于　軍　王　峰　李開(kāi)良　楊　蕾　曹振強(qiáng)　

(吉林大學(xué)第二醫(yī)院電診科，吉林　長(zhǎng)春　130041)

1吉林省人民醫(yī)院肝膽胰外科2吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院鏡檢科

胰腺導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀黏液性腫瘤(IPMN)是胰腺癌最重要及最常見(jiàn)的癌前病變之一，是一種相對(duì)良性腫瘤，術(shù)后預(yù)后較好〔1〕。但部分IPMN具有侵襲性及快速發(fā)展和預(yù)后差的特點(diǎn)，常規(guī)影像學(xué)與病理學(xué)檢測(cè)很難對(duì)這一類(lèi)IPMN病例做出正確診斷及鑒別〔2〕。K-ras基因是一種原癌基因，其所在信號(hào)通路在調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)和惡性腫瘤轉(zhuǎn)化的過(guò)程中起重要作用。約20%人類(lèi)腫瘤中都存在K-ras基因突變〔3〕。K-ras基因突變與胰腺癌的發(fā)病及預(yù)后密切相關(guān)〔4～6〕。有學(xué)者報(bào)道了IPMN樣本K-ras突變及與病理分型的關(guān)系，指出在IPMN樣本中存在K-ras突變，但突變率及與臨床相關(guān)性報(bào)道不一〔7～9〕。本研究分析IPMN病例標(biāo)本K-ras基因的突變情況，探討其與相關(guān)臨床及病理特點(diǎn)的關(guān)聯(lián)性。

1　資料與方法

1.1標(biāo)本資料標(biāo)本資料及納入標(biāo)準(zhǔn)同文獻(xiàn)〔10〕，31例IPMN 患者組織標(biāo)本來(lái)自吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院2012年1月至2014年12月胰腺手術(shù)切除腫瘤患者。男16例(51.6%)，女15例(48.4%)，平均年齡63.9歲；臨床病理分型：胃型15例(48.39%)，腸型8例(25.81%)，胰膽管型7例(22.58%)，嗜酸細(xì)胞型1例(3.22%)；腫瘤向周邊組織浸潤(rùn)情況：浸潤(rùn)型7例(22.58%)，非浸潤(rùn)型24例(77.42%)；分化程度：高分化14例(45.16%)、中分化9例(29.03%)、低分化8例(25.81%)；IPMN入組標(biāo)準(zhǔn)：以下3條中符合任意1條均可入組。①影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)胰腺導(dǎo)管有擴(kuò)張；②病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)囊性擴(kuò)張的導(dǎo)管內(nèi)被覆黏液上皮或壺腹部有黏液溢出；③影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)導(dǎo)管內(nèi)具有乳頭狀增生腫瘤并伴導(dǎo)管擴(kuò)張。擴(kuò)張導(dǎo)管直徑≥1 cm。所有病理學(xué)類(lèi)型及TNM分期均按照世界衛(wèi)生組織(WHO)標(biāo)準(zhǔn)。

1.2K-ras基因突變檢測(cè)分析IPMN患者腫瘤石蠟組織切片(厚度10 μm)3片，應(yīng)用二甲苯脫蠟后，無(wú)水乙醇清洗2次，晾干后，應(yīng)用刀片采集腫瘤組織至1.5 ml離心管，應(yīng)用石蠟組織DNA提取試劑盒(BIOMIGA)進(jìn)行樣本DNA提取，應(yīng)用紫外分光光度計(jì)在260 nm與280 nm測(cè)定OD值，計(jì)算含量與純度。應(yīng)用K-ras基因突變檢測(cè)試劑盒(武漢友芝有生物技術(shù)有限公司)通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR儀(羅氏Lightcycler480)對(duì)提取DNA的K-ras基因突變情況進(jìn)行檢測(cè)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS10.0 軟件進(jìn)行Fisher檢驗(yàn)。

2　結(jié)　果

31例IPMN患者組織中檢測(cè)出10例(32.26%)發(fā)生K-ras基因突變。10例K-ras基因突變中GGT(Gly)to GAT(Asp)6例；GGT(Gly) to GTT(Val)3例；GGT(Gly) to CGT(Arg)1例。其中，胰膽管型5例(71.4%)、胃型2例(13.3%)、腸型2例(25.0%)、嗜酸細(xì)胞型1例(100.0%)，各臨床分型差異顯著(P=0.022)；浸潤(rùn)型6例(85.7%)顯著高于非浸潤(rùn)型4例(16.7%，P=0.002)；高分化1例(7.1%)、中分化2例(22.2%)、低分化7例(87.5%)，不同分化類(lèi)型差異顯著(P=0.000)。

3　討　論

內(nèi)鏡逆行胰膽管造影通常被用于IPMN的臨床診斷〔11〕。然而，IPMN包括各種各樣的組織類(lèi)型如腺瘤和腺癌，僅應(yīng)用影像學(xué)診斷及病理學(xué)診斷評(píng)價(jià)惡性程度往往很難。因此，需要采用一些新的檢測(cè)方法包括基因檢查進(jìn)一步完善IPMN診斷。K-ras基因突變位點(diǎn)常位于該基因2號(hào)外顯子的12號(hào)和13號(hào)密碼子上及3號(hào)外顯子的61號(hào)密碼子，其中常見(jiàn)突變形式為：G12C、G12R、G12S、G12V、G12D、G12A、G13V/D，占90%以上〔12〕。在本研究中K-ras基因突變主要以GGT(Gly) to GAT(Asp)突變?yōu)橹?。本研究突變率低于Kaino等〔8〕報(bào)道IPMN患者胰腺液中檢測(cè)K-ras 69%的突變率。本研究說(shuō)明K-ras基因突變與IPMN的腫瘤組織浸潤(rùn)及分化密切相關(guān)，通過(guò)該基因突變檢測(cè)可能為預(yù)測(cè)IPMN發(fā)生侵襲及惡性程度提供重要手段。

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