姜元芹　陳愛民　黃煦格　駱獻陽　張炳煌　蔡成福　周燚　劉存山

【摘要】 目的：分析下咽鱗狀細胞癌患者外周血T淋巴細胞亞群和NK細胞活性情況，旨在為相關(guān)研究工作提供參考資料。方法：擇取2011年6月-2016年5月本院收治的95例下咽鱗狀細胞癌病患為病例組，另取此期間內(nèi)來本院接受健康檢查的72例志愿者為正常組。使用流式細胞儀對病患開展相關(guān)檢查，分析病例組與正常組的淋巴細胞亞群、NK活性情況以及不同臨床分期的下咽癌病患外周血T淋巴細胞亞群以及NK細胞活性之間的關(guān)系。結(jié)果：與正常組相比，病例組的NK細胞、總B淋巴細胞、總

T淋巴細胞、輔助/抑制T細胞、輔助T細胞偏低（P<0.05），活化T細胞以及抑制T細胞偏高（P<0.05）。Ⅰ～Ⅱ期病患外周血總T淋巴細胞比Ⅲ～Ⅳ期者稍低（P>0.05）。Ⅰ～Ⅱ期病患輔助T淋巴細胞比Ⅲ～Ⅳ期者略高（P>0.05）。Ⅰ～Ⅱ期病患抑制T淋巴細胞值比Ⅲ～Ⅳ期者低（P<0.01）。Ⅰ～Ⅱ期病患輔助/抑制T淋巴細胞值比Ⅲ～Ⅳ期者高（P<0.01）。Ⅰ～Ⅱ期病患外周血總B淋巴細胞值比Ⅲ～Ⅳ期者高（P<0.05）。Ⅰ～Ⅱ期病患的活化T細胞和Ⅲ～Ⅳ期者相近（P>0.05）。Ⅰ～Ⅱ期病患外周血NK細胞數(shù)比Ⅲ～Ⅳ期者略高（P>0.05）。結(jié)論：下咽鱗狀細胞癌病患的免疫功能異常，且隨著疾病的進展，細胞免疫和體液免疫均有所降低，證實免疫功能紊亂在疾病進展中發(fā)揮了一定作用。經(jīng)流式細胞設(shè)備對外周靜脈血淋巴細胞亞群以及NK細胞活性情況檢測，可實現(xiàn)動態(tài)化檢測癌癥病患某階段細胞免疫功能變化詳情，此法方便簡單，在指導(dǎo)治療方案制定以及監(jiān)測疾病預(yù)后方面，均體現(xiàn)出了一定效果，值得進一步推廣。

【關(guān)鍵詞】 下咽鱗狀細胞癌； 外周血； T淋巴細胞亞群； NK細胞

Research on T Lymphocyte Subsets and NK Cells Activity in Peripheral Blood of Hypopharyngeal Squamous Cell Carcinoma/JIANG Yuanqin，CHEN Aimin，HUANG Xuge，et al.//Medical Innovation of China，2017，14（35）：063-066

【Abstract】 Objective：To analyze the peripheral blood T lymphocyte subsets and NK cell activity in patients with hypopharyngeal squamous cell carcinoma，and to provide reference for related research work.Method：From June 2011 to May 2016 in our hospital 95 cases of hypopharyngeal squamous cell cancer were selected the case group，the other from this period came to our hospital for health examination of 72 volunteers were selected as the normal group.Using the relevant examination by flow cytometry，the relationship between the case group and the normal group of lymphocyte subsets and the activity of NK and different clinical staging of hypopharyngeal cancer patients peripheral blood T lymphocyte subsets and NK cell activity were analyzed.Result：Compared with the normal group，NK cells，total B lymphocyte，total T lymphocytes，helper/suppressor T cells，and helper T cells were lower in the case group（P<0.05）.The activation of T cells and inhibition of T cells were higher（P<0.05）.Peripheral blood total T lymphocyte of Ⅰ-Ⅱ stage was similarity to Ⅲ-Ⅳ stage（P>0.05）.Helper T lymphocytes of Ⅰ-Ⅱ stage was slightly higher than that of Ⅲ-Ⅳ stage（P>0.05）.The value of T lymphocyte suppression of Ⅰ-Ⅱ stage was lower than that of Ⅲ-Ⅳ stage（P<0.01）. T lymphocyte count of Ⅰ-Ⅱstage was higher than that of Ⅲ-Ⅳstage（P<0.01）.The total B lymphocyte count in peripheral blood of Ⅰ-Ⅱstage was higher than that of Ⅲ-Ⅳ stage（P<0.05）.The activated T cells of Ⅰ-Ⅱ stage was similar to Ⅲ-Ⅳ stage（P>0.05）.The number of NK cells in peripheral blood of patients of Ⅰ-Ⅱstage was slightly higher than that of Ⅲ-Ⅳ stage（P>0.05）.Conclusion：The immune function of hypopharyngeal squamous cell cancer is abnormal，and with the progress of the disease，cellular immunity and humoral immunity are decreased，confirmed that the disorder of immune function play a certain role in the progression of the disease.The flow cytometry equipment of peripheral blood lymphocyte subsets and NK cell activity are detected，can realize the dynamic detection of cancer cell immune function in a phase change information，this method is simple and easy，in guiding the treatment plan and monitoring the prognosis of the disease，are reflected in a certain effect，it is worthy of further promotion.endprint

