梁君偉 方志華 李青山 呂喜英

[摘要] 目的 探討二甲雙胍聯(lián)合紫杉醇誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7凋亡的作用機(jī)制。 方法 以CCK-8試劑盒檢測(cè)不同濃度二甲雙胍（0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mmol/L）、紫杉醇（0.025、0.050、0.100、0.200、0.400 μmol/L）單獨(dú)作用或聯(lián)合作用MCF-7細(xì)胞48 h后對(duì)細(xì)胞增殖的半抑制濃度（IC50）值;以流式細(xì)胞儀檢測(cè)二甲雙胍、紫杉醇作用MCF-7細(xì)胞48 h后的細(xì)胞周期分布;以Western blot法檢測(cè)紫杉醇、二甲雙胍單獨(dú)作用或聯(lián)合作用MCF-7細(xì)胞48 h后MAPK通路蛋白及Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)。 結(jié)果 較低濃度的二甲雙胍（0.25～4.00 mmol/L）與紫杉醇（0.025～0.400 μmol/L）聯(lián)合作用具協(xié)同效果（CI<1）;sp600125可顯著抑制MCF-7細(xì)胞增殖，聯(lián)合二甲雙胍與紫杉醇對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用明顯強(qiáng)于二者單獨(dú)作用;二甲雙胍與紫杉醇聯(lián)合時(shí)G2/M期細(xì)胞少于紫杉醇單藥應(yīng)用，多于二甲雙胍單藥應(yīng)用;二甲雙胍與紫杉醇聯(lián)合作用MCF-7細(xì)胞48 h后p-JNK/SAPK、p-p38蛋白表達(dá)明顯高于二者單用，p-ERK、Bcl-2蛋白表達(dá)降低（P < 0.05）。 結(jié)論 二甲雙胍聯(lián)合紫杉醇作用人乳腺癌細(xì)胞MCF-7具協(xié)同效果，其與sp600125聯(lián)合時(shí)對(duì)細(xì)胞的抑制作用顯著增強(qiáng)。二甲雙胍與紫杉醇聯(lián)合作用還可抑制細(xì)胞在G2/M期聚集及ERK通路，激活JNK、p38通路，降低Bcl-2與Bax蛋白比例。

[關(guān)鍵詞] 二甲雙胍;紫杉醇;乳腺癌;MCF-7細(xì)胞;MAPK通路

[中圖分類號(hào)] R655.7 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2018）12（b）-0017-06

[Abstract] Objective To explore the role mechanism of Metformin combined with Paclitaxel in inducing apoptosis of human breast cancer cell MCF-7. Methods CCK-8 kit was used to detect the 50% inhibitory concentration （IC50 value） of cell proliferation after 48 h of single action of different concentrations of Metformin （0.25， 0.50， 1.00， 2.00， 4.00 mmol/L） or Paclitaxel （0.025， 0.050， 0.100， 0.200， 0.400 μmol/L） or two combined action on MCF-7 cell. And the flow cytometry was used to detect the cell cycle distribution after 48 h action of Metformin or Paclitaxel on MCF-7 cell. And Western blot method was used to detect the expression levels of MAPK pathway protein and Bcl-2， Bax proteins after 48 h of single action of Paclitaxel or Metformin or two combined action on MCF-7 cell. Results Low concentration of Metformin （0.25-4.00 mmol/L） combined with Paclitaxel （0.025-0.400 μmol/L） had a synergistic effect （CI<1）. sp600125 could significantly inhibite MCF-7 cell proliferation， and the inhibitory effect of MCF-7 cell proliferation by Metformin combined with Paclitaxel was stronger than that by single action of the two. The number of G2/M phase cells by combined action of Metformin and Paclitaxel were less than by single action of Paclitaxel， but more than by single action of Metformin. The expression levels of p-JNK/SAPK and p-p38 proteins after 48 h of Metformin combined with Paclitaxel on MCF-7 cell were significantly higher than those by single action of the two， and the expression levels of p-ERK and Bcl-2 proteins were decreased （P < 0.05）. Conclusion Metformin combined with Paclitaxel has a synergistic effect on human breast cancer cell MCF-7， and its inhibitory effect on cells is significantly enhanced when combined with sp600125. Metformin combined with Paclitaxel can inhibit cell aggregation and ERK pathway in G2/M phase， activate JNK and p38 pathway， and reduce the ratio of Bcl-2 and Bax proteins.

