龔洪濤，杜鳳和，陳步星

血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑（ARB）是一線降壓藥物，目前臨床上應(yīng)用較為廣泛。ARB作用于腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS），通過選擇性阻斷血管緊張素Ⅱ受體1（AT1）, 進(jìn)而阻斷血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）收縮血管、升高血壓、促進(jìn)醛固酮分泌、興奮交感神經(jīng)等作用。高血壓患者對(duì)于該類藥物的降壓療效存在個(gè)體差異，RAAS基因多態(tài)性可能對(duì)降壓藥物療效具有一定的預(yù)測(cè)作用［1-2］。血管緊張素原（AGT）是AngⅡ的唯一前體物質(zhì)，在RAAS中有非常重要的作用，血漿中AGT水平直接影響AngⅡ的生成，是血壓遺傳研究的一個(gè)重要候選基因［3］。本研究對(duì)高血壓患者采用替米沙坦單藥治療，在觀察降壓療效的同時(shí)對(duì)AGT基因啟動(dòng)子區(qū)單核苷酸多態(tài)性（SNPs）位點(diǎn)AGT-6 A/G和AGT-20 A/C基因型進(jìn)行分析，探討替米沙坦降壓療效與AGT啟動(dòng)子區(qū)基因多態(tài)性的關(guān)系，為臨床降壓治療及藥物的選擇提供依據(jù)。

本文主要內(nèi)容：

高血壓是目前最常見的心血管疾病，但是降壓藥物的降壓療效存在個(gè)體差異，本研究通過分析腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）中的血管緊張素原啟動(dòng)子區(qū)基因多態(tài)性與血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑（ARB）類降壓藥物降壓療效的關(guān)系，為高血壓患者的個(gè)體化治療提供新思路及理論依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2005年6月—2007年1月首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院門診符合納入標(biāo)準(zhǔn)的漢族高血壓患者148例，其中男67例，女81例；年齡35～77歲，平均年齡（53.7±10.6）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：依據(jù)WHO/國際高血壓學(xué)會(huì)（ISH）高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］，診斷為原發(fā)性高血壓；1～2級(jí)高血壓患者即坐位收縮壓為140～179 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa）， 舒 張 壓 為95～109 mm Hg；未用或停用降壓藥物，并服用安慰劑2周。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重肝、腎功能障礙；嚴(yán)重心功能不全；繼發(fā)性高血壓；3個(gè)月內(nèi)發(fā)生過心肌梗死及腦卒中；妊娠期或哺乳期婦女。本研究患者均簽署知情同意書，本研究經(jīng)過本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 給藥方法 所有患者給予替米沙坦（德國勃林格殷格翰公司生產(chǎn)）80 mg/d，晨7：00～10：00頓服，共治療8周。

1.3 人體基本參數(shù)和生化指標(biāo)測(cè)定 人體基本參數(shù)和生化指標(biāo)測(cè)定方法與本課題組之前研究相同［5］。

1.4 血壓測(cè)定 每周測(cè)血壓1～2次，均在上午由同一測(cè)量者測(cè)量；測(cè)量血壓時(shí)患者靜坐10 min，采用標(biāo)準(zhǔn)臺(tái)式血壓計(jì)坐位連續(xù)測(cè)量3次, 每次間隔10 min, 取其均值。記錄治療前后患者的收縮壓及其降低幅度均值，舒張壓及其降低幅度均值。

1.5 DNA提取 取冷凍乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝全血 , 水浴解凍；采用 E.Z.N.ATM Blood DNA Kit（OMEGA）試劑盒提取DNA，于-20 ℃保存待用。

1.6 基因分型 用Oligo 6.0軟件設(shè)計(jì)引物（見表1）?？偡磻?yīng)體系為 10.0 μl，包括基因組 DNA 20 ng 2.0 μl，PCR 上、下游引物（5 pmol/μl）各 0.6 μl，2×Taq PCR Master Mix 5.0 μl，用滅菌蒸餾水補(bǔ)充至10.0 μl。PCR 反應(yīng)條件：首先 95 ℃變性 10 min，隨后進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，每一循環(huán)包括94 ℃變性30 s，在相應(yīng)的退火溫度（Tm）中退火 30 s，72 ℃延伸 40 s，最后，72 ℃延伸 10 min，4 ℃保存。分別取 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物10 μl、5 U BsiE I和 Eco0109 I內(nèi)切酶（美國 Promega公司）、10 ENB緩沖液2 μl，加雙蒸水補(bǔ)足體積至20 μl，37 ℃溫育 12 h，取 10 μl上述產(chǎn)物，用含溴化乙啶的2%瓊脂糖凝膠在電壓為100 V的1 ×TAE緩沖液中電泳45 min，于凝膠成像系統(tǒng)下觀察并保存酶切結(jié)果。

表1 PCR引物設(shè)計(jì)Table 1 Primer design for PCR

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SSPS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以（x ±s）表示，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，同組治療前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，遺傳平衡檢驗(yàn)采用Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 治療前后人體基本參數(shù)與生化指標(biāo)比較 結(jié)果與本課題組之前的研究結(jié)果相同［5］。

2.2 Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn) AGT啟動(dòng)子區(qū)2個(gè)SNPs位點(diǎn) AGT-6 A/G 和 AGT-20 A/C 的基因型分布均 符 合 Hardy-Weinberg平 衡（χ2=3.455、2.739，P=0.063、0.098）。

