簡(jiǎn)單，便于大批量飼料樣品中金霉素、土霉素含量的準(zhǔn)確檢測(cè)，可推廣應(yīng)用于飼料中金霉素、土霉素的監(jiān)察測(cè)定等。

參考文獻(xiàn)：

[1] 宋慧敏，耿士偉，馮三令，等.高效液相色譜法測(cè)定飼料中土霉素[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào)，2008，10（S2）：43-47.

[2] GB/T 19684—2005飼料中金霉素的測(cè)定 高效液相色譜法[S].

[3] GB/T 22259—2008飼料中土霉素的測(cè)定 高效液相色譜法[S].

[4] DB13/T 1384.2—2011河北省地方標(biāo)準(zhǔn) 飼料中土霉素、四環(huán)素、金霉素的測(cè)定[S].

[5] 李北罡，王? 義.高效液相色譜法研究飼料金霉素中金霉素和四環(huán)素含量的分別測(cè)定[J].內(nèi)蒙古石油化工，1999，25（4）：48-50.

[6] 林紅華，黃冬菊.用紫外分光光度法測(cè)定鹽酸金霉素含量實(shí)驗(yàn)[J].福建畜牧獸醫(yī)，2000，22（4）：24-26.