[Key words] Metformin; Paclitaxel; Breast cancer; MCF-7 cell; MAPK pathway

乳腺癌系全球婦女發(fā)病率最高的惡性腫瘤，每年有130萬名以上女性被診斷出患有乳腺癌，且患病人數(shù)持續(xù)增加，不僅嚴(yán)重威脅女性健康和生活質(zhì)量，還給全球衛(wèi)生系統(tǒng)帶來沉重負(fù)擔(dān)[1-2]。化療是目前治療乳腺癌的重要手段，可有效降低患者體內(nèi)的瘤細(xì)胞載量。紫杉醇類化合物是當(dāng)前國(guó)際公認(rèn)的新型抗腫瘤藥物，可阻滯腫瘤細(xì)胞有絲分裂，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，被證實(shí)對(duì)乳腺癌有確切療效[3]。二甲雙胍是治療2型糖尿病的胰島素增敏劑，臨床應(yīng)用廣泛。周寒麗等、鄭亞等[4-5]研究發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍還具有降低腫瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)、抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用，聯(lián)合應(yīng)用二甲雙胍和化療藥物可有效抑制各種表型的乳腺癌細(xì)胞增殖，且比單用化療藥物效果更加明顯。本研究通過分析二甲雙胍聯(lián)合紫杉醇對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖凋亡的影響，探討藥物作用過程中與MAPK通路、Bcl-2基因家族之間的關(guān)系，進(jìn)一步探討二甲雙胍聯(lián)合紫杉醇對(duì)乳腺癌作用的分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

MCF-7細(xì)胞（中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫）、二甲雙胍片（上海北杰集團(tuán)關(guān)東藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20 141013，0.25 g，10粒）、紫杉醇注射液（?？谑兄扑帍S有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20130127，30 mg，5支）、DTC-3G plus型PCR儀（西安天隆科技有限公司）、BD Biosciences FACSCalibur流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司）、1040×740× 2050超凈工作臺(tái)（深圳凈藍(lán)公司）、M301624 CO2培養(yǎng)箱[西化儀（北京）公司]、SZKT2040電泳裝置（武漢免疫實(shí)驗(yàn)室）、BTNTA2020D凝膠成像分析系統(tǒng)（北京賓達(dá)英創(chuàng)科技公司）、CP62-JSM-6390LV電子顯微鏡（北京中西遠(yuǎn)大科技公司）、JA12002精密天平（北京易斯高科電子技術(shù)有限公司）、胎牛血清（FBS，美國(guó)Gibco公司）、CCK8試劑盒（南京凱基生物科技發(fā)展有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20131025）、ERK通道阻斷劑U0126、MAPK通路蛋白一抗（美國(guó)Cell Signaling公司）、JNK通路阻斷劑sp600125（美國(guó)Cayman公司）、Bcl-2、Bax一抗（美國(guó)Santa Cruz Biotechnology公司）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) MCF-7細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于高糖DMEM培養(yǎng)液（含10% FBS），置于37℃含5%CO2飽和濕度條件下的溫箱孵育，待細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí)加藥。

1.2.2 CCK8檢測(cè) 使用0.25%胰酶消化對(duì)數(shù)期MCF-7細(xì)胞后分別接種到96孔板（按照1×104個(gè)/孔），培養(yǎng)24 h后，加入不同濃度（0、0.01、0.10、1.00、10.00、50.00 μmol/L）的二甲雙胍或紫杉醇分別作用細(xì)胞，分別設(shè)3個(gè)復(fù)孔及3個(gè)對(duì)照孔，培養(yǎng)48 h后棄上清液，每孔加入150 μL二甲基亞砜（DMSO），振搖10 min溶解完全后，使用酶聯(lián)免疫酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm處各孔的吸光度值（OD值），計(jì)算二甲雙胍、紫杉醇對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的半抑制濃度（IC50值）。單藥實(shí)驗(yàn)：在MCF-7細(xì)胞中分別以相應(yīng)濃度比加入二甲雙胍（0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mmol/L）、紫杉醇（0.025、0.050、0.100、0.200、0.400 μmol/L）。聯(lián)合用藥實(shí)驗(yàn)：分別以相應(yīng)的濃度比在MCF-7細(xì)胞中加入二甲雙胍、紫杉醇。根據(jù)中效原理及CombiDrug統(tǒng)計(jì)軟件，繪制劑量-效應(yīng)曲線及不同效應(yīng)下合用指數(shù)曲線（Fa-CI曲線），定量分析兩者間的協(xié)同、拮抗或相加關(guān)系（合用指數(shù)CI<1為協(xié)同作用，CI=1為相加作用，CI>1為拮抗作用）。DMSO充分溶解10 mmmol/L U0126及1 mmol/L sp600125后，配制成20 μmol/L的終濃度作用，DMSO濃度<0.2%，并按照此方法檢測(cè)MCF-7細(xì)胞增殖。

