亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        何首烏中THSG和蒽醌類成分對(duì)人孕烷X受體介導(dǎo)的CYP3A4的調(diào)控作用

        2018-01-29 08:29:08張照研楊亮黃小燕汪美汐馬增春湯響林王宇光高月
        中國中藥雜志 2017年24期
        關(guān)鍵詞:共轉(zhuǎn)染何首烏黃素

        張照研+楊亮+黃小燕+汪美汐+馬增春+湯響林+王宇光+高月

        [摘要] 該文探討何首烏主要化學(xué)成分2,3,5,4′-四羥基芪-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2,3,5,4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucopyranoside,THSG)、蒽醌類(大黃素、大黃酸、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚)對(duì)人孕烷X受體(human pregnant X receptor,PXR)介導(dǎo)的CYP3A4的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。利用前期建立的PXR介導(dǎo)的CYP3A4藥物誘導(dǎo)快速篩選技術(shù),采用MTS細(xì)胞檢測(cè)方法考察何首烏中主要化學(xué)成分對(duì)細(xì)胞活性的影響,計(jì)算IC50;利用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng),將PXR表達(dá)載體和含CYP3A4轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)的報(bào)告基因載體共轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,10 μmol·L-1利福平(RIF)為陽性對(duì)照,10 μmol·L–1酮康唑(TKZ)為陰性對(duì)照,用THSG(2.5,5,10 μmol·L-1)和蒽醌類成分(2.5,5,10 μmol·L-1)分別處理24 h,進(jìn)行雙熒光素酶活性檢測(cè)。結(jié)果表明,空載質(zhì)粒pcDNA3.1與pGL4.17-CYP3A4共轉(zhuǎn)染時(shí),THSG、大黃酚、大黃素甲醚、大黃酸、蘆薈大黃素對(duì)CYP3A4的調(diào)控多為抑制效應(yīng),大黃素對(duì)CYP3A4產(chǎn)生誘導(dǎo)作用;pcDNA3.14-PXR與pGL4.17-CYP3A4共轉(zhuǎn)染時(shí),THSG、大黃酚、大黃素甲醚、大黃酸、蘆薈大黃素均產(chǎn)生誘導(dǎo)效應(yīng)。綜上,THSG和蒽醌類成分均可對(duì)CYP3A4產(chǎn)生抑制或激活效應(yīng),PXR參與后,上述成分對(duì)CYP3A4均產(chǎn)生誘導(dǎo)效應(yīng),提示何首烏中主要成分對(duì)CYP3A4的誘導(dǎo)作用是通過PXR實(shí)現(xiàn)的。以上結(jié)果提示在與何首烏聯(lián)合用藥時(shí)應(yīng)注意潛在的藥物相互作用,提高中藥的安全性和有效性。

        [關(guān)鍵詞] 何首烏; THSG; 蒽醌類成分; 人孕烷X受體; 細(xì)胞色素P450 3A4

        [Abstract] The rapid screening technology was used to investigate the transcriptional regulation effect of main chemical constituents in tubers of Polygonum multiflorum, including 2,3,5,4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucopyranoside(THSG) and anthraquinones (such as rhein, chrysophanol, aloe-emodin, emodin) on CYP3A4 drug inducers induced by human pregnancy X receptor (PXR).The effect of chemical composition on the cell activity was detected by MTS cell viability assay. IC50 was calculated. The expression vector and the reporter vector were co-transfected into HepG2 cells, with 10 μmol·L-1 rifampicin (RIF) as a positive control, and 10 μmol·L-1 ketoconazole (TKZ) as a negative control. After treated with different concentrations of anthraquinones (2.5, 5, 10 μmol·L-1) for 24 h, the cells were tested for dual luciferase activity. The results show that the inhibitory effect of THSG, chrysophanol, emodin, rhein and aloe-emodin on CYP3A4 was inhibited by co-transfection of pcDNA3.1 and pGL4.17-CYP3A4. The expressions of pcDNA3.14-PXR and pGL4.17-CYP3A4 were induced by the four compounds. Besides, emodin had a direct inducing effect. In conclusion, the four anthraquinone compounds have an inducing effect on CYP3A4 by PXR, but emodin can directly induce CYP3A4. THSG can inhibit CYP3A4, but plasmid can induce CYP3A4 after intervened with PXR.These results suggest that we should pay attention to the liver function and avoid liver damage in the combined administration of drugs.

