榮蓉 鹿雙雙 李曉燕

【摘 要】目的：為有效控制感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過程中的生物風(fēng)險(xiǎn)因素，將其控制在可接受的水平，本研究建立了一套感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與控制體系。方法：采用評(píng)估、分析、評(píng)價(jià)風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)的方法，以及風(fēng)險(xiǎn)應(yīng)對(duì)、消除、降低、控制、轉(zhuǎn)移等策略，通過優(yōu)化人力資源、組織機(jī)構(gòu)和設(shè)施硬件水平，建立一套完善的感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺(tái)生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與控制體系。結(jié)果：該體系能夠有效控制感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中可能存在的各種風(fēng)險(xiǎn)，不僅保護(hù)了實(shí)驗(yàn)人員的健康，并且避免了對(duì)周圍環(huán)境帶來的影響。結(jié)論：采取切實(shí)可行的對(duì)策，預(yù)防感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中生物安全事件的發(fā)生，提高平臺(tái)保障能力，確保實(shí)驗(yàn)活動(dòng)有序、高效、安全地開展，并為同行業(yè)其他設(shè)施提供參考。

【關(guān)鍵詞】 感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；生物風(fēng)險(xiǎn)；評(píng)估；控制

【中圖分類號(hào)】R33

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】1005-0019（2018）24-051-01

新發(fā)、再發(fā)傳染病基礎(chǔ)研究、藥物開發(fā)、疫苗研制等工作離不開感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施是指以研究、試驗(yàn)、教學(xué)、生物制品、藥品及相關(guān)產(chǎn)品生產(chǎn)、檢定等為目進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)的建筑物和設(shè)備的總和。而感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺(tái)是一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物特殊實(shí)驗(yàn)設(shè)施[1]。

筆者所在的團(tuán)隊(duì)根據(jù)國內(nèi)外法律法規(guī)的要求，結(jié)合負(fù)壓感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施ABSL-2平臺(tái)的特點(diǎn)摸索出一套感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺(tái)生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與控制體系。該體系主要采用軟件與硬件相結(jié)合的綜合防控方法，由獸醫(yī)、生物安全員、質(zhì)量控制員、項(xiàng)目負(fù)責(zé)人、技術(shù)負(fù)責(zé)人、職業(yè)健康與安全小組組成評(píng)估組成員對(duì)所進(jìn)行的感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行全面、綜合、有效的生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，為實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行提供安全保障。本文對(duì)該體系作一簡單介紹，供同行參考。

1 軟件防控體系建設(shè)

1.1 獸醫(yī)和生物安全員對(duì)病原微生物進(jìn)行生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 ABSL-2平臺(tái)所有實(shí)驗(yàn)活動(dòng)均按照《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》的要求進(jìn)行[2]。項(xiàng)目負(fù)責(zé)人和技術(shù)負(fù)責(zé)人對(duì)實(shí)驗(yàn)申請(qǐng)材料進(jìn)行初審后移交獸醫(yī)。獸醫(yī)和生物安全員參照國內(nèi)外生物安全法律法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)等從實(shí)驗(yàn)所涉及的病原微生物一般生物學(xué)特性、致病性和感染劑量、感染途徑及潛在暴露結(jié)果、自然宿主和易感人群、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究、實(shí)驗(yàn)室感染信息、預(yù)防和治療措施、人員安全狀況評(píng)估、評(píng)估結(jié)論等方面進(jìn)行綜合風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估[3，4，5]。并以衛(wèi)生部《人間傳染的病原微生物名錄》及農(nóng)業(yè)部《動(dòng)物病原微生物分類名錄》為主要參考依據(jù)[6，7]，整合、建立并初步應(yīng)用適合本平臺(tái)的病原微生物生物風(fēng)險(xiǎn)數(shù)據(jù)單（即病原體材料安全數(shù)據(jù)單， Pathogen Material Safety Data Sheet， PMSDS）。

1.2 職業(yè)健康與安全小組對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行職業(yè)健康風(fēng)險(xiǎn)管理 設(shè)立職業(yè)健康與安全小組，對(duì)平臺(tái)內(nèi)涉及到生物安全的工作進(jìn)行監(jiān)督、檢查、指導(dǎo)[8，9]。在進(jìn)行感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)之前，根據(jù)獸醫(yī)和生物安全員對(duì)病原微生物做的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及評(píng)估結(jié)論，結(jié)合實(shí)驗(yàn)人員提供的文獻(xiàn)及實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)對(duì)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)開展風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。所有工作人員經(jīng)病原微生物和實(shí)驗(yàn)活動(dòng)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估內(nèi)容培訓(xùn)后方可開展實(shí)驗(yàn)。由職業(yè)健康與安全小組安排人員對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行全程監(jiān)督。