2.3 AGT-6 A/G、AGT-20 A/C 基因型、等位基因分布AGT-6 A/G的基因型分布情況：AA 83例（56.0%），AG 61例（41.0%），GG 4例（3.0%）；AGT-6 A/G 的等位基因分布情況：A 227個(gè)（77.0%），G 69個(gè)（23.0%）。AGT-20 A/C基因型分布情況：AA 118例（80.0%），AC 26 例（17.0%），CC 4 例（3.0%）；AGT-20 A/C等位基因分布情況：A 262個(gè)（89.0%），C 34個(gè)（11.0%）。AGT-6 A/G的GG基因型和AGT-20 A/C的CC基因型較低，因此將AGT-6 A/G的AG基因型和GG基因型合并，AGT-20 A/C的AC基因型和CC基因型合并。

2.4 不同AGT-6 A/G基因型患者治療前后血壓比較AGT-6 A/G的AA、AG+GG基因型患者治療后的收縮壓、舒張壓均低于自身治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不同AGT-6 A/G基因型患者治療前、后收縮壓及其降低幅度、舒張壓及其降低幅度比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，見表2）。

2.5 不同AGT-20 A/C基因型患者治療前后血壓比較AGT-20 A/C的AA、AC+CC基因型患者治療后的收縮壓、舒張壓均低于自身治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不同AGT-20 A/C基因型患者治療前、后收縮壓及其降低幅度、舒張壓及其降低幅度比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，見表3）。

表2 不同AGT-6 A/G基因型患者治療前后血壓比較（x±s, mm Hg）Table 2 Comparison of SBP and DBP measured before and after treatment and the decrease in SBP and DBP in patients by AGT-6 A/G genotype

表3 不同AGT-20 A/C基因型患者治療前后血壓比較(x±s, mm Hg）Table 3 Comparison of SBP and DBP measured before and after treatment and the decrease in SBP and DBP in patients by AGT-20 A/C genotype

3 討論

高血壓是一種多基因遺傳疾病，降壓藥物治療是臨床控制高血壓的最主要途徑，但高血壓患者對(duì)降壓藥物的療效存在個(gè)體差異，因此高血壓患者需要進(jìn)行個(gè)體化治療，如何為每例高血壓患者選擇最適合的降壓藥物，已經(jīng)成為一個(gè)新的挑戰(zhàn)。RAAS在高血壓發(fā)生、發(fā)展過程中起著非常重要的作用，該系統(tǒng)的基因多態(tài)性可能影響個(gè)體對(duì)降壓藥物的反應(yīng)。本研究選擇漢族輕中度高血壓患者，給予替米沙坦治療8周后，研究AGT啟動(dòng)子區(qū) 2個(gè) SNPs位點(diǎn)（AGT-6 A/G 和 AGT-20 A/C）基因型與替米沙坦降壓療效的關(guān)系，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)AGT-6 A/G、AGT-20 A/C基因型與替米沙坦降壓療效有關(guān)。

AGT基因位于染色體1q42-q43，由5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子組成。AGT基因核心啟動(dòng)子區(qū)上游存在一個(gè)AGT核心啟動(dòng)子結(jié)合因子1的結(jié)合位點(diǎn)和hAG核心啟動(dòng)子元件1，兩者相互結(jié)合，影響AGT基因的基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄速率［6］。AGT-6 A/G、AGT-20 A/C 位于 AGT 的轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)，影響AGT基因的轉(zhuǎn)錄活性［7］。已有研究表明，AGT-6 A/G和AGT-20 A/C多態(tài)性與第2號(hào)外顯子235M/T多態(tài)性之間可能存在協(xié)同作用，這可能與中國漢族人發(fā)生原發(fā)性高血壓病有關(guān)［8］。另一項(xiàng)Meta分析顯示，AGT-6 A/G、AGT-20 A/C多態(tài)性均與中國漢族人發(fā)生高血壓有關(guān)［9］。MARKOVIC等［10］研究證實(shí)，AGT-6 A/G 和AGT-20 A/C多態(tài)性與非洲裔美國人和高加索人群的原發(fā)性高血壓病有關(guān)。在AGT基因與降壓藥物療效的相關(guān)性研究中，JIANG等［11］對(duì)于單獨(dú)服用利尿劑的高血壓患者研究發(fā)現(xiàn)，與攜帶AGT AA基因型患者比較，攜帶AGT-6 G等位基因患者舒張壓下降幅度明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.025）。FILIGHEDDU等［12］研究了RAAS基因多態(tài)性與福辛普利降壓療效的關(guān)系，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)AGT-6 A/G多態(tài)性與福辛普利降壓療效存在相關(guān)性。因此對(duì)于不同種族、居住環(huán)境的人群，使用不同的降壓藥物進(jìn)行研究，其研究結(jié)果也不盡相同。

本研究尚存在一定局限：AGT啟動(dòng)子區(qū)有多個(gè)SNPs位點(diǎn)，本研究只選擇其中2個(gè)進(jìn)行探討，且樣本量較小，研究結(jié)果有待進(jìn)一步證實(shí)，而且是否存在多個(gè)位點(diǎn)聯(lián)合作用亦有待進(jìn)一步探討。因此關(guān)于AGT啟動(dòng)子區(qū)基因多態(tài)性與ARB降壓療效的關(guān)系有待進(jìn)一步探討。

綜上所述，在漢族高血壓患者中，AGT-6 A/G、AGT-20 A/C多態(tài)性可能與替米沙坦降壓療效無關(guān)。

作者貢獻(xiàn)：龔洪濤進(jìn)行文章的構(gòu)思與設(shè)計(jì)、數(shù)據(jù)收集與整理、結(jié)果的分析與解釋，撰寫論文并進(jìn)行論文的修訂；龔洪濤、杜鳳和、陳步星進(jìn)行研究的實(shí)施與可行性分析，負(fù)責(zé)文章的質(zhì)量控制及審校，對(duì)文章整體負(fù)責(zé)，監(jiān)督管理。

本文無利益沖突。