張旭東 陶佩琳

（徐州生物工程職業(yè)技術學院，江蘇徐州 221000）

植物組織培養(yǎng)，亦可稱之為植物克隆，指的是在無菌操作下將植物外植體接種在人工配制的培養(yǎng)基上，在人工控制環(huán)境下開展離體培養(yǎng)的一項技術。隨著我國植物組織培養(yǎng)工廠化的不斷發(fā)展，植物組織培養(yǎng)技術日益成熟，在市場經(jīng)濟日趨白熱化背景下，如何縮減成本是提高市場競爭優(yōu)勢的重中之重，植物組織培養(yǎng)中污染率的提升必然會提高組培苗的生產(chǎn)成本，進而造成嚴重的經(jīng)濟損失[1]。所以，在植物組織培養(yǎng)過程中加強污染治理是工廠化生產(chǎn)中必不可少的技術環(huán)節(jié)。植物組織培養(yǎng)過程中引發(fā)污染的原因多種多樣，應結(jié)合實際情況采取不同針對的治理手段。由此可見，對植物組織培養(yǎng)中污染治理開展研究有著十分重要的現(xiàn)實意義。

1 植物組織培養(yǎng)中污染引發(fā)的原因

植物組織培養(yǎng)中的污染指的是組織培養(yǎng)期間培養(yǎng)基、培養(yǎng)材料生成雜菌，造成培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象。在植物組織培養(yǎng)過程中，污染是十分常見的一種現(xiàn)象。從病原菌角度展開分析，植物組織培養(yǎng)中污染引發(fā)原因主要包括細菌、真菌兩方面。其中，細菌性污染主要表現(xiàn)為培養(yǎng)材料局部產(chǎn)生黏液狀物，或者在培養(yǎng)材料附近培養(yǎng)基中產(chǎn)生混濁、云霧狀痕跡，通常在接種后一兩天就能發(fā)現(xiàn)。細菌性污染除去外植體帶菌或者培養(yǎng)基滅菌不完全以外，大多是操作人員操作不當造成的。值得一提的是，除去要求操作人員切實依據(jù)無菌操作規(guī)劃流程外，外植物體帶菌引發(fā)的污染還與外植體的種類、預處理方法、取材季節(jié)等密切相關。真菌性污染指的是霉菌引發(fā)的污染，通常接種后3～10d就能在培養(yǎng)基發(fā)現(xiàn)各式各樣顏色的菌斑。真菌性污染主要由超凈工作臺過濾效果不佳、室內(nèi)空氣不潔凈、操作不當?shù)仍蛞鸬摹?/p>

2 植物組織培養(yǎng)中污染治理措施

2.1 合理選擇外植體的種類外植體種類選擇應遵循污染少、易啟動原則，應從溫室或者農(nóng)田中生長健壯且無病蟲害的植株上選擇發(fā)育良好的組織或者器官作為外植體?；蛘卟杉仓昴凵曳胖糜跐崈舻目諝庵兴喑檠?，再運用該部分新生組織培養(yǎng)，離體培養(yǎng)不僅便捷適用，還可防止污染。例如，胚用作外植體便易于培養(yǎng)成功，其不僅具有十分幼嫩的分生組織細胞，還可防止污染。但是，并非任何材料均可獲取胚作為外植體，通常，不可運用相關已分化的二倍體組織如腋芽、頂芽、根、葉和莖段等。

2.2 合理選擇外植體的獲取季節(jié)、時間、部位選擇外植體以材料累積了相對豐富的營養(yǎng)及內(nèi)源激素為理想季節(jié)。通常，以在材料休眠末期或者萌動前期取材為宜。切忌陰雨天在農(nóng)田挑選外植體，而應在晴天午后進行采集，這是因為外紙條在陽光直射下可將部分細菌、真菌殺死。對于大部分植物而言，所選外植體以莖尖為佳，這是因為莖形態(tài)已大致形成，且遺傳性穩(wěn)定，病毒含量低或者無病毒。但是，莖尖外植體數(shù)量相對稀少，因而材料中上部莖段同樣是較好的外植體[2]。值得一提的是，不同植物的不同部位因為自身生長特征的不同，在外植體培養(yǎng)中也存在一定的差異性。另外，選擇容易消毒、滅菌的組織部位開展培養(yǎng)，同樣可降低污染率。

2.3 加強操作過程中的污染防控在植物組織培養(yǎng)過程中，一方面應加強實驗器材滅菌工作。植物組織培養(yǎng)需要運用到多種多樣的實驗器材，包括各式各樣玻璃材質(zhì)的培養(yǎng)器皿、各式各樣鐵質(zhì)的接種用具等。對于培養(yǎng)器皿的滅菌處理而言，因為培養(yǎng)器皿主要為玻璃材質(zhì)，所以使用前應清洗干凈并放置于烤箱中通過干熱滅菌法開展滅菌處理，為培養(yǎng)基配制及接種實驗使用提供可靠的滅菌保障。對于接種用具的滅菌處理而言，因為接種用具主要為鐵質(zhì)材質(zhì)，所以可選用灼燒法開展滅菌處理。在接種過程中，接種用刀、鑷子等反復使用后，放置于酒精燈外焰上予以灼燒處理，有效防止接種用具上沾染細菌引起污染[3]。另一方面應開展好實驗藥劑滅菌工作。實驗藥劑配置結(jié)束應開展滅菌處理，可用高壓蒸汽滅菌法對接種所用培養(yǎng)基予以滅菌處理，即為將配制完畢的培養(yǎng)基倒入經(jīng)由滅菌處理的培養(yǎng)皿中并進行封口處理，再放置于高壓蒸汽滅菌鍋中開展高壓蒸汽滅菌處理。值得一提的是，滅菌后切忌立即開啟高壓蒸汽滅菌鍋，避免由于培養(yǎng)皿內(nèi)外氣壓引起培養(yǎng)皿封口膜被氣壓頂開。

3 結(jié)語

隨著科學技術的飛速發(fā)展，使得植物組織培養(yǎng)技術得到了廣泛的應用。而要想使該項技術得到進一步應用，控制及降低其污染率是重中之重。因此，植物組織培養(yǎng)相關人員必須加強研究分析，提高對植物組織培養(yǎng)中污染引發(fā)原因的有效認識，采取措施預防與控制污染，保障培養(yǎng)材料正常生長發(fā)育。