1.3 建立內(nèi)部工作人員和外來實(shí)驗(yàn)人員的培訓(xùn)考核體系 內(nèi)部工作人員和外來實(shí)驗(yàn)人員均需首先取得從業(yè)人員上崗證。針對(duì)各自的工作特點(diǎn)，設(shè)置不同的培訓(xùn)內(nèi)容[10]，但都需要在培訓(xùn)結(jié)束并通過考核合格后才能夠在本平臺(tái)從事動(dòng)物實(shí)驗(yàn)活動(dòng)?？己撕细竦耐鈦韺?shí)驗(yàn)人員可以申請(qǐng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心門禁卡，僅開通相應(yīng)區(qū)域的權(quán)限。

對(duì)平臺(tái)內(nèi)部工作人員進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的培訓(xùn)，主要內(nèi)容包括：設(shè)施巡查、儀器設(shè)備、進(jìn)出屏障設(shè)施、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)管理、獸醫(yī)相關(guān)、環(huán)境監(jiān)測(cè)、物品采購及管理、衛(wèi)生消毒、個(gè)人防護(hù)與應(yīng)急情況處理、輔助區(qū)域相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程等。

外來實(shí)驗(yàn)人員培訓(xùn)的內(nèi)容主要包括：感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺(tái)基本情況介紹、負(fù)壓屏障設(shè)施標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程及規(guī)章制度總體介紹、生物安全的概念和內(nèi)容、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理、常見突發(fā)事件的應(yīng)急處理和進(jìn)入本設(shè)施的注意事項(xiàng)、進(jìn)入負(fù)壓屏障設(shè)施的進(jìn)出流程、儀器設(shè)備的使用以及其他注意事項(xiàng)等。

1.4 建立四級(jí)文件管理體系 依據(jù)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量管理辦法》和 《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物機(jī)構(gòu) 質(zhì)量和能力的通用要求 GB/T 27416-2014 》[11，12]，建立適合ABSL-2實(shí)驗(yàn)室的四級(jí)管理體系文件：第一級(jí)為管理手冊(cè)，屬于綱領(lǐng)性、政策性文件，針對(duì)ABSL-2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的特點(diǎn)，特別對(duì)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及風(fēng)險(xiǎn)控制、職業(yè)健康及廢棄物處理等方面提出要求；第二級(jí)為程序文件，制定了ABSL-2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室個(gè)人防護(hù)裝備使用、銳器使用、職業(yè)暴露后處理和報(bào)告等相關(guān)程序；第三級(jí)為標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，規(guī)定了涉及設(shè)施巡查、儀器設(shè)備操作、滅菌消毒、個(gè)人防護(hù)與應(yīng)急情況處理等標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程；第四級(jí)為記錄表格，包含20張表格，是ABSL-2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室管理的證據(jù)和資料性文件。

2 硬件防控體系建設(shè)

2.1 實(shí)驗(yàn)區(qū)凈化空調(diào)系統(tǒng)分區(qū)獨(dú)立設(shè)置，動(dòng)物飼養(yǎng)籠具單獨(dú)設(shè)置排風(fēng)系統(tǒng) 實(shí)驗(yàn)區(qū)按動(dòng)物品種及實(shí)驗(yàn)類型將屏障區(qū)一樓和二樓劃分為四個(gè)空調(diào)系統(tǒng)，每個(gè)系統(tǒng)均設(shè)置送、排風(fēng)機(jī)，為雙風(fēng)機(jī)機(jī)組[13]。動(dòng)物飼養(yǎng)室內(nèi)的飼養(yǎng)籠具采用房間內(nèi)取風(fēng)、單獨(dú)排風(fēng)形式（見圖1），按照空調(diào)系統(tǒng)相應(yīng)設(shè)置了四個(gè)飼養(yǎng)籠具排風(fēng)系統(tǒng)。為滿足籠具排風(fēng)機(jī)故障或檢修時(shí)排風(fēng)量要求，一層西區(qū)和二層西區(qū)、一層?xùn)|區(qū)和二層?xùn)|區(qū)分別共同備用一臺(tái)排風(fēng)機(jī)。一層西區(qū)負(fù)壓解剖臺(tái)排風(fēng)系統(tǒng)設(shè)一臺(tái)正常運(yùn)行的排風(fēng)機(jī)組和一臺(tái)備用機(jī)組。所有的風(fēng)機(jī)均采用變頻風(fēng)機(jī)。

2.2 風(fēng)閥調(diào)節(jié)與壓力控制相結(jié)合，確保壓差梯度穩(wěn)定，實(shí)現(xiàn)定向流 采用風(fēng)量調(diào)節(jié)和壓差調(diào)節(jié)相結(jié)合的方式，根據(jù)各房間高低態(tài)實(shí)際運(yùn)行情況控制相應(yīng)房間送風(fēng)兩態(tài)風(fēng)量閥，根據(jù)各房間壓差控制相應(yīng)排風(fēng)變風(fēng)量閥，根據(jù)總送、排風(fēng)管道上壓力調(diào)節(jié)頻率對(duì)變頻器或變風(fēng)量調(diào)節(jié)閥進(jìn)行調(diào)節(jié)[13]，滿足飼養(yǎng)間和緩沖間壓差穩(wěn)定，同時(shí)保證清潔區(qū)向污染區(qū)的定向流和壓差梯度（見圖2）。