        [Key words] Polygonum multiflorum; THSG; anthraquinones; human progesterone X receptor (PXR); CYP3A4

        中藥何首烏是蓼科蓼族何首烏Polygonum multiflorum Thunb.的塊根。生何首烏可安神、養(yǎng)血、活絡(luò)、解毒(截瘧)、消癰;制何首烏具有補(bǔ)益精血、烏須發(fā)、強(qiáng)筋骨、補(bǔ)肝腎之功效。何首烏的主要化學(xué)成分有二苯乙烯苷類、蒽醌類、鞣質(zhì)類、聚合花青素類、卵磷脂類等[1]。藥理學(xué)研究顯示,何首烏在治療肝病方面應(yīng)用廣泛,在治療非酒精性脂肪肝、肝硬化、肝纖維化、乙肝、肝癌等方面具有較好效果。endprint

        隨著中草藥廣泛應(yīng)用和不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)體系不斷完善,中草藥相關(guān)性肝損傷(herb-induce liver injury,HILI)報(bào)道呈升高趨勢(shì)[2]。中草藥相關(guān)性肝損傷在藥物導(dǎo)致肝損傷(drug-induce liver injury,DILI)中占一定比例,原因具有復(fù)雜性。研究表明,何首烏可用于肝臟疾病的治療,對(duì)特定人群卻能導(dǎo)致肝臟的損傷[3]。近些年來,何首烏及其制劑和保健品導(dǎo)致肝損傷的報(bào)道呈上升趨勢(shì)[4-5]。2013年10月,CFDA發(fā)布5種含何首烏藥物對(duì)特定人群禁用的通告。2014年7月,藥品不良反應(yīng)信息(第61期)通報(bào)口服何首烏及其成方制劑可能有引起肝損傷的風(fēng)險(xiǎn)。2014年7月和9月,CFDA發(fā)布何首烏保健食品監(jiān)管和含何首烏保健食品成分變更的通知。臨床上報(bào)道中草藥肝損害的案例中,何首烏的病例為第1位,為藥物性肝損傷的第15位[6]。因此研究何首烏致肝損傷作用機(jī)制對(duì)于指導(dǎo)何首烏臨床合理使用尤為重要。本文主要觀察何首烏中主要化學(xué)成分二苯乙烯苷類的2,3,5,4′-四羥基芪-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2,3,5,4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucopyranoside,THSG)和蒽醌類成分對(duì)藥物代謝酶CYP3A4的影響,探究CYP3A4的主要調(diào)控因子孕烷X受體是否參與何首烏主要化學(xué)成分對(duì)CYP3A4的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用,以期為何首烏致肝毒性作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),為臨床指導(dǎo)使用何首烏及其聯(lián)合用藥提供數(shù)據(jù)參考。

        1 材料與方法

        1.1 儀器 3110細(xì)胞培養(yǎng)箱(Thermo公司);Microfuge 22R臺(tái)式高速離心機(jī)(Beckman公司);Axiovert 40倒置顯微鏡(ZEISS公司);VICTOR X多標(biāo)記酶標(biāo)儀 (Perkin Elmer公司)。

        1.2 藥物與試劑 THSG(CAS:82373-94-2,Lot:F210036),大黃酸(CAS: 478-43-3,Lot:F522425),大黃酚(CAS: 481-74-3,Lot:F249787),大黃素甲醚(CAS:521-61-29,Lot:F465584),蘆薈大黃素(CAS: 481-72-1,Lot:F060344),均購買于上海一飛生物科技有限公司,純度均大于98%,見圖1;利福平(CAS:13292-46-1,Cat No.:S1764,Lot.01),酮康唑(CAS:65277-42-1,Batch No.:14239)購于Selleck公司,以上成分均用DMSO溶解制備10 mmol·L-1母液,-20 ℃保存?zhèn)溆?。DMEM培養(yǎng)基(美國Gibco公司,Lot:1621440),Gibco胎牛血清(FBS;Thermo Fisher Scientific公司,Lot:505985),胰蛋白酶(Sigma公司,批號(hào)E23AT050),青霉素鏈霉素雙抗溶液(HyClone公司,Lot:J170012),MTS(Promega公司,Lot:0000171446)。lipofectamine 2000(ThermoFisher公司,Lot:1815568)。

