從國彬 張 濤 王恩漫 閆 哲 李向陽

(商丘醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 商丘 476000)

經(jīng)皮冠狀動脈介入(PCI)可以迅速改善缺血冠狀動脈的血液供應(yīng)，是有效治療冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(CHD)急、慢性心肌組織缺血〔ST段抬高心肌梗死(STEMI)、非STTEMI(non-STEMI)與不穩(wěn)定型心絞痛(UA)〕的常用方法〔1〕。然而，PCI可以導(dǎo)致一系列血管并發(fā)癥，包括血管夾層、再狹窄，甚至死亡。所有這些都可能是由于術(shù)后內(nèi)皮功能障礙和血小板活化引起的〔2,3〕。因而，就患者是否需行PCI治療的靶控技術(shù)：冠脈血流儲備分數(shù)(FFR)應(yīng)運而生。但是，F(xiàn)FR把控是否與內(nèi)皮功能相關(guān)目前未見報道，本研究探討FFR與同樣反映內(nèi)皮功能的循環(huán)微粒(MPs)的關(guān)系及對內(nèi)皮功能的影響。

1 資料與方法

1.1研究對象 對照組選取來商丘市第一人民醫(yī)院健康體檢的30例志愿者,年齡35～65歲。實驗組選取2016年6～12月就診于商丘市第一人民醫(yī)院心內(nèi)科行冠脈造影(CAG)提示中-重度(同時測量其FFR)的CHD患者50例，年齡38～62歲，同時排除患有糖尿病、高血壓、腎衰竭、嚴重感染性疾病等影響MPs含量疾病的患者。參與者均簽署知情同意書，且本研究已通過商丘市第一人民醫(yī)院倫理委員會審核。兩組年齡、性別比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

1.2MPs提取及分析與FFR的關(guān)系 抽取參與者空腹靜脈血，按參考文獻〔4〕提取MPs：靜脈血進行離心(4℃ 4 000 r/min，10 min)后提取上層血漿后再次離心(4℃ 11 000 r/min，2 min)，離心結(jié)束后取上層乏血小板血漿2 ml進行最后一次離心(4℃ 13 000 r/min，45 min)。最后將MPs(白色顆粒)沉淀于離心管底部，用100 μl的RPMI1640培養(yǎng)基混懸，用聚氰基丙烯酸正丁酯(BCA)蛋白濃度測定試劑盒測定MPs濃度后備用。

表1 兩組一般臨床資料

與對照組比較：1)P<0.05

1.3離體大鼠血管的制備 SD大鼠購買于第三軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心，斬頭處死大鼠，開胸取大鼠胸主動脈并置于預(yù)冷并通氣(95% O2與 5% CO2的混合氣)的Kreb平衡液(NaCl 119.0 mmol/L,NaHCO325.0 mmol/L，葡萄糖11.1 mmol/L,CaCl21.6 mmol/L,KCl 4.7 mmol/L,KH2PO41.2 mmol/L和MgSO41.2 mmol/L,pH7.4)內(nèi)，顯微鏡下仔細剔除動脈周圍組織后備用。

1.4MPs對血管舒張功能的影響 將制備的大鼠胸主動脈剪為3～4 mm的血管環(huán)并連接至含有Kreb平衡液(37℃，通氣)的BL-420E+生物機能試驗系統(tǒng)上。血管平衡1.5 h后將等量的兩組MPs孵育血管環(huán)30 min，用苯腎上腺素(10-6mol/L)刺激血管收縮至平臺期，然后依次加入10-7～10-4mol/L 的乙酰膽堿促進血管舒張，記錄血管舒張結(jié)果，比較兩組MPs對血管舒張功能影響的差異(實驗設(shè)置空白組檢測血管內(nèi)皮的完整性)。

1.5MPs對一氧化氮(NO)生成的影響 將制備好的大鼠胸主動脈剖開并放入DMEM1640培養(yǎng)基中并放入細胞培養(yǎng)箱內(nèi)平衡1 h，加入等量的兩組MPs孵育0.5 h后取上清培養(yǎng)基用NO檢測試劑盒(南京建成生物科技有限公司)進行檢測，稱量血管環(huán)干重用于計算NO含量(μmol/g 蛋白)。

1.6統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS10.0 軟件進行t檢驗和方差分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組一般臨床資料 兩組體質(zhì)指數(shù)無統(tǒng)計學(xué)差異，實驗組高密度脂蛋白較對照組明顯偏低(P<0.05)，實驗組總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白含量較對照組明顯偏高(P<0.05)。見表1。

