王樹森（天津市第一中心醫(yī)院移植中心細胞移植科，衛(wèi)生部危重病急救醫(yī)學重點實驗室，天津 300192）

胰腺在低溫低壓下原位灌注UW器官保存液后0～4℃保存，在最短的時間內轉移至GMP實驗室，胰腺經過消毒、修剪后插管灌入膠原酶，緩慢逐漸加壓灌注直至胰腺組織充分膨脹。將灌注好的胰腺組織切成8～12塊后轉移至450 ml或600 ml的Ricordi消化罐中，迅速升溫至37℃后機械震蕩同時每分鐘抽取組織，進行雙硫腙染色，顯微鏡下觀察胰島分離情況，當胰島與外分泌組織充分分離時，終止消化，迅速灌入4℃1640溶液，并將組織液收集至自配的緩沖溶液中。組織液離心洗滌2～3次后，依據IEQ計數（一個直徑150 μm的胰島為一個胰島當量）。將消化后的胰島置于UW液中靜止30分鐘以上，然后在COBE2991血細胞淘洗機上以連續(xù)密度梯度離心法純化胰島，根據每管中胰島細胞的純度將其分為高純度、中等純度和低純度。離心后，進行雙人計數，對胰島大小、碎片、密度及形態(tài)進行量化評分，估算培養(yǎng)瓶數量，并置于5% CO2培養(yǎng)箱22℃培養(yǎng)移植。