王桂清

摘 要：目的：本文主要對(duì)赤芍總苷制備工藝進(jìn)行優(yōu)化流程做出詳細(xì)的分析。方法：本文實(shí)驗(yàn)人員主要使用紫外分光光度法及其高效液相色譜法對(duì)赤芍總苷制備工藝進(jìn)行優(yōu)化工作做出深入研究，并得出相應(yīng)的結(jié)論。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)人員通過在TPG洗脫的時(shí)候，使用UV光譜法來對(duì)洗脫液里面存在的PAE進(jìn)行精準(zhǔn)的研究，進(jìn)而收集諸多的洗脫液，將PAE的純度加以提升，和TLC及其HPLC方法進(jìn)行對(duì)有著較多的優(yōu)勢(shì)，例如方法簡(jiǎn)便、有著較強(qiáng)的靈敏性。結(jié)論：本文實(shí)驗(yàn)人員主要使用了大孔吸附樹脂當(dāng)作分離手段，并設(shè)計(jì)相應(yīng)的正交實(shí)驗(yàn)，對(duì)溶劑提取、次數(shù)等諸多因素進(jìn)行研究，將PAE當(dāng)作控制指標(biāo)進(jìn)行論述，并采取紫外光譜及其高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，而且對(duì)TPG制備工藝加以完善，進(jìn)而獲得制備TPG最為完善的工藝。

關(guān)鍵詞：赤芍總苷；芍藥苷；紫外分光光度法；高效液相色譜法；正交設(shè)計(jì)；大孔吸附樹脂

通常情況下，赤芍屬于一種常見的中藥，主要來自于毛茛科植物芍藥亦或是相關(guān)川赤芍的干燥根里面。而以往醫(yī)學(xué)認(rèn)為赤芍這種中藥有著較多的作用，例如可以起到散淤止痛的作用，所以在臨床中得到了大力的推廣。赤芍總苷經(jīng)過實(shí)驗(yàn)人員提取以后大部分為水提亦或是醇提后進(jìn)行萃取的制備方式，依據(jù)相關(guān)報(bào)道將乙醇提取以后通過采取大孔吸附樹脂將白芍總苷分離出來，但是赤芍總苷的制備方式存在較大的差異性，得率之間存在一定的區(qū)別。基于此，本文實(shí)驗(yàn)人員主要使用了大孔吸附樹脂當(dāng)作分離手段，并設(shè)計(jì)相應(yīng)的正交實(shí)驗(yàn)，對(duì)溶劑提取、次數(shù)等諸多因素進(jìn)行研究，將PAE當(dāng)作控制指標(biāo)進(jìn)行論述，并采取紫外光譜及其高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，而且對(duì)TPG制備工藝加以完善，進(jìn)而獲得制備TPG最為完善的工藝。

1 儀器、藥品與試藥

1.1 儀器設(shè)備

SSI222HPLC儀，SSI525UV/Vis檢測(cè)器，ANASTARChromatographyDataSystem軟件，OV-100Suntek柱溫箱，S-GelC18，5μm色譜柱；UV-2401PC紫外分光光度計(jì)。

1.2 藥材、藥品與試劑

甲醇（色譜純）：批號(hào)971111，上?；瘜W(xué)試劑研究所；藥用95酒精；無水乙醇（分析純）：批號(hào)001201，蚌埠化學(xué)試劑廠；芍藥苷對(duì)照品（含量測(cè)定用）：批號(hào)0736-20015，中國藥品生物制品檢定所；純化水；赤芍飲片。

2 方法與結(jié)果

2.1 TPG制備

2.1.1 正交設(shè)計(jì)?？疾焯崛∪軇┮掖紳舛?、體積、提取時(shí)間、提取次數(shù)對(duì)TPG得率的影響，每因素設(shè)計(jì)3水平，因此采用四因素三水平表L9（34）。

2.1.2 選擇大孔吸附樹脂。取處理好的大孔吸附樹脂D101和DA201各100g，分別裝入層析柱（3cm×100cm）中備用。乙醇提取的干膏各4.0g，加熱水溶解后，滴加入大孔樹脂柱，平衡2h，加水洗脫，UV檢測(cè)是否有PAE洗出。水洗至近無色，再分別用20的乙醇洗脫，以UV定性檢測(cè)，收集含PAE洗脫液，以HPLC檢測(cè)PAE含量，減壓回收乙醇后，置真空干燥箱干燥（68°C，-0.08MPa）干燥24h，稱重。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，比較樹脂差異。實(shí)驗(yàn)表明，大孔吸附樹脂DA201與D101兩種型號(hào)分離TPG無明顯差異，用20乙醇作洗脫液洗脫P(yáng)AE，DA201型洗脫液用量，洗脫時(shí)間明顯低于D101型，因此選擇DA201型。

2.1.3 確定TPG洗脫液。取6份赤芍醇提干膏各4g，水溶，緩慢加入6支DA201MAR柱（已分別編號(hào)），平衡2h，水洗，UV定性檢測(cè)水洗液是否含有PAE至Molisch反應(yīng)呈陰性且洗脫液澄清，分別改用10，20，40，80，90等不同濃度乙醇洗脫，UV定性檢測(cè)PAE并確定收集洗脫液體積，以HPLC檢測(cè)PAE含量，減壓回收溶劑，置真空干燥箱（68°C，-0.08MPa）干燥24h，稱重，為TPG得率。表4結(jié)果表明，洗脫溶劑乙醇濃度在20以上，均有PAE洗脫出，乙醇濃度增高，雜質(zhì)含量增高，同時(shí)發(fā)現(xiàn)洗脫液顏色增深。故確定20乙醇為TPG洗脫液。

