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        化濁毒中藥對(duì)2型糖尿病并發(fā)急性腦梗死患者動(dòng)脈彈性指數(shù)、舌上細(xì)胞凋亡指數(shù)及核因子κB的影響

        2018-02-26 05:42:34史春林陳建權(quán)張海生張國良劉大永劉冬敏王玉超
        關(guān)鍵詞:舌苔彈性腦梗死

        史春林,陳建權(quán),張海生,張國良,劉大永,劉冬敏,王玉超

        (玉田縣醫(yī)院中醫(yī)科,河北 唐山 064100)

        急性腦梗死是2型糖尿病患者最常見的血管事件之一,具有較高的病死率及致殘率[1]。常規(guī)的內(nèi)科治療歷來是治療此病的主要方法,除此以外疾病早期溶栓治療、部分介入及手術(shù)治療也占據(jù)重要地位,但由于受到病情、個(gè)體化因素、經(jīng)濟(jì)因素等原因的限制,使后續(xù)治療局限性加大[2]。我們選擇120例2型糖尿病并發(fā)急性腦梗死無溶栓機(jī)會(huì)的患者,觀察化濁毒中藥對(duì)此類患者動(dòng)脈彈性指數(shù)、舌上細(xì)胞凋亡指數(shù)及舌苔NF-κB蛋白表達(dá)的影響?,F(xiàn)報(bào)告如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        2013年7月~2017年8月挑選120名玉田縣醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科病房和中醫(yī)病房住院的失眠患者,采用隨機(jī)對(duì)照的方法進(jìn)行研究,分為對(duì)照組53例,對(duì)治療組67例。兩組在性別、年齡、病程、病情程度等方面,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

        1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

        已確診為“ 2型糖尿病”的年齡≥60歲患者為診斷的選擇標(biāo)準(zhǔn),經(jīng)臨床、CT、MRI證實(shí)為腦梗死患者并符合在中華醫(yī)學(xué)會(huì)精神科分會(huì)編制的《中國精神疾病分類與診斷標(biāo)準(zhǔn)》[3](CCMD-2R)中有關(guān)于失眠癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

        1.3 治療方法

        治療組采用化濁毒中藥(黃連6g,半夏12g,瓜蔞9g,白術(shù)60~120g,天麻9g,茯苓12g,枳實(shí)12g,半枝蓮9g,半邊蓮9g,紅景天12g,三棱9g,莪術(shù)9g,焦三仙各15g日1劑早晚分服),對(duì)照組給予地西泮片5mg睡前頓服1/日治療。30d為1個(gè)療程,1個(gè)療程后統(tǒng)計(jì)療效。兩組患者都根據(jù)病情使用營養(yǎng)腦細(xì)胞、改善微循環(huán)藥物。在用藥前、后觀察心肌酶、轉(zhuǎn)氨酶情況。

        1.4 動(dòng)脈彈性指數(shù)的測定

        所有受試者在檢測前靜息30min,在安靜環(huán)境下取仰臥位,采用美國HDI公司CVProfilorTMDO2020型動(dòng)脈彈性功能測定儀系統(tǒng)測量血管彈性。選用合適的袖帶于右側(cè)肱動(dòng)脈位置測量臥位血壓,將動(dòng)脈脈沖壓力傳感器置于左側(cè)橈動(dòng)脈搏動(dòng)最強(qiáng)處,采集橈動(dòng)脈搏動(dòng)波形圖30s,計(jì)算機(jī)分析舒張期壓力及振蕩衰減,應(yīng)用修正的Windkessel循環(huán)模型計(jì)算出大動(dòng)脈彈性指數(shù)(C1)和小動(dòng)脈彈性指數(shù)(C2),分別測量3次取平均值。

        1.5 舌上皮細(xì)胞凋亡檢測(缺口末端標(biāo)記技術(shù),TUNEL法)