【Key words】 Hypopharyngeal squamous cell carcinoma； Peripheral blood； T lymphocyte subsets； NK cells

First-authors address：The First Affiliated Hospital of Xiamen University，Xiamen 361003，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.35.017

在整個腫瘤細胞免疫中，相對于體液免疫，細胞免疫起到了更為明顯的作用[1]。T淋巴細胞在整個免疫中起到了相當(dāng)重要的作用，其在抗腫瘤免疫和機體免疫監(jiān)視下均處于核心地位。與正常人相比，腫瘤病患會體現(xiàn)出程度不一的免疫功能異常現(xiàn)象，這一點主要體現(xiàn)在晚期腫瘤病患中[2]。在此階段內(nèi)，患者免疫功能可能會完全喪失，這在一定程度上說明病患自身免疫能力和腫瘤的發(fā)生以及發(fā)展存在相當(dāng)密切的關(guān)系。對病患開展免疫檢測，有助于評價其實時免疫功能情況，這一點對于指導(dǎo)臨床藥物使用和預(yù)測腫瘤預(yù)后等均有一定的現(xiàn)實意義[3]。此次研究擬使用流式細胞儀，對本院收治的95例下咽鱗狀細胞癌病患為研究對象，并擇選正常體檢者為對照組，開展T淋巴細胞免疫表型和NK細胞活性檢查工作，目的在于分析下咽癌病患自身免疫功能情況，對其開展個體化評估，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 擇取2011年6月-2016年5月本院收治的95例下咽鱗狀細胞癌病患為研究對象，經(jīng)病理以及相關(guān)檢查確診，符合衛(wèi)生部最新頒布的下咽鱗狀細胞癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病理證實得到確切診斷結(jié)果者，肝腎功能正常，同意參與實驗調(diào)查。排除對象：自身免疫功能缺陷者，凝血功能異常者，嚴(yán)重心腦血管疾病者，精神疾患，其他器官器質(zhì)性病變者。其中男89例，女6例。年齡26.36～72.58歲，平均（59.63±2.28）歲。疾病類型：梨狀窩癌65例，環(huán)后癌12例，咽后壁癌18 例。依照最新國際抗癌聯(lián)盟標(biāo)準(zhǔn)[4]，對患者進行疾病分期，具體為：T1 4例、T2 20例、T3 42例、T4 29例。N0 9例、N1 14例 ，N2 61例，N3 11例。

Ⅰ期3例，Ⅱ期8例 ，Ⅲ期47例，Ⅳ期37例。受試者知曉研究過程，自愿參加實驗調(diào)查，同時簽署了《知情同意書》。另擇取此期間內(nèi)來本院接受健康檢查的72例志愿者為對照組，男48例，女24例。年齡31.25～71.52歲，平均（51.25±1.25）歲。

1.2 方法 使用美國GE公司生產(chǎn)的流式細胞儀對病患開展相關(guān)檢查，試劑為美國Becton-Dick-inson公司生產(chǎn)的配套試劑盒。抽取肝素抗凝血1～2 mL混合均勻，將其置放在規(guī)格為75 mm×12 mm的試管內(nèi)，在試劑盒內(nèi)加入相應(yīng)試劑20 μL，后加入100 μL混合抗凝血。以避光條件下反應(yīng)10 min。離心處理，速度為1000 r/min，離心時長5 min。去上清，加入2 mL的PBS液完成漂洗后，棄上清，加入到300 μL PBS內(nèi)混合均勻，使用流式細胞設(shè)備獲得數(shù)據(jù)。