2.1.3 正交設(shè)計(jì)提取分離TPG。取赤芍飲片，粉碎成粗粉（過20目篩），加8倍量乙醇，浸漬1h，回流1h，抽濾分離出提取液，提取3次（實(shí)際操作按正交表），合并濾液，減壓回收溶劑得干膏，以適量水加熱溶解后，緩慢加到處理好的樹脂柱（干膏和樹脂比1∶15）上，平衡2h，先用水洗至還原糖反應(yīng)成陰性（Molisch反應(yīng)檢測(cè)）且洗脫液無色澄清，改用20乙醇洗至PAE量很少（UV檢測(cè)）。UV定性檢測(cè)PAE并確定收集含PAE洗脫液，以HPLC測(cè)定PAE含量，減壓濃縮得浸膏，置真空干燥箱（68°C，-0.08MPa），干燥24h即得。制得TPG性狀為淡黃、疏松粉末，味苦。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

其中，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ為各因素同水平x總和：Ⅰ=（Ⅰ2+Ⅱ2+Ⅲ2）/3-（∑x）2/9。

對(duì)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果作方差分析，由于A，B，C，D等四因素Ⅰ值相差較大，可將Ⅰ小者合并當(dāng)作誤差（Se）。

2.1.4 TPG優(yōu)化工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

取3份赤芍各100g，按正交優(yōu)化條件70乙醇，8倍量，1h，3次進(jìn)行提取，采用DA201大孔吸附樹脂進(jìn)行分離，20乙醇為洗脫溶劑。結(jié)果見表2，可見優(yōu)化結(jié)果較為理想。

表2 TPG優(yōu)化工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

3 討論

3.1 大孔吸附樹脂的選用

通常情況下，大孔吸附樹脂屬于交聯(lián)聚合物的一種，有著較強(qiáng)的理化行政，無論對(duì)無機(jī)鹽類還是低分子化合物都不會(huì)產(chǎn)生一定的影響，作為一類吸附及其篩選性能有機(jī)結(jié)合起來組成的一種分離材料，在相關(guān)領(lǐng)域中已經(jīng)得到了普遍的認(rèn)可。由于TPG作為單萜苷類化合物，實(shí)驗(yàn)人員需要對(duì)洗脫劑為乙醇做好充分的考慮，這個(gè)時(shí)候?qū)嶒?yàn)人員應(yīng)當(dāng)選擇較弱亦或是非極性樹脂比較適宜，利用相關(guān)實(shí)驗(yàn)對(duì)存在的DA201型大孔吸附樹脂要比非極性的D101型大孔吸附樹脂使用到TPG中較為適合，所得到的PAE含量當(dāng)作82.2。

3.2 洗脫溶劑的確定

通過相關(guān)實(shí)驗(yàn)對(duì)水及其系列濃度乙醇存在的洗脫效果進(jìn)行了詳細(xì)的對(duì)比，依據(jù)產(chǎn)生的結(jié)果可以得知濃度高于20乙醇無法把TPG從相關(guān)樹脂柱通過洗脫的方式進(jìn)行分離，而水不會(huì)通過TPG的方式從樹脂柱上面洗脫出來；倘若乙醇濃度較高的情況下，那么就會(huì)很容易通過TPG方法從樹脂柱做好洗脫作業(yè)，然而雜質(zhì)含量也在明顯的提升。為了進(jìn)一步提升TPG中PAE純度實(shí)驗(yàn)選擇了具有代表性的20乙醇當(dāng)作相應(yīng)的洗脫溶劑。依據(jù)相關(guān)報(bào)道可以得知：所含有的乙醇濃度在大于30的時(shí)候，那么無法采取TPG方法從樹脂柱進(jìn)行洗脫，和該實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生的結(jié)果存在一定的差異，這種情況的出現(xiàn)可能因?yàn)闃渲吞?hào)有著不同的型號(hào)。

3.3 紫外定性檢測(cè)洗脫液

實(shí)驗(yàn)人員通過在TPG洗脫的時(shí)候，使用UV光譜法來對(duì)洗脫液里面存在的PAE進(jìn)行精準(zhǔn)的研究，進(jìn)而收集諸多的洗脫液，將PAE的純度加以提升，和TLC及其HPLC方法進(jìn)行對(duì)有著較多的優(yōu)勢(shì)，例如方法簡(jiǎn)便、有著較強(qiáng)的靈敏性。

3.4 正交設(shè)計(jì)的采用

所謂正交設(shè)計(jì)，簡(jiǎn)單的說是具有諸多因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的科學(xué)手段。和單因素比較法進(jìn)行詳細(xì)的比較，為可以對(duì)實(shí)驗(yàn)里面的規(guī)律提供方便，對(duì)具有的綜合影響進(jìn)行明確，避免花費(fèi)較多的實(shí)驗(yàn)次數(shù)，進(jìn)而起到節(jié)約資金的作用。依據(jù)該實(shí)驗(yàn)通過采取TPG的方式進(jìn)行提取，并且選擇了四因素三水平正交表，也就是即L9（34）表，能夠在某種程度上達(dá)到制備工藝的效果，采取TPG的方法得率是5.6。

參考文獻(xiàn)

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