(汕頭市動物衛(wèi)生監(jiān)督所, 廣東 汕頭 515041)

1 豬瘟及四種檢測方法

豬瘟是一種危害性較大的禽畜疾病，一般是因?yàn)樨i瘟病毒而引發(fā)，當(dāng)前世界動物衛(wèi)生組織將豬瘟列于A類疫病，同時也是當(dāng)前我國要重點(diǎn)防控的動物疫病之一。但是因?yàn)樨i瘟病毒的毒株不同而且毒株的毒性程度不同，所以在臨床的表現(xiàn)以及剖檢的病理上，也存在著區(qū)別。因此對于豬瘟及豬瘟病毒要采用合理的檢測方式進(jìn)行具體的檢測，實(shí)現(xiàn)科學(xué)合理的豬瘟病癥確診，開展合理有效的防控措施。目前針對豬瘟開展的檢測方法主要有4種：①對病毒進(jìn)行分離的鑒定處理，這種也就是將病毒放置于細(xì)胞上進(jìn)行增殖處理后，借助熒光抗體方式在這些細(xì)胞培養(yǎng)物上面進(jìn)行病毒的檢測。②熒光抗體法，借助豬瘟病毒本身的特異性情況，通過熒光抗體法在組織器官里面進(jìn)行病毒的檢測。③酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，在豬組織及血液里進(jìn)行豬瘟病毒粒子的檢測。④反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),對病料里面的病毒核酸進(jìn)行檢測。

2 豬瘟4種檢測方法對比分析

2.1 豬瘟病毒分離鑒定處理

依照常規(guī)的方法進(jìn)行PK-15細(xì)胞的培養(yǎng)處理，并且細(xì)胞培養(yǎng)液是MEM的培養(yǎng)基。之后，從豬的脾臟里面提取一小塊組織剪碎以后放置到乳缽里面進(jìn)行研磨的處理，并且在里面摻入了5倍體積的PBS內(nèi)容將其制成乳液，之后加入離心管里面進(jìn)行離心處理10 min，然后對其上清及濾膜除菌處理之后，獲取到無菌浸出液。并且在蓋玻片以及熒光抗體染色處理之后，等待自然干燥以后對其進(jìn)行培育和沖洗處理，將其封裝以后放置于顯微鏡之下進(jìn)行觀察，如果細(xì)胞里面呈現(xiàn)亮綠色的熒光斑，則屬于陽性病毒，而如果沒有這些光斑，那么就屬于陰性的病毒。

2.2 豬瘟病毒熒光抗體檢測

把無菌采取出來的感染豬瘟病毒的淋巴結(jié)以及脾臟等組織，采用消毒過的剪刀進(jìn)行剪取處理，從而提取出一小塊的組織將其放置于無劃痕的載玻片上面進(jìn)行觸壓處理，在室溫環(huán)境下等待干燥之后進(jìn)行多抗和沖洗及封裝處理，并且在顯微鏡下進(jìn)行觀察，呈現(xiàn)光斑則為陽，沒有光斑則為陰性。

2.3 豬瘟病毒的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

這種檢測方法主要是將組織里面的細(xì)胞提取液進(jìn)行化學(xué)處理之后，在一定的反應(yīng)條件之下，將這些產(chǎn)物稀釋出來的物品進(jìn)行配對及循環(huán)分析，而且在72℃條件下，進(jìn)行10 min的延伸處理，之后將其產(chǎn)物取出來，在瓊脂糖凝膠里面進(jìn)行電泳處理，并借助這種凝膠成像的結(jié)果進(jìn)行具體的病毒情況分析。

2.4 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

采取豬瘟病毒的陽性及陰性還有疑似的病料3 g，將其剪碎之后進(jìn)行研磨處理，并且加入樣品稀釋液充分地進(jìn)行渦旋混勻處理并放置于室溫環(huán)境下1 h，對其進(jìn)行孵育之后將其再進(jìn)行清洗處理，室溫孵育10 min之后對其進(jìn)行終止反應(yīng)處理，從而借助反應(yīng)物的波長測定,將其與對照樣品進(jìn)行對比分析，從而對病毒進(jìn)行確定。

3 結(jié)果分析

上面提到的4種豬瘟檢測方法，綜合對比有以下表現(xiàn)：第1種方法一般不常用，因?yàn)闄z測的時間較長，而且需要的內(nèi)容較多，而豬瘟病毒的熒光抗體檢測一般是對于病料組織里面的豬瘟病毒進(jìn)行檢測，而且檢測的時間比較短，結(jié)果也比較直觀，因此在實(shí)驗(yàn)室里面比較常見。在具體檢測上對于特異性檢測容易出現(xiàn)偏差，例如假陽性的情況，還有觸片的厚薄以及漂洗的具體時間等都會對結(jié)果產(chǎn)生影響。而采用豬瘟病毒的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)進(jìn)行檢測的時候，因?yàn)樨i瘟病毒在這些組織材料里面含量不高，因此在具體檢測的時候能夠有效實(shí)現(xiàn)低含量豬瘟病毒檢測，同時又能精確檢測其特異性情況。最后一種檢測方法，在實(shí)際檢測方面有高效而且敏感的優(yōu)點(diǎn)，并且不大容易受到人為因素的影響，因此其檢測的結(jié)果更加精確。