        1.3 細(xì)胞和質(zhì)粒 HepG2細(xì)胞均購于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所,由本實(shí)驗(yàn)室凍存保種。完全培養(yǎng)基由10%FBS,100 mg·L-1青霉素和鏈霉素的DMEM高糖培養(yǎng)基構(gòu)成。細(xì)胞在37 ℃,5%CO2、飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),0.25%胰酶消化傳代。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。質(zhì)粒pGL-4.17-CYP3A4,pcDNA3.14-PXR由實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建并保存,空載質(zhì)粒pcDNA3.14-vector、內(nèi)參質(zhì)粒pLR-TK購于美 國Promega公司。

        1.4 MTS法檢測(cè)細(xì)胞存活率 對(duì)數(shù)期的HepG2細(xì)胞經(jīng)胰酶消化,接種于96孔板,待細(xì)胞密度達(dá)到80%時(shí),吸棄培養(yǎng)液,用磷酸緩沖液(PBS)洗滌1次,換成分別含有不同濃度藥物成分的含2%血清但不含雙抗的DMEM培養(yǎng)基,培養(yǎng)24 h;吸棄含藥培養(yǎng)基,每孔加入20 μL MTT,孵育1 h,在595 nm處用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度。每組設(shè)3副孔,細(xì)胞的活性按以下公式計(jì)算:細(xì)胞活性=[(用藥組-空白組)/(對(duì)照組-空白組)]×100%,用GraphPad Prism計(jì)算半數(shù)抑制濃度(IC50)。

        1.5 藥物處理和熒光素酶活性檢測(cè) 按照轉(zhuǎn)染試劑 lipofectamine 2000說明書操作,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 HepG2細(xì)胞,胰酶消化,細(xì)胞計(jì)數(shù),按照每孔2.5×105細(xì)胞接種于24孔板中,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到約80%時(shí),用Opti-MEM培養(yǎng)液稀釋質(zhì)粒。500 ng pcDNA3.1-hPXR,250 ng pGL4.17-CYP3A4以及50 ng pRL-TK內(nèi)參質(zhì)粒,2 μL lipofectamine 2000混勻,室溫孵育20 min,每孔加入100 μL混合轉(zhuǎn)染液,放細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染6 h,吸去混合液,加入含有不同濃度藥物的含2%血清不含雙抗的DMEM培養(yǎng)基,設(shè)置10 μmol·L-1利福平(RIF)給藥孔作為陽性對(duì)照組,10 μmol·L-1酮康唑(TKZ)給藥孔作為陰性對(duì)照組,每組分別設(shè)3個(gè)副孔。放入37 ℃,5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,吸去各組培養(yǎng)液,用PBS洗滌細(xì)胞1次,每孔中加入100 μL 1×PLB溶液,室溫下靜止裂解15 min后,加入100 μL LABⅡ溶液,用多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔的螢火蟲熒光素酶(firefly luciferase)活性;緊接著各孔加入100 μL Stop&Glo試劑,啟動(dòng)海腎螢光素酶反應(yīng)后,對(duì)海腎熒光素(renilla luciferase)熒光活性進(jìn)行檢測(cè),并計(jì)算熒光值比值。

        1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,多組數(shù)據(jù)間比較采用方差分析,兩兩比較采用t檢驗(yàn)處理,P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。endprint

        2 結(jié)果

        2.1 THSG和蒽醌類成分對(duì)細(xì)胞存活率的影響 THSG在較高濃度下對(duì)細(xì)胞增殖有抑制作用,見圖2A,經(jīng)計(jì)算THSG的IC50為366.9 μmol·L-1。

        2.2 大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素甲醚、蘆薈大黃素對(duì)細(xì)胞存活率的影響 蒽醌類成分對(duì)細(xì)胞存活率的影響見圖2B~圖2F。各成分給藥濃度分別為2.5,5,10 μmol·L-1時(shí),經(jīng)GraphPad Prism計(jì)算,大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素甲醚、蘆薈大黃素的IC50分別為9.46,19.29,13.95,26.06,13.65 μmol·L-1。

        2.3 THSG對(duì)PXR介導(dǎo)的CYP3A4的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用 結(jié)果見圖3A。與對(duì)照組比較,RIF組CYP3A4熒光素酶活性顯著增強(qiáng)(P<0.001),表明hPXR-CYP3A4熒光素酶報(bào)告基因體系響應(yīng)正常??蛰d體pcDNA3.1與pGL4.17-CYP3A4共轉(zhuǎn)染時(shí),THSG給藥組對(duì)CYP3A4的表達(dá)分別是對(duì)照組的(0.63±0.08)倍(P<0.01),(0.52±0.09)倍(P<0.01),(0.69±0.14)倍(P<0.001),均具有顯著性抑制作用;當(dāng)pcDNA3.14-PXR與pGL4.17-CYP3A4共轉(zhuǎn)染時(shí),THSG明顯增加CYP3A4活性的表達(dá),和空載質(zhì)粒pcDNA3.1與CYP3A4質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染相比較,均有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01),表明PXR參與THSG對(duì)CYP3A4的表達(dá)調(diào)控。