1.3 觀察指標(biāo) （1）分析病例組與正常組的淋巴細胞亞群以及NK細胞活性情況。（2）分析不同臨床分期的下咽癌病患外周血淋巴細胞亞群以及NK細胞活性之間的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 20.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組T淋巴細胞亞群以及NK細胞活性情況 與正常組相比，病例組的NK細胞、總B淋巴細胞、總T淋巴細胞、輔助/抑制T細胞、輔助T細胞偏低（P<0.05），活化T細胞以及抑制T細胞偏高（P<0.05），見表1。

2.2 不同臨床分期的下咽癌病患外周血T淋巴細胞亞群以及NK活性之間的關(guān)系Ⅰ～Ⅱ期病患外周血總T淋巴細胞比Ⅲ～Ⅳ期者稍低（P>0.05）。Ⅰ～Ⅱ期病患輔助T淋巴細胞比Ⅲ～Ⅳ期者略高（P>0.05）。Ⅰ～Ⅱ期病患抑制T淋巴細胞值比Ⅲ～Ⅳ期者低（P<0.01）。Ⅰ～Ⅱ期病患輔助/抑制T淋巴細胞值比Ⅲ～Ⅳ期者高（P<0.01）。Ⅰ～Ⅱ期病患外周血總B淋巴細胞值比Ⅲ～Ⅳ期者高（P<0.05）。Ⅰ～Ⅱ期病患的活化T細胞和Ⅲ～Ⅳ期者相近（P>0.05）。Ⅰ～Ⅱ期病患外周血NK細胞數(shù)比Ⅲ～Ⅳ期者略高（P>0.05）。見表2。

3 討論

下咽鱗狀細胞癌為臨床常見病、多發(fā)病，該疾病病死率較高，在一定程度上對病患的生命安全造成威脅[5-6]。癌瘤的發(fā)生與遺傳因素及環(huán)境因素有關(guān)。在外界環(huán)境因素中，機體免疫力降低為腫瘤發(fā)生以及發(fā)展的關(guān)鍵性因素，這一點已經(jīng)得到證實。研究指出，腫瘤為機體免疫功能失衡而產(chǎn)生的有害反應(yīng)和結(jié)果，而免疫力降低為引起腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵性因素[7-9]。

在常規(guī)情況下，人體中的輔助T細胞、機體總T細胞、B細胞、抑制T細胞比值、NK細胞和活化T細胞均處于平衡狀態(tài)[10]。下咽鱗狀細胞癌病患的免疫功能相對紊亂，手術(shù)耐受性不佳，治療效果不盡如人意[11]。基于這種情況，臨床相繼研制出多種免疫功能藥物，且得以廣泛使用。但值得說明的是，并非所有腫瘤病患都會發(fā)生免疫功能低下或者免疫紊亂現(xiàn)象，即便存在免疫功能紊亂，各個病患之間的情況也存在一定差異[12-13]。

流式細胞設(shè)備以及單克隆技術(shù)的不斷進展，令淋巴細胞亞群檢測成為了可能，且令免疫功能評估工作也得到了實質(zhì)性進展[14-15]。該項設(shè)備能夠在短時間內(nèi)對數(shù)以萬計細胞的側(cè)向角散射、熒光信號、前向角散射等參數(shù)加以分析，經(jīng)測定外周血淋巴細胞亞群的改變情況，進而動態(tài)性評估機體免疫能力，反映出細胞侵襲活性情況，屬于一種方便快捷測定癌癥病患機體免疫的方式。其有著敏感性強、出具結(jié)果迅速、準(zhǔn)確性高等特征，在評價臨床治療效果以及判定預(yù)后方面，有著相當(dāng)重要的臨床價值[16]。endprint

文獻[17]報道，腫瘤發(fā)展成癌以及進展過程中，免疫反應(yīng)突顯了相當(dāng)重要的作用，且變化極為復(fù)雜。免疫功能會受到甲狀腺激素的調(diào)節(jié)，且分化型甲狀腺癌病患外周血輔助T細胞較正常組低。本研究結(jié)果顯示：與正常組相比，病例組的NK細胞、總B淋巴細胞、總T淋巴細胞、輔助/抑制T細胞、輔助T細胞偏低（P<0.05），活化T細胞以及抑制T細胞偏高（P<0.05）。在一定程度上提示，下咽癌病患細胞免疫功能比健康者低，免疫力低下/功能紊亂在疾病發(fā)生和發(fā)展中起到了一定的作用[18]。

