◎ 宋三妹

（中檢溯源華南技術(shù)服務(wù)（深圳）有限公司，廣東 深圳 518001）

香菇具有化痰理氣、治風(fēng)破血的功效，經(jīng)常食用能夠有效預(yù)防人體各種皮膚炎癥、毛細(xì)血管破裂以及佝僂病等。香菇主要含有抗壞血酸、核黃素等，最主要的活性成分為香菇多糖，近些年，相關(guān)人員研究發(fā)現(xiàn)多糖能夠有效加強(qiáng)細(xì)胞免疫力，抑制癌細(xì)胞生產(chǎn)，對(duì)抗肝炎以及病毒皆具有積極作用。為此，加大對(duì)香菇中粗多糖含量的測(cè)定力度勢(shì)在必行。當(dāng)下測(cè)定香菇中粗多糖含量的常見方法有苯酚硫酸法與蒽酮硫酸法，具體操作如下。

1 材料

1.1 原料和試劑

香菇來(lái)自藥材公司，通過(guò)中藥教研室鑒定為傘菌科香蕈。葡萄糖、水是重蒸水；其他試劑皆是分析純。

1.2 設(shè)備

可見紫外分光光度儀、電子天平、多功能粉碎機(jī)、數(shù)控超聲儀、數(shù)控超聲波清洗器、離心機(jī)。

2 方法和結(jié)果

2.1 苯酚+硫酸法

2.1.1 曲線制備

（1）配制葡萄糖對(duì)照溶液。稱取10 mg無(wú)水葡萄糖加入100 mL容量瓶中，添加適量的水溶解后定容，將其搖勻，即制得葡萄糖濃度的濃度為0.1 mg/mL。

（2）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。量取對(duì)照溶液0.0、0.1、0.3、0.6、1.1 mL和1.7 mL分別加入試管之中，加水補(bǔ)充到2.0 mL，分別添加5%苯酚溶液1 mL，混合完全，迅速添加5 mL濃硫酸混合均勻，在恒溫水中恒溫反應(yīng)15 min，再將其放置到冷水中進(jìn)行冷卻，阻斷其繼續(xù)反應(yīng)；基于第一份為標(biāo)準(zhǔn)，依照分光光度法，在485 nm處測(cè)定吸光度，以葡萄糖的濃度為縱坐標(biāo)，以吸光度為橫坐標(biāo)繪制回歸曲線，結(jié)果得出回歸方程為Y=6.371X+0.012，R2=0.998。

2.1.2 供試品溶液的配制與樣品測(cè)定

取0.3 g的香菇粉，添加5 mL的水濕潤(rùn)樣品，再添加20 mL 95%乙醇，混合均勻，超聲提取30 min，過(guò)濾，利用少量的乙醇洗滌濾器，將濾紙與濾渣皆放到燒瓶之中，加入50 mL的水，加熱回流2 h，趁熱濾過(guò)，利用少量熱水清洗濾器，合并洗液和濾液，放到冷卻，移到100 mL的量瓶中，利用水稀釋到刻度處，混合均勻，進(jìn)而得到供試品溶液。量取2.0 mL供試品溶液，利用置具塞依法對(duì)吸光度進(jìn)行測(cè)定，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多糖含量，得出每100 g香菇干品可獲得5～8 g的粗多糖，經(jīng)過(guò)純化處理后，可提取1 g左右的純多糖[1]。

2.1.3 優(yōu)化提取方式

當(dāng)前香菇多糖測(cè)定方法主要為提取方法的選取，基于此對(duì)提取方法比較與研究。

（1）醇提后水提法。準(zhǔn)備香菇粗粉0.5 g，加入5 mL的水浸濕試樣，再緩緩添加20 mL 95%乙醇，混合均勻，超聲提取30 min，過(guò)濾，利用少量的乙醇洗滌濾器，將濾紙與濾渣皆放到燒瓶之中，加入50 mL的水，加熱回流2 h，趁熱濾過(guò)，利用少量熱水清洗濾器，合并洗液和濾液，放到冷卻，移到100 mL的量瓶之中，利用水稀釋到刻度處，混合均勻，進(jìn)而得到供試品溶液[2]。

（2）水提醇沉法。準(zhǔn)備香菇粗粉0.1 g，加入50 mL的水，加熱回流2 h，趁熱濾過(guò)，利用少量熱水清洗濾器，合并洗液和濾液，放到冷卻，移到100 mL的量瓶之中，利用水稀釋到刻度處，混合均勻，準(zhǔn)確量取2 mL上述品液，加入10 mL的乙醇溶液，進(jìn)行攪拌，離心10 min，提取沉淀物加水進(jìn)行溶解，放到100 mL的量瓶之中，并稀釋到刻度，進(jìn)而得到供試品溶液。

