王 政

（湖北省興山縣畜牧獸醫(yī)局，湖北 興山 443700）

近年來，隨著畜牧業(yè)的轉(zhuǎn)型升級，人們對草食畜的需求越來越大。2018年5月，興山縣一養(yǎng)殖戶從外地購進(jìn)20頭母牛。7d后有5頭出現(xiàn)不同程度的水樣糞便并伴有惡臭、大量粘液和氣泡，經(jīng)現(xiàn)場解剖和實驗室診斷，確診為牛病毒性腹瀉，運用利巴韋林、安普霉素等治療后，控制了發(fā)病和死亡，現(xiàn)將該病診斷情況報告如下：

1 臨床癥狀

牛病毒性腹瀉為黃病毒科、瘟病毒屬的牛病毒性腹瀉病毒引起的一種傳染病性疾病，這種病也被稱為牛黏膜病。

1.1 急 性

病畜精神沉郁，厭食，眼鼻有漿液性分泌物，2～3d內(nèi)鼻鏡及口腔黏膜表面糜爛牛突然發(fā)病，體溫升高至40～42℃，持續(xù)3～5d。舌面上皮壞死，流涎增多，呼氣惡臭。通常在口內(nèi)損害之后常發(fā)生嚴(yán)重腹瀉，開始水瀉，以后帶有黏液和血。部分病牛有蹄葉炎及趾間皮膚糜爛壞死，從而導(dǎo)致跛行。死于發(fā)病后1周。

1.2 慢性

體溫高于正常的波動。鼻鏡糜爛，病牛消瘦眼有漿液分泌物，門齒齒齦發(fā)紅。由于蹄葉炎及趾間皮膚糜爛壞死而致的跛行是最明顯的癥狀。

2 病例剖檢

尸體消瘦，牛鼻鏡、鼻孔有糜爛及潰瘍，齒齦、上腭、舌面兩側(cè)和頰部黏膜有糜爛，瘤胃黏膜出血，真胃炎性水腫和糜爛。腸壁水腫增厚，腸淋巴結(jié)腫大，小腸急性卡他性炎癥，空腸、回腸較為嚴(yán)重，盲腸、結(jié)腸、直腸有潰瘍性以及壞死性炎癥。

3 實驗室診斷

3.1 實驗材料

3.1.1 標(biāo)準(zhǔn)毒株

Oregon C24V、標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、標(biāo)準(zhǔn)陰性血清均來自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所。

3.1.2 MDBK細(xì)胞、96孔微量板、多道移液器、單道移液器

3.1.3 培養(yǎng)基

（1）稀釋液pH7.0～7.2，1mL加100mg鏈霉素和100IU青霉素。

（2）生長液：營養(yǎng)液加10%無BV/BD抗體和污染e152的犢牛血清。

（3）維持液：營養(yǎng)液加3%犢牛血清。

3.1.4 被檢血清，56℃滅活30min。

3.2 實驗步驟

3.2.1 定量測定

（1）在96孔微量板中，每孔加入50μL稀釋液。

（2）用單道移液器吸取50μL滅活的被檢血清加于微量板的第一排孔中，每份樣品加4個孔。

（3）多道移液器調(diào)至50μL，從第一孔開始連續(xù)做倍比稀釋，直至最后一孔，并從最后一孔吸取50μL棄去。

（4）用稀釋液將標(biāo)準(zhǔn)病毒（Oregon C24V）稀釋成含100TCID50/50μL的工作液。

（5）從第二孔開始每孔加病毒工作液50μL，第一排孔中加50μL稀釋液作為被檢血清毒性對照。

（6）封板，置于37℃5%CO2培養(yǎng)箱中中和2.5h。

（7）每孔加入100μL細(xì)胞懸液。

（8）封板，置于37℃5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6d，從第4天開始觀察結(jié)果，并于第6d作終判。

（9）實驗對照：

（A）陽性血清對照：2倍稀釋血清50μL+50μL病毒工作液+100μL細(xì)胞懸液。

（B）陰性血清對照：2倍稀釋血清50μL+50μL病毒工作液+100μL細(xì)胞懸液。

（C）正常細(xì)胞對照：100μL細(xì)胞懸液+100μL維持液。

（D）病毒用量滴定：將病毒工作液用稀釋液作3次10倍遞進(jìn)稀釋取：

（a）10-1病毒工作液10TCID50/50μL+稀釋液50μL+細(xì)胞懸液100μL；

（b）10-2 病毒工作液1TCID50/50μL+稀釋液50μL+細(xì)胞懸液100μL；

(c）10-3 病毒工作液0TCID50/50μL+稀釋液50μL+細(xì)胞懸液100μL；

以上各對照均作4孔。

3.2.2 雙份血清測定

（1）雙份血清取去同一動物，間隔21d。

（2）試驗方法同

3.3 結(jié)果判定

每份血清同一稀釋度的4個孔中有兩個孔完全被保護(hù)，不出現(xiàn)細(xì)胞病變（CPE）時，該稀釋度倒數(shù)即為該血清的抗體滴度。

雙份血清測定：當(dāng)間隔21d的第二份血清的滴度高于第一份血清兩個或兩個以上滴度，則表示該牛正在發(fā)病過程中。

4 診斷結(jié)果

根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀、剖檢病變及實驗室檢查結(jié)果,確診為牛病毒性腹瀉。

5 治療措施

該病目前尚無有效療法，應(yīng)加強(qiáng)管理，對病牛對癥治療和加強(qiáng)護(hù)理，增強(qiáng)病牛抵抗力。

（1）對病牛、可疑病牛分群隔離和治療；對被污染的牛舍、用具和病牛的尸體、糞便等，進(jìn)行徹底消毒或無害處理。

（2）對出現(xiàn)臨床癥狀的牛采用

（a）0.9%氯化鈉500mL，VC注射液 60mL，三磷酸腺苷二鈉注射液 80mg，輔酶A 300 U一次混合靜脈注射，連用3～4d。

（b）5%葡萄糖500mL，利巴韋林2g靜脈注射，連用3～4d。

（c）5%碳酸氫鈉500mL靜脈注射，連用3～4d。

（d）左氧氟沙星500mL靜脈注射，連用3～4d。

（3）為鞏固療效，防止繼發(fā)感染在牛飼料中按150g/t的濃度拌入安普霉素全群給藥。連用5～7d。

6 小結(jié)與討論

通過上述治療，4d后病牛食欲增加，病情得到了有效控制，通過診治可見，牛病毒性腹瀉只要早防早治，準(zhǔn)確診斷及時用藥，可以達(dá)到滿意的控制效果。

（1）禁止引入或遷入病牛和帶菌者。新引進(jìn)牛只必須隔離觀察1個月以上，確認(rèn)健康時方可混群。

（2）對威脅區(qū)和易感染區(qū)及時免疫接種牛病毒性腹瀉滅活苗是預(yù)防本病的有效措施。

（3）場地、飼管用具進(jìn)行定期消毒；糞便等進(jìn)行無害處理。

（4）科學(xué)調(diào)配飼料配方，根據(jù)年齡、體重進(jìn)行合理的飼料搭配，保證所需營養(yǎng)物質(zhì)的供給，增強(qiáng)機(jī)體的抵抗力。