        2.4 蒽醌類成分對(duì)PXR介導(dǎo)的CYP3A4的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用 大黃素:結(jié)果見圖3B??蛰d體pcDNA3.1與pGL4.17-CYP3A4共轉(zhuǎn)染時(shí),大黃素給藥組對(duì)CYP3A4的誘導(dǎo)表達(dá)分別是對(duì)照組的(1.42±0.23)倍(P<0.05),(1.75±0.10)倍(P<0.001),(2.51±0.11)倍(P<0.001),具有顯著性誘導(dǎo)作用;當(dāng)pcDNA3.14-PXR與pGL4.17-CYP3A4共轉(zhuǎn)染時(shí),大黃素對(duì)CYP3A4的表達(dá)活性顯著增強(qiáng),和空載質(zhì)粒pcDNA3.1與CYP3A4質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染相比較,僅有10 μmol·L-1的大黃素給藥組對(duì)CYP3A4的誘導(dǎo)倍數(shù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。研究結(jié)果提示大黃素對(duì)CYP3A4具有直接誘導(dǎo)作用,體外轉(zhuǎn)染的PXR一定程度上增強(qiáng)大黃素對(duì)CYP3A4的誘導(dǎo)作用。

        大黃酚:結(jié)果見圖3C??蛰d體pcDNA3.1與pGL4.17-CYP3A4共轉(zhuǎn)染時(shí),大黃酚給藥組CYP3A4的活性分別是對(duì)照組的(0.92±0.01)倍(P<0.05),(0.78±0.04)倍(P<0.01),(0.70±0.03)倍(P<0.001),具有顯著性抑制作用;當(dāng)pcDNA3.14-PXR與pGL4.17-CYP3A4 共轉(zhuǎn)染時(shí),給藥組CYP3A4的活性分別是對(duì)照組的(1.03±0.02)倍,(1.10±0.04)倍(P<0.05),(1.10±0.03)倍,結(jié)果顯示,2.5,10 μmol·L-1給藥組有微弱誘導(dǎo)作用,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。大黃酚對(duì)CYP3A4有微弱誘導(dǎo)作用。

        大黃酸:結(jié)果見圖3D??蛰d體pcDNA3.1與pGL4.17-CYP3A4共轉(zhuǎn)染時(shí),大黃酸給藥組CYP3A4的活性分別是對(duì)照組的(0.71±0.02)倍(P<0.001),(0.62±0.04)倍(P<0.001),(0.76±0.01)倍(P<0.01),具有顯著性抑制作用;當(dāng)pcDNA3.14-PXR與pGL4.17-CYP3A4 共轉(zhuǎn)染時(shí),給藥組CYP3A4的活性分別是對(duì)照組的(1.56±0.07)倍(P<0.001),(1.47±0.12)倍(P<0.001),(1.29±0.06)倍(P<0.001)。pcDNA3.14-PXR質(zhì)粒與CYP3A4質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染時(shí)CYP3A4的熒光倍數(shù)分別為空載質(zhì)粒pcDNA3.1與CYP3A4質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染時(shí)的(2.22±0.18)倍(P<0.01),(2.22±0.17)倍(P<0.01),(1.70±0.08)倍(P<0.01)。以上結(jié)果表明,大黃酸能通過調(diào)控因子PXR誘導(dǎo)CYP3A4的表達(dá)。

        大黃素甲醚:結(jié)果見圖3E??蛰d體pcDNA3.1與pGL4.17-CYP3A4共轉(zhuǎn)染時(shí),大黃素甲醚給藥組CYP3A4的活性分別是對(duì)照組的(0.63±0.08)倍(P<0.01),(0.52±0.09)倍(P<0.01),(0.68±0.01)倍(P<0.001),具有顯著性抑制作用;當(dāng)pcDNA3.14-PXR與pGL4.17-CYP3A4共轉(zhuǎn)染時(shí),給藥組CYP3A4的活性分別是對(duì)照組的(1.21±0.04)倍(P<0.001),(1.21±0.06)倍(P<0.001),(1.05±0.04)倍(P<0.01)。pcDNA3.14-PXR質(zhì)粒與CYP3A4質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染時(shí)CYP3A4的熒光倍數(shù)分別為空載質(zhì)粒pcDNA3.1與CYP3A4質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染時(shí)的(1.71±0.21)倍(P<0.01),(2.09±0.21)倍(P<0.01),(1.54±0.03)倍(P<0.01)。以上結(jié)果表明,大黃素甲醚能通過PXR誘導(dǎo)CYP3A4的表達(dá)。