1.2.3 細(xì)胞周期測(cè)定 分為對(duì)照組、紫杉醇組（TXT 0.05 μmol/L）、二甲雙胍組（MET 0.5 mmol/L）及聯(lián)合組（0.05 μmol/L TXT+0.5 mmol/L MET），MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期加藥，48 h后獲得1×104個(gè)細(xì)胞，加1 mL生理鹽水離心5 min（轉(zhuǎn)速1200 r/min，離心半徑15 cm），重復(fù)3次;加100 μL 0.9%的氯化鈉溶液混合均勻后，再加入1 mL 75%酒精混勻;加入約50 μL碘化丙啶至終濃度達(dá)到65 μg/mL，4℃溫度下孵育30 min，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。

1.2.4 Western blot分析 細(xì)胞分組方式同細(xì)胞周期測(cè)定，收集處理48 h后的細(xì)胞，PBS液沖洗3次，加入250～500 μL預(yù)冷至0℃裂解液，置于低溫4℃冰箱中30 min，細(xì)胞裂解后轉(zhuǎn)移至EP管，4℃下離心5 min（轉(zhuǎn)速1200 r/min，離心半徑15 cm），取上清液于新的EP管，-20℃保存。使用考馬斯亮藍(lán)法檢測(cè)蛋白濃度，加入1×SDS上樣緩沖液，混勻后100℃條件下煮沸5 min，使其充分變性，冷卻后分裝，低溫-20℃保存。每泳道加入100 μg蛋白，10% SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，經(jīng)80 V穩(wěn)壓電泳至溴酚藍(lán)指示劑跑完濃縮膠層后，100 V穩(wěn)壓電泳至彩虹Marker 28 kD遷移至分離膠下緣，電泳結(jié)束（約150 min）。切取目的膠塊，100 V穩(wěn)壓電將電泳產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至硝酸纖維膜，經(jīng)5% BSA封閉液封閉2 h，加入MAPK通路蛋白一抗（1∶1000）、Bcl-2及Bax一抗（1∶500），4℃溫度下孵育過夜。孵育后的膜使用TBST緩沖液沖洗3次（5 min/次），辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗，置于37℃下作用1.5 h，將其作1∶2000稀釋。然后使用TBST緩沖液沖洗3次（5 min/次），ECL化學(xué)發(fā)光法顯色5 min，壓片保存。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 單藥及聯(lián)合用藥IC50值比較

二甲雙胍與紫杉醇聯(lián)合作用于細(xì)胞48 h后，細(xì)胞抑制率顯著強(qiáng)于二者單藥作用，見表1。較低濃度的二甲雙胍（0.25～4.00 mmol/L）與紫杉醇（0.025～0.400 μmol/L）聯(lián)合作用具協(xié)同效果（CI<1），隨藥物濃度增加，趨于相加或拮抗作用（CI≥1），見圖1。

2.2 對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用

sp600125可顯著抑制MCF-7細(xì)胞增殖，聯(lián)合二甲雙胍與紫杉醇對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用明顯強(qiáng)于二甲雙胍、紫杉醇單藥應(yīng)用;U0126抑制MCF-7細(xì)胞增殖的作用不顯著（P > 0.05），與sp600125聯(lián)用，可拮抗sp600125抑制MCF-7細(xì)胞增殖的作用。同時(shí)阻斷MEK1/2、JNK兩條通路，二甲雙胍與紫杉醇抑制MCF-7細(xì)胞增殖的作用并無顯著增強(qiáng)（P > 0.05）。見圖2。

