饒盼盼 黨松 王晞
[摘要] 目的 探討中成藥參松養(yǎng)心對日本大耳兔心肌梗死模型心肌微循環(huán)的作用及其可能的機(jī)制。 方法 采用隨機(jī)數(shù)字表法將30只6月齡SPF級日本大耳兔分為Sham組、Control組和MI+SSYX組,每組10只且雌雄各半。Control組和MI+SSYX組通過冠狀動脈左前降支結(jié)扎建立心肌梗死模型,Sham組開胸后在冠狀動脈下穿線,但不結(jié)扎。術(shù)后MI+SSYX組以參松養(yǎng)心0.4 g/(kg·d)溶液灌胃,Sham組和Control組以相同劑量的生理鹽水灌胃。灌胃4周后,將各組日本大耳兔全部處死,在梗死心肌周邊區(qū)取材,采用血管內(nèi)皮標(biāo)志物CD34免疫熒光染色法檢測微血管密度,用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測血漿中內(nèi)皮素-1(ET-1)、血栓素A2(TXA2)、一氧化氮(NO)和血管性血友病因子(vWF)的水平。 結(jié)果 與Sham組比較,Control組與MI+SSYX組微血管密度明顯降低(P < 0.05);與Control組比較,MI+SSYX組微血管密度明顯升高(P < 0.05)。與Sham組比較,Control組及MI+SSYX組內(nèi)皮衍生因子ET-1、NO、TXA2、vWF血漿水平均顯著升高(P < 0.05);與Control組比較,MI+SSYX組ET-1、TXA2、vWF血漿水平均降低,NO血漿水平升高(P < 0.05)。 結(jié)論 參松養(yǎng)心可改善心肌梗死后家兔心肌微循環(huán),其機(jī)制可能與參松養(yǎng)心能夠促進(jìn)心肌梗死周邊區(qū)毛細(xì)血管生成,平衡內(nèi)皮衍生的血管擴(kuò)張因子和血管收縮因子的能力相關(guān)。
[關(guān)鍵詞] 參松養(yǎng)心;心肌梗死;微循環(huán);內(nèi)皮衍生因子
[中圖分類號] R259.414 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210(2018)12(a)-0010-04
中藥參松養(yǎng)心是根據(jù)中醫(yī)絡(luò)病理論研制的復(fù)方制劑,主要由人參、麥冬、桑寄生、山萸肉、丹參、黃連、酸棗仁、五味子、赤芍、土鱉蟲、甘松等組成,有益氣養(yǎng)陰、活血通絡(luò)、清心安神的功效[1]。該中藥是臨床上抗心律失常的常用藥,有研究表明參松養(yǎng)心有抗急性心肌缺血損傷的作用[2],我們的前期研究也表明參松養(yǎng)心對心肌梗死亞急性期的微循環(huán)有改善作用[3]。本研究進(jìn)一步探究參松養(yǎng)心對心肌梗死家兔心肌微循環(huán)的影響并深入分析其作用機(jī)制。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動物及分組
健康6月齡SPF級日本大耳兔30只,體重2.2~2.7 kg(湖北省生物工程研究所,動物質(zhì)量合格證號:4200-499472),在武漢大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物室20~25℃恒溫飼養(yǎng)。采用隨機(jī)數(shù)字表法將其分為Sham組、Control組和MI+SSYX組,每組由10只且雌雄各半。術(shù)后MI+SSYX組以參松養(yǎng)心原粉(石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司,批號:S-131001)0.4 g/(kg·d)溶液灌胃,Sham組和Control組以相同劑量的生理鹽水灌胃。
1.2 動物模型制備
采用冠狀動脈左前降支結(jié)扎建立心肌梗死模型。動物稱重后以0.8%戊巴比妥鈉(40 mg/kg)耳緣靜脈麻醉,固定體位,頸部和胸部備皮。連接實(shí)驗(yàn)用心電監(jiān)護(hù)儀,觀察心電圖形態(tài)。酒精消毒,鋪無菌洞巾。調(diào)節(jié)呼吸機(jī)參數(shù),行常規(guī)氣管插管。沿胸壁左旁正中開胸,用開胸器撐開切口,剪開心包,充分暴露心臟,尋找并結(jié)扎冠狀動脈左前降支。以觀察到結(jié)扎以下心肌顏色變暗,搏動幅度減弱,且心電監(jiān)護(hù)顯示Ⅰ、Ⅱ、aVL導(dǎo)聯(lián)ST段抬高0.2 mV為手術(shù)成功的標(biāo)準(zhǔn)。Sham組開胸后在冠狀動脈左前降支下穿線,但不結(jié)扎。關(guān)閉并逐層縫合切口。術(shù)后各組家兔均接受40萬U青霉素(華北制藥股份有限公司,批號:1204103)肌內(nèi)注射,連續(xù)3 d,預(yù)防感染。