        蘆薈大黃素:結(jié)果見圖3F??蛰d體pcDNA3.1與pGL4.17-CYP3A4共轉(zhuǎn)染時(shí),蘆薈大黃素給藥組CYP3A4的活性分別是對(duì)照組的(0.60±0.04)倍(P<0.001),(0.68±0.04)倍(P<0.001),(1.27±0.08)倍(P<0.01),3個(gè)給藥組中,2.5,5 μmol·L-1具有顯著性抑制作用,10 μmol·L-1給藥組有顯著誘導(dǎo)作用;當(dāng)pcDNA3.14-PXR與pGL4.17-CYP3A4共轉(zhuǎn)染時(shí),給藥組CYP3A4基因的表達(dá)分別是對(duì)照組的(1.40±0.05)倍(P<0.001),(1.19±0.11)倍,(1.56±0.14)倍(P<0.01)。pcDNA3.14-PXR質(zhì)粒與CYP3A4質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染時(shí)CYP3A4的誘導(dǎo)活性分別為空載質(zhì)粒pcDNA3.1與CYP3A4質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染時(shí)的(2.35±0.22)倍(P<0.01),(1.65±0.24)倍(P<0.05),(1.72±0.03)倍。以上結(jié)果表明,蘆薈大黃素2.5,5 μmol·L-1給藥濃度下能通過PXR誘導(dǎo)CYP3A4的表達(dá),10 μmol·L-1給藥組能直接產(chǎn)生直接誘導(dǎo)效應(yīng)。endprint

        3 討論

        中藥致肝損傷與其在肝臟代謝過程密切相關(guān)[7]。中藥作為外源性物質(zhì),其主要化學(xué)成分在肝臟以細(xì)胞色素P450為核心的單加氧酶系的作用下,進(jìn)行氧化、還原等一系列反應(yīng),最終轉(zhuǎn)化為極性化合物排出體外。長(zhǎng)期服用中藥可能對(duì)肝臟的藥物代謝酶產(chǎn)生影響,進(jìn)而影響其他藥物的代謝,藥物相互作用能使毒性增強(qiáng)和不良反應(yīng)產(chǎn)生。CYP3A4是細(xì)胞色素 P450超家族的主要成員,負(fù)責(zé)代謝50%以上的臨床藥物,對(duì)藥物的吸收、代謝、排泄有重要的作用[8-9]。PXR作為調(diào)控因子,在CYP3A4的表達(dá)中起到主要調(diào)控作用[10-13]。許多藥物能活化PXR,間接影響CYP3A4的表達(dá)[14-16]?;谇捌诮⒌乃幬锎x酶體外篩選平臺(tái),通過對(duì)中藥成分的篩選分析,實(shí)驗(yàn)室得到一批具有潛在CYP450誘導(dǎo)和抑制能力的化合物,并對(duì)產(chǎn)生誘導(dǎo)或抑制作用機(jī)制進(jìn)行探討,這些研究對(duì)于闡明中藥復(fù)方組分配伍減毒增效的特點(diǎn)和規(guī)律具有十分重要的價(jià)值[14,17]。研究藥物對(duì)PXR介導(dǎo)的CYP3A4的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用有重要的意義。