準(zhǔn)確2 mL的試品溶液，添加5%苯酚溶液1 mL，混合均勻，再迅速添加5 mL的濃硫酸，混合均勻，在恒溫水中恒溫反應(yīng)15 min，再將其放置到冷水中進(jìn)行冷卻，阻斷其繼續(xù)反應(yīng)；以空白調(diào)零，在485 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行測(cè)定，展開3次平行試驗(yàn)，對(duì)多糖含量進(jìn)行計(jì)算[3]。

2.1.4 重復(fù)性試驗(yàn)

依據(jù)供試品制備方式同時(shí)配制6份溶液，依法顯色之后對(duì)其吸光度A進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算香菇內(nèi)的多糖含量。結(jié)果重復(fù)性值為1.01%。結(jié)果顯示，此法重復(fù)性較佳。

2.1.5 精密度試驗(yàn)

準(zhǔn)備供試品溶液，依法顯色之后對(duì)其吸光度A6進(jìn)行連續(xù)測(cè)定。結(jié)果精密度值是0.65%。結(jié)果顯示，該法精密度極佳。

2.1.6 香菇多糖含量測(cè)定

依據(jù)優(yōu)選的供試品溶液制備方式，準(zhǔn)備香菇依法進(jìn)行測(cè)定。展開3次平行試驗(yàn)，對(duì)香菇的多糖含量進(jìn)行計(jì)算，得出每100 g香菇干品可獲得5～8 g的粗多糖，經(jīng)過(guò)純化處理后，可提取1 g左右的純多糖[4]。

2.2 蒽酮-硫酸法

2.2.1 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線

（1）配制葡萄糖對(duì)照溶液。取無(wú)水葡萄糖20 mg加入100 mL的容量瓶中，添加適量的水進(jìn)行溶解，將水加到刻度處，將其搖勻，即葡萄糖的濃度為0.2 mg/mL。

（2）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。量取對(duì)照溶液0.0、0.3、0.7、1.5 mL和2.0 mL，加水補(bǔ)充到2.0 mL，分別置于試管之中，分別添加5%蒽酮-濃硫酸溶液4 mL，混合完全，在沸水中恒溫反應(yīng)15 min，再將其放置到冷水中冷卻，阻斷其繼續(xù)反應(yīng)；基于第一份為標(biāo)準(zhǔn)，依照分光光度法，在615 nm處測(cè)定吸光度，以葡萄糖的濃度為縱坐標(biāo)，以吸光度為橫坐標(biāo)繪制回歸曲線，結(jié)果得出回歸方程式 Y=3.105X+0.041，R2=0.997。

2.2.2 供試品溶液的配制

取0.3 g的香菇粉，確保稱的精準(zhǔn)度，添加5 mL的水濕潤(rùn)樣品，同時(shí)添加20 mL 95%乙醇，混合均勻，超聲提取30 min，過(guò)濾，利用少量的乙醇對(duì)濾器進(jìn)行洗滌，將濾紙與濾渣皆放到燒瓶之中，加入50 mL的水，加熱回流2 h，趁熱濾過(guò)，利用少量熱水清洗濾器，合并洗液和濾液，放到冷卻，移到100 mL的量瓶之中，利用水稀釋到刻度處，混合均勻，進(jìn)而得到供試品溶液。量取2.0 mL供試品溶液，利用置具塞依法對(duì)吸光度進(jìn)行測(cè)定，自分別添加0.5%蒽酮-濃硫酸溶液4 mL起，依法測(cè)定吸光度，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出供試品溶液內(nèi)的多糖含量，得出每100 g香菇干品可獲得5～8 g的粗多糖，經(jīng)過(guò)純化處理后，可提取1 g左右的純多糖[5]。

2.2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

依據(jù)供試品制備方式同時(shí)配制6份溶液，依法顯色之后對(duì)其吸光度A進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算香菇內(nèi)的多糖含量。結(jié)果重復(fù)性值是2.21%，此法重復(fù)性較佳。

2.2.5 精密度試驗(yàn)

準(zhǔn)備供試品溶液，依法顯色之后對(duì)其吸光度進(jìn)行連續(xù)測(cè)定。結(jié)果精密度值是1.26%。結(jié)果顯示，該法精密度極佳。

2.2.6 香菇多糖含量測(cè)定

依據(jù)優(yōu)選的供試品溶液制備方式，準(zhǔn)備香菇依法進(jìn)行測(cè)定。展開3次平行試驗(yàn)，對(duì)香菇的多糖含量進(jìn)行計(jì)算，得出每100 g香菇干品可獲得5～8 g的粗多糖，經(jīng)過(guò)純化處理后，可提取1 g左右的純多糖。

3 結(jié)語(yǔ)

不管是苯酚硫酸法，還是蒽酮硫酸法，對(duì)香菇多糖含量測(cè)定皆有顯著效果，為此，相關(guān)人員需給予苯酚硫酸法與蒽酮硫酸法高度重視，促使其存在的價(jià)值與效用在香菇多糖含量測(cè)定中充分的發(fā)揮出，為提高香菇多糖含量測(cè)定水平提供有利條件。