2.2兩組MPs水平比較 實驗組MPs含量〔(4.63±1.52)mg/ml〕較對照組〔(2.61±0.64)mg/ml〕明顯升高(P<0.05)。實驗組MPs含量與FFR呈負相關(guān)(P<0.000 1)。見圖1。

2.3兩組血管舒張功能、NO生成水平比較 與對照組(89.83%±11.74%)、空白組(90.83%±10.51%)比較，實驗組最大血管舒張值〔FFR≥0.8組：69.67%±9.42%；FFR<0.8組：47.84%±10.33%〕顯著降低(P<0.05)，且FFR<0.8組最大血管舒張值較FFR≥0.8組明顯降低(P<0.05)。與空白組〔(2.23±0.61)μmol/g〕及對照組〔(2.46±0.73)μmol/g〕比較，實驗組NO生成水平〔FFR≥0.8組：(1.46±0.47) μmol/g；FFR<0.8組：(0.77±0.23) μmol/g〕明顯減少(P<0.05)，且FFR<0.8組較FFR≥0.8組更低(P<0.05)。

圖1 實驗組MPs與FFR相關(guān)性

3 討 論

本研究提示中-重度冠脈狹窄的CHD患者體內(nèi)的MPs含量與FFR呈負相關(guān)，且MPs抑制血管舒張功能和NO生成的能力與FFR呈負相關(guān)。CAG被認為是CHD診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。CAG能夠發(fā)現(xiàn)冠脈的具體狹窄的部位、狹窄程度，然而，是否冠脈狹窄一定有心肌缺血及支架植入的指征，CAG的結(jié)果無法做出精確評估。FFR是在冠脈循環(huán)達到最大充血狀態(tài)時，通過測量冠狀動脈病變遠端的壓力與主動脈根部壓力的比值反映心肌缺血情況，原則上FFR>0.8時狹窄冠脈無須支架干預(yù)。目前FFR可檢測左主干病變、多支病變、彌漫長病變、分叉病變等。尤其是多支病變，F(xiàn)FR可識別心肌缺血相關(guān)靶病變，通過干預(yù)缺血相關(guān)靶病變，真正實現(xiàn)“功能學(xué)”血運重建。

MPs在血液高凝狀態(tài)下、炎癥反應(yīng)及內(nèi)皮功能受損時含量升高，而升高的MPs又可以反過來刺激和加重高凝狀態(tài)、炎癥反應(yīng)和內(nèi)皮功能受損〔5，6〕。MPs可以抑制內(nèi)皮型NO合酶(eNOS)的表達，進而抑制離體心臟血管的新生〔7，8〕。主動脈瓣重度狹窄患者瓣膜口狹窄所形成的切應(yīng)力及血流動力學(xué)改變會增加體內(nèi)MPs含量，MPs不僅僅可以因內(nèi)皮損傷而產(chǎn)生增加，而且升高的MPs可以進一步加重心臟瓣膜損傷〔9，10〕。鑒于MPs與內(nèi)皮功能受損、炎癥反應(yīng)、高凝狀態(tài)的相互關(guān)系，尤其是中-重度冠脈狹窄(FFR<0.8)時，CHD患者冠脈內(nèi)皮功能異常、血液呈高凝狀態(tài)。本研究提示嚴重的心肌缺血(較低的FFR值)可以導(dǎo)致MPs含量的升高；CHD患者的MPs抑制血管舒張功能和NO的生成，而且MPs抑制血管舒張功能和NO生成的能力與FFR呈負相關(guān)，提示嚴重的心肌缺血(較低的FFR值)時MPs影響血管功能的能力較強。

1Monnink SH,Tio RA,Veeger NJ,etal.Exercise-induced ischemia after successful percutaneous coronary intervention is related to distal coronary endothelial dysfunction〔J〕.J Investig Med,2003;51(4):221-6.

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3Izzo P,Macchi A,De Gennaro L,etal.Recurrent angina after coronary angioplasty:mechanisms,diagnostic and therapeutic options〔J〕.Eur Heart J Acute Cardiovasc Care,2012;1(2):158-69.

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5Nagy JA,Benjamin L,Zeng H,etal.Vascular permeability,vascular hyperpermeability and angiogenesis 〔J〕.Angiogenesis,2008;11(2):109-19.

6Deanfield JE,Halcox JP,Rabelink TJ.Endothelial function and dysfunction:testing and clinical relevance 〔J〕.Circulation,2007;115(10):1285-95.

7Marti CN,Gheorghiade M,Kalogeropoulos AP,etal.Endothelial dysfunction,arterial stiffness,and heart failure〔J〕.J Am Coll Cardiol,2012;60(16):1455-69.

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