        何首烏對(duì)肝臟的作用具有“有故無殞”現(xiàn)象,表現(xiàn)為高劑量何首烏可導(dǎo)致正常動(dòng)物肝損傷,對(duì)于慢性肝損傷模型動(dòng)物卻具有肝保護(hù)和治療作用[18]。目前的研究主要關(guān)注何首烏炮制前后導(dǎo)致毒性[19-20]、血清代謝組學(xué)[21]和尿液代謝組學(xué)[22-24]的差異;特異質(zhì)動(dòng)物模型評(píng)價(jià)生、制何首烏的肝損傷[25-26];單體成分對(duì)Ⅰ相和對(duì)Ⅱ相代謝酶影響的研究[27-28]等方面。以何首烏肝損傷為例,王伽伯等[29]構(gòu)建基于整合證據(jù)鏈的中藥肝毒性客觀辨識(shí)的策略和方法,并從易感人群篩查、炮制減毒、配伍減毒及辨證用藥減毒等關(guān)乎臨床合理用藥的問題進(jìn)行系統(tǒng)分析,為科學(xué)評(píng)價(jià)中藥肝損傷風(fēng)險(xiǎn)、構(gòu)建合理用藥保障技術(shù)體系提供研究思路和方法學(xué)參考。本實(shí)驗(yàn)室在何首烏肝損傷方面做了一些原創(chuàng)性研究,李丹丹[30-31]通過建立3D肝毒性評(píng)價(jià)模型并對(duì)何首烏肝毒性機(jī)制進(jìn)行探索,發(fā)現(xiàn)生何首烏與制何首烏均能引起模型氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng),通過降低線粒體膜電位對(duì)線粒體功能造成損傷。生首烏的毒性早期主要由氧化應(yīng)激引起,后期包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激;制首烏的毒性早期主要由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激引起,后期伴有一定的氧化應(yīng)激的現(xiàn)象。近期研究報(bào)道,李婷婷等[32]采用液滴重疊法成功構(gòu)建類器官3D培養(yǎng)模型,并評(píng)價(jià)何首烏中有效成分順式THSG的肝損傷作用,發(fā)現(xiàn)何首烏易感物質(zhì)順式THSG對(duì)3D器官模型的肝毒性大于反式THSG,提示長(zhǎng)期用藥可能增大何首烏肝損傷風(fēng)險(xiǎn)。

        何首烏中THSG和蒽醌類成分會(huì)導(dǎo)致肝損傷[33-35]?;趯?shí)驗(yàn)室先前構(gòu)建的CYP3A4質(zhì)粒和PXR質(zhì)粒,本研究利用雙熒光素酶報(bào)告基因法,采用目的基因與調(diào)控基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)空載質(zhì)粒pcDNA3.1與pGL4.17-CYP3A4共轉(zhuǎn)染時(shí),THSG、大黃酚、大黃素甲醚、大黃酸均對(duì)CYP3A4有抑制作用,調(diào)控基因質(zhì)粒pcDNA3.14-PXR與pGL4.17-CYP3A4共轉(zhuǎn)染時(shí)THSG、大黃素甲醚、大黃酸產(chǎn)生誘導(dǎo)效應(yīng);大黃素對(duì)CYP3A4有直接誘導(dǎo)作用。上述結(jié)果表明何首烏中的成分(二苯乙烯苷類和蒽醌類)能夠通過PXR對(duì)CYP3A4產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用,聯(lián)合用藥時(shí)應(yīng)注意潛在肝損傷風(fēng)險(xiǎn),在臨床使用時(shí)應(yīng)密切監(jiān)測(cè)肝功能的變化,避免產(chǎn)生肝損傷。

        [參考文獻(xiàn)]

        [1] Lin L, Ni B, Lin H, et al. Traditional usages, botany, phytochemistry, pharmacology and toxicology of Polygonum multiflorum Thunb.: a review[J]. J Ethnopharmacol, 2015, 159: 158.

        [2] 肖小河,李秀惠,朱云,等. 中草藥相關(guān)肝損傷臨床診療指南[J]. 中國中藥雜志, 2016,41(7):1165.

        [3] Li H, Wang X, Liu Y, et al. Hepatoprotection and hepatotoxicity of Heshouwu, a Chinese medicinal herb: context of the paradoxical effect[J]. Food Chem Toxicol, 2017, 108(Pt B):407.

        [4] 練祥,柯婷婷,胡愛榮. 何首烏及其制劑致藥物性肝損傷52例臨床分析[J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2013,31(5):1133.

        [5] 童瑞敏. 何首烏及其制劑致藥物性肝損傷20例分析[J]. 山東中醫(yī)雜志,2015,34(12):928.

        [6] CFDA:口服何首烏及其方劑可致肝損傷[J]. 中華醫(yī)學(xué)信息導(dǎo)報(bào),2014(14):6.

        [7] Mukherjee P K, Ponnusankar S, Pandit S, et al. Botanicals as medicinal food and their effects on drug metabolizing enzymes[J]. Food Chem Toxicol, 2011, 49(12):3142.

        [8] 馬增春,王宇光,譚洪玲,等. 中藥與肝臟藥物代謝酶之間的相互作用[J]. 世界華人消化雜志,2016(7):994.