        舌苔懸液經(jīng)1000r/10 min離心并400目濾網(wǎng)過濾,PBS 洗滌3次,用沉淀做細(xì)胞涂片,晾干3h;4%多聚甲醛固定1h后PBS洗3次,1%曲拉通(4℃作用10min)再用PBS洗滌3次;加入TUNEL液37℃孵育1h后,PBS洗3次;POD37℃作用30min,DAB顯色(5min),蘇木素復(fù)染,晾干,封片,鏡檢。隨機(jī)選取1000個(gè)舌上皮細(xì)胞,細(xì)胞核中有棕黃色顆粒者為陽性細(xì)胞,觀察陽性細(xì)胞所占比例,記為細(xì)胞凋亡指數(shù)(apoptosis index,AI)。

        1.6 舌苔NF-κB蛋白表達(dá)

        各組細(xì)胞在37℃、體積分?jǐn)?shù)為5%CO2條件下培養(yǎng)(舌苔懸液處理后細(xì)胞培養(yǎng)1h),提取總蛋白要采用細(xì)胞裂解液,BCA法測定蛋白濃度。取50μg總蛋白樣品煮沸變性后,SDS-PAGE電泳,然后將電轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上,在封閉液的容器中講用雙蒸水漂洗過的膜放入,室溫下脫色搖床上 4℃振蕩過夜。加入用TBS/T稀釋至適當(dāng)濃度的一抗,4℃振蕩過夜。TBS/T洗膜。加入封閉液稀釋的二抗,4℃振蕩過夜,TBS/T洗膜。將膜與ECL反應(yīng)5 min后,曝光于X光膠片上,顯影、定影、掃描后進(jìn)行圖像分析。(所有標(biāo)本送檢上海西唐生物科技有限公司)。

        1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        采用SPSS17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以表示,計(jì)量資料采用t 檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié) 果

        表1 各組治療前后動(dòng)脈彈性指數(shù)變化(

        表1 各組治療前后動(dòng)脈彈性指數(shù)變化(

        與對(duì)照組治療后比較:※P<0.05;與治療前比較△P<0.01。

        組別 n 時(shí)間 動(dòng)脈彈性指數(shù)(分)C1 C2對(duì)照組 53 治療前 8.93±2.76 3.98±0.93治療后 10.75±2.91 4.32±1.09治療組 67 治療前 8.72±2.71 3.93±1.08治療后 12.09±3.07※△ 6.69±1.45※△

        治療后對(duì)照組動(dòng)脈彈性指數(shù)呈上升趨勢,但治療前后,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療前與治療后對(duì)比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與對(duì)照組治療后比較,動(dòng)脈彈性指數(shù)明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

        表2 各組治療前后舌上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)及舌苔NF-κB蛋白表達(dá)變化s)

        表2 各組治療前后舌上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)及舌苔NF-κB蛋白表達(dá)變化s)

        與對(duì)照組治療后比較:※P<0.05;與治療前比較△P<0.01。

        舌苔NF-κB拷貝數(shù)(μlcDNA)對(duì)照組 53 治療前 6.73±5.26 260.937±261.331治療后 9.06±5.19 203.324±201.093治療組 67 治療前 6.57±5.71 261.393±259.108治療后 11.43±8.42※△ 119.690±136.145※△組別 n 時(shí)間 舌上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)(分)

        治療后對(duì)照組舌上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)呈上升趨勢,但治療前后對(duì)比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療前與治療后對(duì)比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),與對(duì)照組治療后比較,舌上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

        治療后對(duì)照組舌苔NF-κB拷貝數(shù)呈下降趨勢,但治療前后對(duì)比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療前與治療后對(duì)比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),與對(duì)照組治療后比較,舌苔NF-κB拷貝數(shù)明顯升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

        3 討 論

        缺血性腦卒中的患者進(jìn)行早期二級(jí)預(yù)防,有利于患者通過尋找卒中事件發(fā)生的原因,糾正所有可干預(yù)的危險(xiǎn)因素,達(dá)到預(yù)防卒中再發(fā)的目的。缺血性腦卒中的二級(jí)預(yù)防包括: 控制血壓、血糖、抗血小板、抗動(dòng)脈粥樣硬化,以及血脂的管理,手術(shù)治療,必要的介入治療,以及改變生活方式等。因此,對(duì)糖尿病并發(fā)急性腦梗死且無溶栓機(jī)會(huì)的患者如何進(jìn)行肢體、語言、高級(jí)腦功能的恢復(fù),降低致殘率,提高生活質(zhì)量等嚴(yán)峻的問題亟待解決。