2.3 對(duì)MCF-7細(xì)胞周期的影響

紫杉醇可使MCF-7細(xì)胞阻滯在G2/M期，二甲雙胍阻滯在G1期，二者聯(lián)合用藥阻滯在G1期，但G1期細(xì)胞少于對(duì)照組，G2/M期細(xì)胞多于對(duì)照組。二甲雙胍與紫杉醇聯(lián)合的協(xié)同作用并無細(xì)胞周期協(xié)同效果，且G2/M期細(xì)胞少于紫杉醇單藥應(yīng)用，多于二甲雙胍單藥應(yīng)用。見表2、圖3。

2.4 對(duì)MCF-7細(xì)胞MAPK蛋白及凋亡蛋白作用

單藥作用及聯(lián)合作用MCF-7細(xì)胞48 h后收獲蛋白，紫杉醇組及聯(lián)合組p-ERK1/2蛋白明顯低于對(duì)照組及二甲雙胍組，PINK/SAPK蛋白表達(dá)增加，MET組對(duì)MAPK通路蛋白的作用沒有紫杉醇組顯著。聯(lián)合組p-JNK/SAPK、p-p38蛋白表達(dá)明顯高于紫杉醇組與二甲雙胍組，PERK1/2蛋白表達(dá)降低。作用MCF-7細(xì)胞48 h后，紫杉醇組、二甲雙胍組都可使凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)降低，且聯(lián)合組效果更加顯著。但Bax蛋白并未發(fā)生顯著改變。見圖4～5、表3～4。

3討論

腫瘤的發(fā)生與腫瘤細(xì)胞的過度增殖和凋亡減少有關(guān)，而撕裂原活化蛋白激酶（MAPK）是細(xì)胞信號(hào)傳遞的重要通路，哺乳動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中已明確其成員ERK、p38、JNK、ERK5與乳腺癌發(fā)病密切相關(guān)[6]。其中ERK1/2信號(hào)傳導(dǎo)是細(xì)胞增殖的重要通道，p38和JNK信號(hào)可促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞凋亡及遷移。同時(shí)，細(xì)胞凋亡是受抑制細(xì)胞凋亡基因（Bcl-2等）和促細(xì)胞凋亡基因（Bax等）共同調(diào)控的復(fù)雜生理過程。在細(xì)胞內(nèi)，二者可結(jié)合成異質(zhì)二聚體而失活，而當(dāng)二者相對(duì)表達(dá)量失衡時(shí)，則引起細(xì)胞凋亡進(jìn)程改變。國(guó)內(nèi)外多項(xiàng)研究證實(shí)[7-9]，Bcl-2蛋白高表達(dá)不僅可直接影響乳腺癌患者預(yù)后，其基因家族還在多種腫瘤的形成過程及腫瘤化療藥物耐藥形成中起關(guān)鍵作用。

本研究通過體外二甲雙胍聯(lián)合紫杉醇作用人乳腺癌細(xì)胞MCF-7，觀察MAPK通路及Bcl-2基因家族對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用，結(jié)果提示二者均可在體外抑制MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)。紫杉醇是目前國(guó)際公認(rèn)的新型抗腫瘤藥物，可促進(jìn)微管蛋白聚合，使癌細(xì)胞停滯于G2/M期，阻滯腫瘤細(xì)胞有絲分裂、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，繼而發(fā)揮抗腫瘤作用。Akyol等[10-12]多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，紫杉醇誘導(dǎo)MCF27細(xì)胞凋亡時(shí)Bcl-2表達(dá)水平顯著降低，且伴隨著Bcl-2磷酸化，Bcl-2不能與同源的Bax結(jié)合，使游離Bax表達(dá)水平顯著增高，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，同時(shí)bcl-2/Bax比率具明顯的時(shí)間及劑量依賴性。二甲雙胍是20世紀(jì)中葉用于治療2型糖尿病的胰島素增敏劑，近幾年對(duì)結(jié)直腸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和生殖系統(tǒng)腫瘤的細(xì)胞及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍可抑制抗凋亡的Bcl-2基因表達(dá)，促進(jìn)促凋亡的Bax基因表達(dá)，調(diào)控細(xì)胞凋亡平衡，抑制腫瘤生長(zhǎng)，改善患者預(yù)后[13-15]。本研究顯示，較低濃度的二甲雙胍（0.25～4.00 mmol/L）與紫杉醇（0.025～0.400 μmol/L）聯(lián)合作用具協(xié)同效果。藥物濃度增加后，聯(lián)合組效果趨于拮抗作用，但細(xì)胞周期并不是單純的協(xié)同或拮抗作用，聯(lián)合組G2期細(xì)胞顯著少于紫杉醇組，可認(rèn)為紫杉醇在細(xì)胞周期的阻斷作用中占主導(dǎo)低位，二甲雙胍可拮抗部分紫杉醇抗微管作用，因此聯(lián)合組G2期細(xì)胞介于紫杉醇組與二甲雙胍組之間。