        [9] 侯健,孫娥,宋捷,等. 肝臟藥物代謝酶CYP450與中藥肝毒性的關(guān)系[J]. 中國中藥雜志,2016, 41(15):2774.

        [10] 李晗,王宇光,高月.孕烷X受體對(duì)細(xì)胞色素P450 CYP3A基因表達(dá)的調(diào)控在中藥配伍禁忌及中藥毒性早期預(yù)測(cè)中的應(yīng)用[J]. 中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志, 2015, 29(6):967.

        [11] 王宇光,張嫻勰,李晗,等. 以PXR受體為靶點(diǎn)的中藥活性成分篩選及相關(guān)藥理學(xué)研究[J]. 中國中藥雜志, 2015, 40(17):3444.endprint

        [12] 王宇光,王升啟,高月. PXR受體調(diào)控的CYP3A誘導(dǎo)及其在藥物代謝中的重要意義[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào), 2006, 41(1):1.

        [13] 高月. 基于藥物代謝酶的中藥毒性與毒理研究[J]. 毒理學(xué)雜志, 2005, 19(3):175.

        [14] 黃小燕,王宇光,李晗,等. 基于人孕烷X受體調(diào)控CYP3A4轉(zhuǎn)錄表達(dá)的麥冬皂苷D和麥冬皂苷D′的比較研究[J]. 中華中醫(yī)藥雜志, 2017,32(5):2302.

        [15] 黃凌,鄺少軼,張麗. 吳茱萸堿與吳茱萸次堿經(jīng)PXR、CAR核受體通路影響CYP3A4表達(dá)的研究[J]. 中國藥房, 2013,24(35):3274.

        [16] 謝海棠,王果,范嵐,等. 豆腐果苷對(duì)人孕烷X受體介導(dǎo)的CYP3A4和MDR1的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用[J]. 中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué), 2008,13(12):1416.

        [17] 李晗,王宇光,馬增春,等. 烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿對(duì)CYP3A4抑制作用研究[J]. 中國新藥雜志, 2017, 26(9):999.

        [18] 龐晶瑤,柏兆方,牛明,等. 基于“有故無殞”的何首烏對(duì)正常和肝損傷大鼠的毒性與保護(hù)作用對(duì)比研究[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào), 2015(8):973.

        [19] Wu X, Chen X, Huang Q, et al. Toxicity of raw and processed roots of Polygonum multiflorum[J]. Fitoterapia, 2012, 83(3):469.

        [20] Lv G P, Meng L Z, Han D Q, et al. Effect of sample preparation on components and liver toxicity of Polygonum multiflorum[J]. J Pharm Biomed Anal, 2015, 109:105.

        [21] 馬致潔,李奇,趙奎君,等. 何首烏致肝損傷大鼠的動(dòng)態(tài)血清代謝組學(xué)研究[J]. 中國中藥雜志,2017,42(1):152.

        [22] Zhao D S, Jiang L L, Fan Y X, et al. Identification of urine tauro-beta-muricholic acid as a promising biomarker in Polygoni Multiflori Radix-induced hepatotoxicity by targeted metabolomics of bile acids[J]. Food Chem Toxicol, 2017, 108(Pt B): 532.

        [23] Zhang C, Niu M, Li Q, et al. Urine metabolomics study on the liver injury in rats induced by raw and processed Polygonum multiflorum integrated with pattern recognition and pathways analysis[J]. J Ethnopharmacol, 2016, 194: 299.

        [24] Li C Y, Tu C, Gao D, et al. Metabolomic study on idiosyncratic liver injury induced by different extracts of Polygonum multiflorum in rats integrated with pattern recognition and enriched pathways analysis[J]. Front Pharmacol, 2016, 7:483.

        [25] 李春雨,李曉菲,涂燦,等. 基于內(nèi)毒素模型的何首烏特異質(zhì)肝損傷評(píng)價(jià)[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào),2015(1):28.

        [26] 李曉菲,李娜,涂燦,等. 基于內(nèi)毒素特異質(zhì)模型的生首烏與制首烏肝毒性比較研究[J]. 中草藥,2015, 46(10):1481.

        [27] 汪祺,戴忠,張玉杰,等. 基于二相代謝酶介導(dǎo)的膽紅素代謝考察何首烏體內(nèi)外肝毒性[J]. 中國藥學(xué)雜志,2016, 51(22):1929.