        2型缺血性腦血管病危險(xiǎn)因素之一是糖尿病?,F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn):長期的高血糖狀態(tài)使一氧化氮滅活加速,從而影響血管內(nèi)皮細(xì)胞合成和釋放一氧化氮減少,血管平滑肌對(duì)內(nèi)皮源性一氧化氮反應(yīng)性降低,血管的擴(kuò)張性減弱,動(dòng)脈順應(yīng)性降低,最終導(dǎo)致動(dòng)脈彈性的降低,主要表現(xiàn)為近端彈性大動(dòng)脈順應(yīng)性及遠(yuǎn)端小動(dòng)脈彈性和微循環(huán)順應(yīng)性降低,即C1和C2的降低。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為人體是有機(jī)整體,糖尿病對(duì)血管的損傷涉及到全身微血管及大血管。因此,我課題組將此評(píng)價(jià)指標(biāo)引入到此項(xiàng)研究中。

        舌背黏膜為復(fù)層鱗狀上皮,舌背黏膜為復(fù)層鱗狀上皮,復(fù)層鱗狀上皮不斷從基底層經(jīng)棘細(xì)胞層、顆粒層向角化層遷移,當(dāng)機(jī)體處于健康狀態(tài)時(shí),此種遷移就會(huì)處于平衡狀態(tài),一般正常人都是薄白苔。影響這種平衡遷移可能就是機(jī)體產(chǎn)生病變了,舌苔就會(huì)出現(xiàn)厚薄不同、顏色各異的變化情況。舌苔變化是機(jī)體臟腑功能發(fā)生變化的外在表現(xiàn),并且是直觀和客觀的統(tǒng)一,可以作為疾病的輔助診斷指標(biāo),也可以有效指導(dǎo)臨床用藥和判斷預(yù)后。因此,本項(xiàng)研究將舌苔變化作為此項(xiàng)研究終點(diǎn)評(píng)價(jià)的重點(diǎn)。

        核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的轉(zhuǎn)錄活性與2型糖尿病微血管內(nèi)皮細(xì)胞受損密切相關(guān),NF-κB活化后能誘導(dǎo)黏附分子轉(zhuǎn)錄,是糖尿病微血管內(nèi)皮細(xì)胞炎性反應(yīng)過程的核心因素,Haslbeck等研究證實(shí),糖基化終末產(chǎn)物(advanced glycation end products,AGEs)及其受體(receptor of AGEs,RAGE)結(jié)合引起NF-κB 持續(xù)活化,可調(diào)控其下游一系列細(xì)胞因子的表達(dá),在糖尿病周圍神經(jīng)病變甚至更早期的糖耐量異常相關(guān)的周圍神經(jīng)病變患者中,活檢發(fā)現(xiàn)活化的NF-κB可在神經(jīng)束膜及神經(jīng)外膜血管和部分神經(jīng)內(nèi)膜血管上表達(dá)[4]。因此,本項(xiàng)研究亦將核因子κB信號(hào)通路作為此項(xiàng)研究終點(diǎn)評(píng)價(jià)之一。

        本次研究發(fā)現(xiàn),化濁毒中藥化濁毒中藥能明顯升高動(dòng)脈彈性指數(shù)及舌上細(xì)胞凋亡指數(shù),同時(shí)可降低舌苔懸液中NF-κB的含量。本方法可恢復(fù)2型糖尿病并發(fā)急性腦梗死無溶栓機(jī)會(huì)的患者肢體、語言、高級(jí)腦功能,降低致殘率,提高生活質(zhì)量,可能是與調(diào)節(jié)該類患者的動(dòng)脈彈性指數(shù)、舌上細(xì)胞凋亡指數(shù)及舌苔NF-κB蛋白表達(dá)有關(guān)。但本結(jié)果需進(jìn)一步加大樣本量進(jìn)行臨床驗(yàn)證。

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