努爾拜合提·努爾旦 加伊娜古力

（1.新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所（新疆畜牧科學(xué)院動(dòng)物臨床醫(yī)學(xué)研究中心），新疆烏魯木齊 830011；2.新疆維吾爾自治區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，新疆烏魯木齊 830011）

伴隨著牛結(jié)核病控制與根除目標(biāo)實(shí)施后，牛結(jié)核病防控技術(shù)有所成就?，F(xiàn)階段，傳統(tǒng)的單一皮試法已經(jīng)難以達(dá)到高標(biāo)準(zhǔn)性要求；隨之而來的是皮試法、IFN-γ體外釋放、ELISA抗體檢測、膠體金抗體檢測。根據(jù)目標(biāo)實(shí)施后，不同國家結(jié)合本地區(qū)病情風(fēng)險(xiǎn)狀態(tài)與發(fā)生率選擇適合的檢測方法，防止錯(cuò)殺隱性個(gè)體，效果顯著。

1 牛結(jié)核病檢測技術(shù)

1.1 IFN-γ體外釋放法

該方法是在血液檢測的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下的檢測方法，其流程為：第一，獲取抗凝全血并和抗原展開共孵育，刺激活化的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ；設(shè)置植物刺激素與PBSS刺激的陰性對(duì)照。第二，獲取上層血漿且通過夾心ELISA方法檢測IFN-γ?，F(xiàn)階段，已經(jīng)有60%的國家紛紛通過平行試驗(yàn)或系列試驗(yàn)，即：平行試驗(yàn)通過皮試方法展開牛群檢查，檢查結(jié)果呈現(xiàn)陰性的牛再次通過IFN-γ體外釋放方法重新檢測；若有一項(xiàng)試驗(yàn)為陽性即為感染。系列試驗(yàn)則是通過皮試方法進(jìn)行牛群檢測，呈現(xiàn)陽性的牛群通過IFN-γ體外釋放再次檢測，兩種檢測全部為陽性即為陽性。但是要注意二次檢測時(shí)間間隔應(yīng)達(dá)到10d，降低兩次檢測對(duì)結(jié)果的影響。

1.2 皮試法

皮試方法在牛結(jié)核病診療中一直都是OIE官方推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法，其中包含單皮試方法與比較皮試法。參照OIE推薦指標(biāo)，皮試法內(nèi)PPD-B與PD-A注射劑量不可低于2000IU。如果采取比較皮試法需要注射兩種結(jié)核菌素，注射位置應(yīng)保持一定距離。我國對(duì)皮試法的判斷標(biāo)準(zhǔn)為：在局部出現(xiàn)炎性反應(yīng)，皮后差大于4mm即為陽性。炎性反應(yīng)不顯著，2mm<皮厚差<4mm后，疑似反應(yīng)。無炎性反應(yīng)，皮厚差<2mm后判斷為陽性。盡管判斷為疑似反應(yīng)的牛，在初次檢測60d后再次檢測，如果仍然為疑似反應(yīng)，則間隔60d后再次檢測若仍然疑似反應(yīng)，應(yīng)診斷為陽性。

1.3 抗體檢測方法

第一，ELISA抗體檢測。該種檢測方法也是現(xiàn)階段牛結(jié)核病檢測輔助方法，具有操作簡便的優(yōu)勢，選擇具有高免疫原性的蛋白作為抗原從而提升檢測精準(zhǔn)度。例如：把MPB70-MPB83-CFP10-ESAT-6蛋白串聯(lián)作為抗原分析，構(gòu)建的ELISA抗體檢測和細(xì)菌培養(yǎng)符合率達(dá)到78%。第二，膠體金抗體檢測。該種方法是在免疫層析技術(shù)的抗體檢測，在敏感性與特異性上較低。據(jù)調(diào)查顯示，在數(shù)百份細(xì)菌培養(yǎng)陽性樣本中，膠體金法的陽性檢出率在46%，161分細(xì)菌培養(yǎng)陰性樣本內(nèi)，膠體金方檢測陽性檢出率為48%。不過，膠體金法的顯著特征是方便、快速，只需10min就能夠看出效果，適用于欄圈旁操作。