        [28] 汪祺,張玉杰,戴忠,等. 基于二相代謝酶考察何首烏中主要單體肝毒性[J]. 藥物分析雜志,2016(12):2120.

        [29] 王伽伯,李春雨,朱云,等. 基于整合證據(jù)鏈的中草藥肝毒性客觀辨識(shí)與合理用藥:以何首烏為例[J]. 科學(xué)通報(bào), 2016 (9):971.

        [30] 李丹丹,湯響林,譚洪玲,等. 3D HepG2細(xì)胞藥物肝毒性評(píng)價(jià)模型的建立及其在藥物安全性評(píng)價(jià)中的應(yīng)用[J]. 中國中藥雜志, 2016, 41(7):1313.

        [31] 李丹丹. 3D肝毒性評(píng)價(jià)模型的建立及何首烏肝毒性機(jī)制的初步探索[D]. 南寧:廣西醫(yī)科大學(xué),2016.

        [32] 李婷婷,李瑞紅,劉振興,等. 基于類器官3D培養(yǎng)的何首烏易感物質(zhì)肝毒性評(píng)價(jià)[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào),2017 (7):1048.

        [33] 馬喆,趙珺睿,董冉冉,等. 基于高內(nèi)涵分析技術(shù)的何首烏提取物及其主要成分肝毒性研究[J]. 中草藥, 2016, 47 (22):4021.

        [34] 樓招歡,呂圭源,俞靜靜. 何首烏成分、藥理及毒副作用相關(guān)的研究進(jìn)展[J]. 浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2014 (4):495.

        [35] Ma J, Zheng L, He Y, et al. Hepatotoxic assessment of Polygoni Multiflori Radix extract and toxicokinetic study of stilbene glucoside and anthraquinones in rats[J]. J Ethnopharmacol, 2015, 162: 61.

        [責(zé)任編輯 張寧寧]endprint

        猜你喜歡
        共轉(zhuǎn)染何首烏黃素
        制何首烏引起藥品不良反應(yīng)1例報(bào)道
        長(zhǎng)鏈非編碼RNA-ATB對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其機(jī)制研究
        EIAV Rev 蛋白拮抗eqTRIM5α介導(dǎo)的AP-1 信號(hào)通路的機(jī)制研究
        穿越時(shí)光的黃素石樓
        海峽姐妹(2019年8期)2019-09-03 01:01:02
        當(dāng)藥黃素抗抑郁作用研究
        當(dāng)藥黃素對(duì)H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用
        漆黃素固體分散體的制備
        中成藥(2017年12期)2018-01-19 02:06:32
        香菇何首烏降血脂
        綿羊肺腺瘤病毒SU蛋白與Hyal-2蛋白的結(jié)合域研究
        制何首烏中二苯乙烯苷對(duì)光和熱的不穩(wěn)定性
        中成藥(2014年11期)2014-02-28 22:29:49
        精品人妻无码一区二区色欲产成人| 国产一区二区三区视频网| 中文字幕无线码免费人妻| 嫩草影院未满十八岁禁止入内 | 无码国产精品一区二区免费模式| 久久99精品免费一区二区| 日本看片一区二区三区| 日韩亚洲一区二区三区四区| 国产白袜脚足j棉袜在线观看| 91av精品视频| 精品人妻一区二区三区蜜臀在线| 日本激情网站中文字幕| 欧洲女人性开放免费网站| 亚洲精品乱码久久久久久麻豆不卡| 日韩av在线免费观看不卡| 成年av动漫网站18禁| 激情内射亚州一区二区三区爱妻| 亚洲精品国产老熟女久久| 午夜免费观看一区二区三区| 亚洲av成人网| 亚洲av无码专区亚洲av桃| 伊人亚洲综合影院首页 | 韩国19禁主播深夜福利视频| 亚洲粉嫩av一区二区黑人| 偷拍夫妻视频一区二区| 天天弄天天模| 巨乳av夹蜜桃站台蜜桃机成人| 亚洲高清一区二区精品| 含紧一点h边做边走动免费视频 | 亚洲综合一区二区三区久久| 永久天堂网av手机版| 97免费人妻在线视频 | 亚洲a∨天堂男人无码| 日韩精品久久伊人中文字幕| 欧美激情肉欲高潮视频| 国产亚洲精久久久久久无码77777| 亚洲av乱码国产精品色| 日韩女优精品一区二区三区| 纯爱无遮挡h肉动漫在线播放| 国内视频一区| 亚洲自拍偷拍色图综合|