本研究中sp600125可顯著抑制MCF-7細(xì)胞增殖，其聯(lián)合紫杉醇與二甲雙胍的抑制作用強(qiáng)于單藥作用，提示JNK通路對(duì)藥物發(fā)揮療效促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡具重要作用。JNK通路活化可介導(dǎo)細(xì)胞凋亡，但一定條件下，也可起到提高細(xì)胞存活能力，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的作用。sp600125作為JNK通路阻斷劑，可抑制JNK下游蛋白磷酸化，降低腫瘤細(xì)胞活性，且具一定劑量依賴性[16-18]。本研究中JNK通路雖然被阻斷，但聯(lián)合組抑制作用并未有顯著增強(qiáng)，提示紫杉醇與二甲雙胍聯(lián)合JNK通路并未起到明顯的促進(jìn)細(xì)胞存活作用。U0126可通過抑制細(xì)胞黏附作用及血管生長(zhǎng)起到抑制腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移的作用，從而誘導(dǎo)腫瘤凋亡[19]。但本研究中此種抑制作用并不明顯，U0126與sp600125聯(lián)用反而會(huì)對(duì)sp600125的抑制作用起到拮抗效果。且阻斷ERK1/2及JNK通路后紫杉醇及二甲雙胍對(duì)MCF-7細(xì)胞的抑制作用并未強(qiáng)于二者單獨(dú)作用，究其原因可能是由于MAPK是一個(gè)獨(dú)立的復(fù)雜系統(tǒng)，交叉作用廣泛，難以確保以某個(gè)點(diǎn)或通路為靶向。

本研究聯(lián)合組p-ERK蛋白表達(dá)水平明顯低于紫杉醇組與二甲雙胍組，p-JNK及p-p38蛋白水平明顯高于紫杉醇組與二甲雙胍組，提示紫杉醇與二甲雙胍聯(lián)合可抑制ERK通路，激活JNK、p38通路，使下游蛋白表達(dá)變化，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡，且細(xì)胞存活與凋亡均與ERK、JNK、p38通路間的動(dòng)態(tài)平衡相關(guān)。紫杉醇與二甲雙胍聯(lián)合作用中，ERK、JNK、p38蛋白因藥物協(xié)同作用而發(fā)生適應(yīng)性變化，MAPK通路蛋白表達(dá)水平的變化可能也與這種動(dòng)態(tài)平衡相關(guān)。

腫瘤細(xì)胞中Bcl-2基因表達(dá)水平較高可促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，Bcl-2基因表達(dá)降低或缺失可抑制腫瘤生長(zhǎng)[20]。本研究聯(lián)合組作用MCF-7細(xì)胞后Bcl-2蛋白表達(dá)水平顯著低于紫杉醇組與二甲雙胍組，Bax蛋白表達(dá)水平略有提高，可認(rèn)為Bcl-2與Bax基因間存在動(dòng)態(tài)平衡，可調(diào)控腫瘤細(xì)胞的分裂與死亡。聯(lián)合組協(xié)同作用可降低Bcl-2與Bax蛋白比例，下調(diào)Bcl-2通路，從而增強(qiáng)紫杉醇對(duì)MCF-7細(xì)胞的敏感性，且與MCF-7細(xì)胞雌激素受體（ER）表達(dá)相關(guān)。因此，臨床治療過程中可通過調(diào)控Bcl-2家族表達(dá)，增強(qiáng)紫杉醇對(duì)ER（+）乳腺癌的化療敏感性，更好地改善乳腺癌患者預(yù)后。

綜上所述，體外低劑量二甲雙胍聯(lián)合紫杉醇作用人乳腺癌細(xì)胞MCF-7具協(xié)同作用，可抑制細(xì)胞在G2/M期聚集及ERK通路，激活JNK、p38通路，降低Bcl-2與Bax蛋白比例，下調(diào)Bcl-2通路，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，抑制腫瘤生長(zhǎng)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 陳萬青，鄭榮壽.中國(guó)女性乳腺癌發(fā)病死亡和生存狀況[J].中國(guó)腫瘤臨床，2015，42（13）：668-674.