有學(xué)者指出，對下咽鱗狀細胞癌病患開展研究證實：與正常組相比，病例組的CD4/CD8值、CD4淋巴亞群降低，CD8淋巴亞群上升，NK細胞活性降低；與T3～T4組相比，T1～T2組，N+組比N0組均存在CD4淋巴亞群和CD4/CD8值降低，與此同時，NK細胞活性降低。中低分化組的CD4淋巴亞群、CD4/CD8值降低[19]。這在一定程度上說明該疾病患者的CD4 T淋巴細胞亞群和NK細胞活性度降低，細胞免疫能力下降。對外周血T淋巴細胞亞群和NK細胞活性功能檢查，可幫助檢測腫瘤病患細胞免疫能力。

本研究結(jié)果證實：下咽鱗狀細胞癌患者與健康人相比，輔助T細胞偏低，出現(xiàn)這種情況的原因與NK細胞活性下降、抑制T細胞上升存在相關(guān)性。本研究對下咽鱗癌病患的分期情況開展分析，證實：Ⅰ～Ⅱ期病患外周血總T淋巴細胞比Ⅲ～Ⅳ期者稍低（P>0.05），Ⅰ～Ⅱ期病患輔助T淋巴細胞比Ⅲ～Ⅳ期者略高（P>0.05），Ⅰ～Ⅱ期病患抑制T淋巴細胞值比Ⅲ～Ⅳ期者低（P<0.01），Ⅰ～Ⅱ期病患輔助/抑制T淋巴細胞值比Ⅲ～Ⅳ期者高（P<0.01），Ⅰ～Ⅱ期病患外周血總B淋巴細胞值比Ⅲ～Ⅳ期者高（P<0.05），Ⅰ～Ⅱ期病患的活化T細胞和Ⅲ～Ⅳ期者相近（P>0.05），Ⅰ～Ⅱ期病患外周血NK細胞數(shù)比Ⅲ～Ⅳ期者略高（P>0.05）。該項結(jié)果指出，隨著疾病的進展，不但細胞免疫功能逐漸下降，體液免疫也在減弱。有一項對環(huán)后癌的研究證實，該疾病患者中，外周血T淋巴細胞亞群存在免疫異?，F(xiàn)象，外周血輔助T細胞水平顯著降低，抑制T細胞水平提升，進而引發(fā)較為嚴(yán)重的比值倒置[20]。

NK細胞有著抗腫瘤、抗感染以及抗器官移植的效果，其參與到B淋巴細胞以及T淋巴細胞免疫調(diào)節(jié)中。NK細胞經(jīng)受體作用，保持平衡，進而發(fā)揮出殺傷效用。

人體外周血NK細胞可被分成二群，高達80.00%～90.00%的NK細胞呈現(xiàn)出低表達，CD56呈現(xiàn)為高表達。這種細胞能夠全面發(fā)揮細胞毒性作用，接近10.00%～20.00%的NK細胞表型為CD56brighCD16brigh，就功能而言，主要為分泌細胞，參加到機體免疫調(diào)節(jié)中。對95例下咽鱗癌病患調(diào)查指出，癌癥組比非癌癥組NK細胞活性低（P<0.05）。局部晚期病患和區(qū)域性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病患的NK細胞活性同樣下降。手術(shù)后，可顯著提升T細胞亞群以及NK細胞的免疫能力?；颊吣挲g越小，NK細胞免疫活性就越低。

綜上所述，下咽鱗狀細胞癌病患的免疫功能異常，且隨著疾病的進展，細胞免疫和體液免疫均有所降低，證實免疫功能紊亂在疾病進展中發(fā)揮了一定作用。經(jīng)流式細胞設(shè)備對外周靜脈血淋巴細胞亞群以及NK細胞活性情況，可實現(xiàn)動態(tài)化檢測腫瘤病患某階段細胞免疫功能變化詳情，此法方便簡單，在指導(dǎo)治療方案制定以及監(jiān)測疾病預(yù)后方面，均體現(xiàn)出了一定效果，值得進一步推廣。

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（收稿日期：2017-11-03） （本文編輯：程旭然）endprint