2 牛結(jié)核病防治中檢測技術(shù)的使用

2.1 抗體法和IFN-γ體外釋放法的結(jié)合

已經(jīng)感染結(jié)核病的牛群，一些國家會(huì)選擇把IFN-γ體外釋放方法和抗體檢驗(yàn)展開平行試驗(yàn)。例如：韓國使用抗體檢測展開根除較為成功，牛結(jié)核病控制與預(yù)防方案有明顯的完善。從較早皮試法治抗體檢測，以及當(dāng)前抗體檢查的和IFN-γ體外釋放的結(jié)合利用。首先，通過抗體檢測進(jìn)行牛群檢查，對(duì)陽性個(gè)體展開IFN-γ體外釋放方法實(shí)驗(yàn)檢測，消除陽性個(gè)體盡可能地降低錯(cuò)殺率。

2.2 皮試法

愛爾蘭通過皮試法進(jìn)行牛結(jié)核病檢測，政府有關(guān)獸醫(yī)職能部門與私營單位共同通過單一的比較皮試方法進(jìn)行牛群檢驗(yàn)。陽性牛若出現(xiàn)應(yīng)立即殺滅，控制其移動(dòng)；同圈牛展開復(fù)查并禁止貿(mào)易。定期對(duì)牛群展開檢測，直到全部牛群在持續(xù)2次檢測內(nèi)全部為陰性。

2.3 高敏感度方法使用野生動(dòng)物結(jié)核病檢測

據(jù)調(diào)查顯示，我國有三分之一的牛結(jié)核病防控和野生動(dòng)物結(jié)核病有著密切聯(lián)系，例如：南非水牛、梅花鹿、新西蘭負(fù)鼠，它們都是牛分枝桿菌的宿主攜帶著結(jié)核菌進(jìn)而也是其重要傳染體。各國家對(duì)于野生動(dòng)物結(jié)核病檢測使用方法不同，例如：澳大利亞使用單一皮試法，增加PPD用量；愛爾蘭則使用比較皮試法進(jìn)行牛結(jié)核病檢測。并且不同國家有著不同的判斷方法。不過，因?yàn)橐吧鷦?dòng)流動(dòng)性強(qiáng)、基數(shù)大進(jìn)行全部檢測與免疫是不可能，盡管已經(jīng)有國家實(shí)施野生動(dòng)物結(jié)核病免疫。但是，仍然難以確保野生動(dòng)物免疫成功。所以，野生動(dòng)物結(jié)核病依然是疫病控制的主要問題。

3 結(jié)語

現(xiàn)階段，國內(nèi)牛結(jié)核病判斷是根據(jù)結(jié)核菌素皮試方法，牛一旦檢測為陽性應(yīng)立即撲殺。不過，由于動(dòng)物數(shù)量龐大，撲殺投入較大，皮試方法特異性低，一些養(yǎng)殖戶撲殺后效果不明顯。因此，落實(shí)具有較大難度。IFN-γ體外釋放方法也是當(dāng)前較為成熟的技術(shù)，檢測更加精準(zhǔn)，降低誤殺率，所以推薦使用單皮試法與IFN-γ體外釋放方法結(jié)合檢測。首先通過單皮方法檢測，陽性牛再次通過IFN-γ體外釋放檢測，若全部為陽性應(yīng)展開撲殺。針對(duì)已經(jīng)暴露牛群則需要使用兩種方法平行檢測，反應(yīng)陰性牛使用IFN-γ體外釋放檢測，若為陰性即為健康牛。反之，應(yīng)及時(shí)隔離。此外，也要定期進(jìn)行野生動(dòng)物與屠宰場牛結(jié)核病監(jiān)督管理。

[1]唐祎依，蔣書歌.牛結(jié)核病新疫苗的研究概述[J].當(dāng)代畜牧，2017，（24）：118.

[2]王昱，陳俊，陳楓，等.新西蘭牛結(jié)核病區(qū)域化防控與啟示[J].中國動(dòng)物檢疫，2017，34（3）：70-74.

[3]劉麟.第三師牛結(jié)核病監(jiān)測防控工作存在的問題及建議[J].新疆農(nóng)墾科技，2015，38（9）：32-33.