[2] 石建偉，唐智柳，蔡美玉，等.2008～2012年我國(guó)女性乳腺癌流行狀況的系統(tǒng)性綜述[J].中國(guó)婦幼保健，2014，29（10）：1622-1626.

[3] 張龍，王鳳瑋.紫杉醇用于乳腺癌治療的應(yīng)用進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014，11（31）：167-168.

[4] 周寒麗，耿健雄，張華.二甲雙胍抗腫瘤機(jī)制的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2015，23（12）：1760-1763.

[5] 鄭亞，孫紅.二甲雙胍聯(lián)合化療藥對(duì)婦科腫瘤的作用[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展，2016，25（11）：856-858.

[6] 吳婧，王寧菊，馬吉光.MAPK蛋白在乳腺癌中的表達(dá)及其意義[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，36（7）：743-745.

[7] 郝磊，魏現(xiàn)娟，郝坤.p53及bcl-2蛋白在乳腺癌中表達(dá)的相關(guān)性研究[J].中國(guó)婦幼保健，2017，32（4）：695-697.

[8] Pusztai L，Krishnamurti S，Perez CJ，et al. Expression of BAG-1 and BcL-2 proteins before and after neoadjuvant chemotherapy of locally advanced breast cancer [J]. Cancer Invest，2015，22（2）：248-256.

[9] Noh KT，Cha GS，Kang TH，et al. Enhancement of paclitaxel-induced breast cancer cell death via the glycogen synthase kinase-3β-mediated B-cell lymphoma 2 regulation [J]. Bmb Rep，2016，49（1）：51-56.

[10] Akyol Z，？覶oker-Gürkan A，Arisan ED，et al. DENSpm overcame Bcl-2 mediated resistance against Paclitaxel treatment in MCF-7 breast cancer cells via activating polyamine catabolic machinery [J]. Biomed & Pharmacother，2016，84：2029-2041.

[11] 馬驥，余惠云，劉穎，等.二甲雙胍抗腫瘤效應(yīng)的基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2015，15（33）：6587-6589.

[12] Queiroz EAIF，Puukila S，Eichler R，et al. Metformin Induces Apoptosis and Cell Cycle Arrest Mediated by Oxidative Stress，AMPK and FOXO3a in MCF-7 Breast Cancer Cells [J]. PLoS One，2014，9（5）：e98207.

[13] 趙松，楊金剛，李長(zhǎng)嶺，等.蛋白激酶A抑制劑H-89通過調(diào)節(jié)核糖體蛋白S6激酶1的磷酸化阻斷SP600125誘導(dǎo)的CMK細(xì)胞多倍體化[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2016，32（10）：1321-1326.

[14] Choi JE，Su HK，Lee SJ，et al. Prognostic significance of Bcl-2 expression in non-basal triple-negative breast cancer patients treated with anthracycline-based chemotherapy [J]. Tumor Biol，2014，35（12）：12 255-12 263.

[15] Chen L，Bourguignon LYW. Hyaluronan-CD44 interaction promotes c-Jun signaling and miRNA21 expression leading to Bcl-2 expression and chemoresistance in breast cancer cells [J]. Mol Cancer，2014，13（1）：52.

[16] 王瓊，王佑民，毋飛飛，等.JNK通路在高糖促人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖中的作用[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014， 49（2）：149-154.

[17] Urrutia A，Rubio-Araiz A，Gutierrez-Lopez MD，et al. A study on the effect of JNK inhibitor，SP600125，on the disruption of blood-brain barrier induced by methamphetamine [J]. Neurobiol Dis，2013，50（1）：49.

[18] Jemaà M，Vitale I，Kepp O，et al. Selective killing of p53-deficient cancer cells by SP600125 [J]. Embo Mol Med，2012，4（6）：500.

[19] Si L，Zheng L，Xu L，et al. Dioscin suppresses human laryngeal cancer cells growth via induction of cell-cycle arrest and MAPK-mediated mitochondrial-derived apoptosis and inhibition of tumor invasion [J]. Eur J Pharmacol，2016，774（4）：105-117.

[20] 饒國(guó)洲，婁鳴，景娟，等.survivin和bcl-2雙基因敲減對(duì)人舌癌裸鼠移植瘤的抑制作用[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志，2017， 46（2）：145-147.

（收稿日期：2018-07-16 本文編輯：任 念）