在實(shí)驗(yàn)區(qū)房間、飼養(yǎng)籠具及其他設(shè)備等送排風(fēng)支管單獨(dú)設(shè)置風(fēng)量閥和氣密閥。氣密閥的設(shè)置可以關(guān)閉單個(gè)房間的送排風(fēng)，滿足單個(gè)飼養(yǎng)間消毒的需要。當(dāng)房間不使用時(shí)，氣密閥可以關(guān)閉房間的送排風(fēng)管，避免交叉污染，同時(shí)也達(dá)到節(jié)能的效果。

2.3 屏障環(huán)境內(nèi)配置負(fù)壓飼養(yǎng)設(shè)備，達(dá)到環(huán)保三保護(hù)的原則 對(duì)于感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺(tái)來說，結(jié)合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和生物安全實(shí)驗(yàn)室相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)，既要滿足動(dòng)物潔凈度的要求，又要保護(hù)操作者和環(huán)境是首先需要解決的問題[1，14]。通過采用送排風(fēng)系統(tǒng)初、中、高效過濾器達(dá)到飼養(yǎng)環(huán)境潔凈度的要求，使用屏障環(huán)境配置負(fù)壓飼養(yǎng)設(shè)備（如IVC、負(fù)壓飼養(yǎng)柜、隔離器等）滿足保護(hù)操作者和環(huán)境，有效解決了上述問題，達(dá)到環(huán)保三保護(hù)的原則。

2.4 實(shí)驗(yàn)區(qū)廢液經(jīng)污水處理設(shè)備進(jìn)行消毒滅菌后排放 實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)實(shí)驗(yàn)操作過程中產(chǎn)生的污水、動(dòng)物排泄物、洗刷用污水均可能含有病原微生物，這些廢水經(jīng)專用管道收集后進(jìn)入地下一層污水處理設(shè)備，經(jīng)高溫高壓滅菌程序完成后方可排進(jìn)中心園區(qū)實(shí)驗(yàn)污水處理站，再經(jīng)消毒處理達(dá)到中水標(biāo)準(zhǔn)后進(jìn)入園區(qū)人工湖，用于園區(qū)綠化灌溉[15]。污水處理設(shè)備為序批式處理工藝，采用夾套式蒸汽處理方式加熱。為了確保污水處理設(shè)備的安全運(yùn)行和滅菌的效果，設(shè)備中含有一套EDS監(jiān)控系統(tǒng)，可以直接觀察運(yùn)轉(zhuǎn)的步驟用時(shí)及各項(xiàng)參數(shù)曲線，若有溫度或壓力在設(shè)定時(shí)間內(nèi)未滿足參數(shù)設(shè)定值則系統(tǒng)隨時(shí)報(bào)警。同時(shí)每個(gè)處理罐帶有一個(gè)消毒驗(yàn)證口，可使用專用生物指示劑進(jìn)行消毒滅菌效果檢驗(yàn)。

3 討論

感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與控制體系通過人力資源及組織機(jī)構(gòu)的建設(shè)保障平臺(tái)運(yùn)行全過程的生物安全。在風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估過程中人員分工明確、各司其職，工作開展有序，既兼顧了效率又提供了有力的安全保障措施。建立的不僅針對(duì)內(nèi)部工作人員，同樣適用于外來實(shí)驗(yàn)人員的雙證加雙考核培訓(xùn)考核體系，能夠使實(shí)驗(yàn)人員了解負(fù)壓屏障設(shè)施個(gè)人防護(hù)裝備、掌握感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施人、物流向，熟練進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作，從根本上提高實(shí)驗(yàn)效率，減少動(dòng)物及環(huán)境污染的機(jī)會(huì)。標(biāo)準(zhǔn)化、系統(tǒng)化、特色化且適合ABSL-2平臺(tái)的四級(jí)管理體系文件，是平臺(tái)運(yùn)行和生物安全管理的重要依據(jù)和保證。這套ABSL-2實(shí)驗(yàn)室管理體系文件將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施管理和生物安全管理結(jié)合在一起，提高了實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部管理水平，確保ABSL-2實(shí)驗(yàn)室安全、順利運(yùn)轉(zhuǎn)。采用的屏障加屏障、負(fù)壓加屏障及原位消毒滅菌的硬件模式，為實(shí)驗(yàn)區(qū)動(dòng)物飼養(yǎng)間送風(fēng)支管設(shè)置兩態(tài)定風(fēng)量閥和氣密閥，房間可實(shí)現(xiàn)“高低態(tài)”切換，既滿足國標(biāo)要求又實(shí)現(xiàn)節(jié)能理念。送排風(fēng)系統(tǒng)初、中、高效過濾器達(dá)到飼養(yǎng)環(huán)境潔凈度的要求，使用屏障環(huán)境配置負(fù)壓飼養(yǎng)設(shè)備（如IVC、負(fù)壓飼養(yǎng)柜、隔離器等）保障人員和環(huán)境安全。

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