1.3 免疫熒光檢測
治療4周后,將三組家兔全部處死,取梗死心肌周邊組織,用4℃生理鹽水清洗殘留血液后浸泡在4%多聚甲醛中固定24 h。經(jīng)梯度酒精脫水和石蠟包埋后,將石蠟切片浸入二甲苯脫蠟,梯度酒精中逐漸水化后行抗原修復(fù),然后按照試劑盒(Abcam,批號:ab81289)說明書進(jìn)行CD34及DAPI免疫熒光雙標(biāo)。每張切片在光學(xué)顯微鏡下放大400倍,隨機(jī)選擇5個視野進(jìn)行CD34染色陽性計(jì)數(shù)(凡是染成棕黃色的血管內(nèi)皮細(xì)胞或者內(nèi)皮細(xì)胞簇均作為1個血管計(jì)數(shù),管腔直徑超過2 μm或肌肉層超過3層的血管均不計(jì)數(shù)),并取5個區(qū)域的CD34陽性計(jì)數(shù)的平均數(shù)作為該切片的微血管密度。
1.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
治療4周后,三組家兔均通過采血針從頸靜脈抽取2 mL血注入真空分離膠促凝管中,靜置10 min后置于離心機(jī)中以轉(zhuǎn)速3000 r/min、離心半徑8 cm離心15 min,收集上清液并放在-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。然后按照試劑盒(HCB,Canada)說明書進(jìn)行ELISA試驗(yàn),檢測血漿樣本中內(nèi)皮素1(ET-1)、一氧化氮(NO)、血栓素A2(TXA2)和血管性血友病因子(vWF)水平。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,多組間比較采用方差分析,組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn),以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 心肌梗死模型
心肌梗死模型制備過程中,2只新西蘭大耳白兔意外死亡(1只死于心律失常,1只原因不明),剩余28只(Sham組10只、Control組9只、MI+SSYX組9只)均制備心梗模型成功,且順利完成各指標(biāo)的檢測。模型制備成功的心電圖見圖1。
2.2 三組家兔心肌梗死周邊區(qū)心肌微血管密度比較
與Sham組比較,Control組及MI+SSYX組微血管密度明顯降低(P < 0.05)。與Control組比較,MI+SSYX組微血管密度明顯升高(P < 0.05)。見圖2(封三)。
2.3 三組家兔ET-1、NO、TXA2和vWF血漿水平的比較
與Sham組比較,Control組及MI+SSYX組ET-1、NO、TXA2、vWF血漿水平均顯著升高(P < 0.05)。與Control組比較,MI+SSYX組ET-1、TXA2和vWF血漿水平均降低(P < 0.05),NO血漿水平升高(P < 0.05)。見圖3。
3 討論
本研究探究參松養(yǎng)心對心肌梗死的日本大耳兔心肌微循環(huán)的作用及其可能的機(jī)制。結(jié)果顯示,參松養(yǎng)心可以增加梗死心肌周邊區(qū)域的微血管密度,降低血漿中內(nèi)皮衍生子TXA2、ET-1、vWF水平,升高NO水平,即平衡內(nèi)皮衍生的血管擴(kuò)張因子和血管收縮因子,從而改善心肌梗死后梗死周邊組織心肌微循環(huán)。
中醫(yī)認(rèn)為急性心肌梗死為本虛標(biāo)實(shí)之證,本虛包括氣、血、陰、陽不足,以氣虛、陽虛為主,標(biāo)實(shí)包括寒凝、氣滯、血瘀、痰濁,以血瘀、痰濁為主[4]。參松養(yǎng)心是基于中醫(yī)絡(luò)病學(xué)理論研制而成的具有益氣養(yǎng)陰、活血通絡(luò)功效的中成藥。方中人參有大補(bǔ)元?dú)狻?fù)脈固脫、生津安神等功效[5]。對于心血管系統(tǒng),研究顯示人參能夠保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、抗心律失常、降壓、抑制心室重構(gòu)、改善高脂血癥、抗心源性休克等[6]。麥冬為常用的養(yǎng)陰中藥,藥理實(shí)驗(yàn)表明麥冬有很好的抗血栓作用,能增加心肌收縮力和冠脈流量,保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞[7]。丹參為臨床上常用的活血化瘀藥物,有抗氧化、抗血小板聚集、保護(hù)血管內(nèi)皮、改善微循環(huán)等藥理作用[8-9]。桑寄生有補(bǔ)肝腎、益精血、祛風(fēng)濕、通經(jīng)絡(luò)、養(yǎng)血脈、安胎元的作用。且有臨床研究表明,桑寄生對心律失常、心痛、短氣均有療效[10-11]。山茱萸能改善血管內(nèi)皮損傷,且與調(diào)節(jié)血管活性物質(zhì)ET/NO、TXA2/PGI2穩(wěn)態(tài)有關(guān)[12]。根據(jù)熱毒傷絡(luò)的假說,黃連作為清熱解毒的代表藥,對梗死心肌血液循環(huán)也有改善作用[13-14]。酸棗仁能鎮(zhèn)靜催眠、保護(hù)心肌細(xì)胞、抗動脈粥樣硬化、降血壓、降血脂、改善血液流變學(xué)以及加強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶能力等[15]。土鱉蟲是傳統(tǒng)的活血化瘀藥,中醫(yī)臨床上用于治療冠心病、高血壓,具有抗凝血、抗缺氧、調(diào)血脂、抗突變、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞等作用[16]。甘松具有鎮(zhèn)靜降壓,抗心律失常、潰瘍、細(xì)胞毒活性、瘧疾的作用[17]。從藥方各組分藥理作用來看,參松養(yǎng)心為改善心肌梗死血液循環(huán)的對癥藥。
有研究表明,微血管功能障礙是決定急性心肌梗死(AMI)患者3個月后左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)和左室重塑程度的重要因素[18]。冠脈閉塞導(dǎo)致細(xì)胞壞死,引起毛細(xì)血管等微血管損傷及心肌再灌注損傷,最終引起水腫和微血管內(nèi)皮功能障礙,導(dǎo)致大約40%的AMI患者成功再灌注治療后出現(xiàn)心肌“無復(fù)流”現(xiàn)象(no-reflow phenomenon)[19-20]。因此,改善AMI患者的微血管功能是必要的治療措施。但目前AMI管理主要強(qiáng)調(diào)及時(shí)開放心臟表面的梗阻冠脈,治療主要集中在及時(shí)開通大血管上,重建走行于心肌內(nèi)的微血管血供并未得到臨床治療重視。血管內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)節(jié)冠狀動脈血流量主要通過釋放血管活性因子,其中NO是一種主要的內(nèi)皮細(xì)胞衍生的擴(kuò)血管因子[21-22],ET-1是一種內(nèi)源性的血管活性肽,對冠狀動脈發(fā)揮穩(wěn)定而持久的血管收縮作用,是最有效的血管收縮劑之一[23]。TXA2具有很強(qiáng)的促血小板聚集作用,是增加心肌梗死患者發(fā)病率和死亡率重要的風(fēng)險(xiǎn)因子之一[24-25]。生理狀態(tài)下,內(nèi)皮細(xì)胞合成vWF,調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞黏附于血管壁;病理狀態(tài)下,活化的血小板釋放vWF介導(dǎo)血管損傷部位的血小板聚集和黏附于膠原,促進(jìn)血栓形成[26-27]。參松養(yǎng)心能有效調(diào)節(jié)這兩類內(nèi)皮衍生因子,改善心臟微循環(huán)。
綜上所述,參松養(yǎng)心藥方的配伍原理及各成分的藥理作用與本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相互支持,可以認(rèn)為參松養(yǎng)心能夠通過重建和維持AMI后心肌微血管灌注,起到保護(hù)心肌的作用。但有待進(jìn)一步研究以明確作用機(jī)制,如所涉及微循環(huán)保護(hù)的具體信號通路等。
[參考文獻(xiàn)]
[1] 馬柳一,尹玉潔,劉煥,等.參松養(yǎng)心膠囊治療心律失常藥理學(xué)機(jī)制研究概況[J].中醫(yī)雜志,2016,57(9):794-797.
[2] 陳漢想,郭秋慧,劉立,等.參松養(yǎng)心膠囊預(yù)防垂體后葉素致實(shí)驗(yàn)性大鼠急性心肌缺血的研究[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2007,27(11):1520-1522.
[3] 黨松,黃從新,王晞,等.參松養(yǎng)心膠囊和胺碘酮對心肌梗死家兔微循環(huán)及心電生理特性影響的比較[J].中華心律失常學(xué)雜志,2015,19(2):140-144.
[4] 陳可冀,張敏州,霍勇.急性心肌梗死中西醫(yī)結(jié)合診療專家共識[J].中國中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2014,34(4):389-395.
[5] 李紅蓉,位庚,尹玉潔,等.人參保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的研究進(jìn)展[J].中國老年學(xué)雜志,2015,35(20):5957-5960.
[6] 付雙全.人參的心血管作用藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2012,28(2):357-359.
[7] 張旭,龔婕寧,卞慧敏,等.麥冬藥物血清抗血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2001,17(5):289-290,331.
[8] 高永峰,朱玉云,高允生.丹參對血管內(nèi)皮細(xì)胞藥理作用的研究進(jìn)展[J].泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007,28(6):474-477.
[9] 林小艷,白金娥,王興寧.丹參川芎嗪注射液對老年腦栓塞患者高壓氧治療后血液流變學(xué)、凝血及氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2017,14(30):143-146,175.
[10] 李曉.桑寄生治療心律失常舉隅[J].中醫(yī)雜志,2002,43(11):812.
[11] 樊來應(yīng).桑寄生治療心痛、短氣60例[J].光明中醫(yī),2010,25(7):1175.
[12] 劉斌,許惠琴,吳誠,等.生地-山茱萸對糖尿病大鼠血管的保護(hù)作用[J].中國老年學(xué),2012,32(13):2750-2752.
[13] 盧笑暉,丁書文.黃連解毒膠囊治療不穩(wěn)定型心絞痛臨床療效及作用機(jī)制研究[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2005,29(6):457-460.
[14] 楊志,鄧旭輝,王定佑.黃連素聯(lián)合辛伐他汀對癥狀性動脈粥樣硬化性顱內(nèi)動脈狹窄患者Lp-PLA2的影響作用臨床研究[J].中國醫(yī)藥科學(xué),2018,8(3):83-85.
[15] 陸暉,陸艷玲.中藥酸棗仁在心腦血管病中的應(yīng)用研究[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2007,5(11):1105-1106.
[16] 于燕,劉繼蘭,王菊英,等.土鱉蟲水提液對實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用[J].山東大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2002,40(5):398-400.
[17] 楊濤,胡朗吉,葛郁芝.中藥甘松抗心律失常作用及其電生理機(jī)制研究[J].現(xiàn)代診斷與治療,2008,19(5):276-278.
[18] Ezekowitz JA,Armstrong PW,Granger CB,et al. Predicting chronic left ventricular dysfunction 90 days after ST-segment elevation myocardial infarction:An Assessment of Pexelizumab in Acute Myocardial Infarction(APEX-AMI)Substudy [J]. Am Heart J,2010,160(2):272-278.
[19] Kloner RA,Ganote CE,Jennings RB. The ''No-Reflow'' Phenomenon after Temporary Coronary Occlusion in the Dog [J]. J Clin Invest,1974,54(6):1496-1508.
[20] White SK,Hausenloy DJ,Moon JC. Imaging the Myocardial Microcirculation Post-Myocardial Infarction [J]. Curr Heart Fail Rep,2012,9(4):282-292.
[21] 曾中三,秦旭平,李潔.一氧化氮對心血管疾病中血管平滑肌細(xì)胞的作用研究進(jìn)展[J].湘南學(xué)院學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2017,19(1):75-78.
[22] 崔麗莉,程剛.一氧化氮在甲狀腺功能減退所致血管內(nèi)皮損傷中作用的研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生,2017,55(28):164-168.
[23] 王三應(yīng),王國付,毛根祥,等.內(nèi)皮素-1與心腦血管疾病研究進(jìn)展[J].心腦血管病防治,2016,16(4):291-293.
[24] 周祎,方偉蓉,李運(yùn)曼.血栓烷A2—新型抗缺血性腦卒中藥物治療靶點(diǎn)[J].藥學(xué)與臨床研究,2014,22(3):246-250.
[25] Defilippis AP,Oloyede OS,Andrikopoulou E,et al. Thromboxane A2 generation,in the absence of platelet COX-1 activity,in patients with and without atherothrombotic myocardial infarction [J]. Circ J,2013,77(11):2786-2792.
[26] 楊進(jìn)山.血管性血友病因子在冠心病中的研究進(jìn)展[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2016,13(15):68-71.
[27] 安國霞,李茹香.血管性血友病因子與冠心病的研究進(jìn)展[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2007,5(8):719-721.
(收稿日期:2018-06-11 本文編輯:羅喬荔)