劉青翠 彭 翔 張俊平 唐守營(yíng) 武書(shū)庚

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，農(nóng)業(yè)部飼料生物技術(shù)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，生物飼料開(kāi)發(fā)國(guó)家工程研究中心，北京 100081；2.北京挑戰(zhàn)牧業(yè)科技股份有限公司，北京 100081)

隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，居民生活水平的提高，人們對(duì)綠色、安全、無(wú)抗雞蛋的需求日益增加。蛋雞養(yǎng)殖中，常因飼養(yǎng)環(huán)境、飼養(yǎng)管理、營(yíng)養(yǎng)水平差等導(dǎo)致蛋雞生產(chǎn)潛能得不到充分發(fā)揮，養(yǎng)殖戶往往忽視產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能及蛋品質(zhì)；隨著蛋雞周齡的增加以及營(yíng)養(yǎng)、環(huán)境、疾病等因子影響的積累，導(dǎo)致蛋殼破損嚴(yán)重，蛋殼表面殘留大量可見(jiàn)和不可見(jiàn)的糞污等，雞蛋易被微生物污染，蛋雞機(jī)體抗氧化能力及抗病力逐漸下降。

中草藥制劑能調(diào)整器官功能，使機(jī)體保持良好的抗病力，且無(wú)耐藥性。杜仲是一種天然草藥，資源豐富，已列入飼料添加劑目錄，其富含綠原酸、黃酮類化合物、多糖等，具有抑菌、抗應(yīng)激、抗氧化、清除自由基、增加消化酶分泌、促進(jìn)生長(zhǎng)和改善肉質(zhì)等功效。杜仲葉提取物具有天然、多功能、生物安全等特點(diǎn)。杜仲葉提取物中的綠原酸、京尼平苷可促進(jìn)膽汁分泌；黃酮類化合物可促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖，加速成骨細(xì)胞分化和礦化[1-2]。杜仲葉中的皂苷、生物堿、多糖等可增強(qiáng)免疫細(xì)胞功能，活化免疫器官、免疫系統(tǒng)，促進(jìn)抗體生成。研究發(fā)現(xiàn)，杜仲葉50%乙醇提取物顯著增強(qiáng)了小白鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能及巨噬細(xì)胞的吞噬能力，對(duì)正常小鼠脾臟抗體形成細(xì)胞無(wú)顯著影響[3]。針對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋后期的生產(chǎn)性能下降和蛋品質(zhì)差等問(wèn)題，目前未見(jiàn)杜仲葉提取物的相關(guān)報(bào)道。因此，本試驗(yàn)旨在研究飼糧中添加杜仲葉提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、蛋黃膽固醇含量及血清抗氧化指標(biāo)的影響，以期為產(chǎn)蛋后期蛋雞健康和配制蛋品質(zhì)改善型蛋雞飼糧提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

杜仲葉提取物購(gòu)自山東龍昌動(dòng)物保健品有限公司，含綠原酸7.0%、杜仲黃酮15%、杜仲多糖40%、水溶性雜質(zhì)38%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼糧

選取產(chǎn)蛋率、體重相近，健康狀態(tài)良好的420日齡海蘭褐蛋雞1 200只，隨機(jī)分為4組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加100、200和300 g/t杜仲葉提取物。預(yù)試期1周，正試期8周。

參照NRC(1994)、我國(guó)《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)以及海蘭褐蛋雞飼養(yǎng)手冊(cè)配制基礎(chǔ)飼糧，不添加杜仲葉提取物?；A(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)預(yù)混料為每千克飼糧提供 Premix provided the following per kg of the diet： VA 10 000 IU，VD33 000 IU，VE 20 IU，VK32 mg，硫胺素 thiamine 1 mg，核黃素 riboflavin 8 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 40 mg，煙酸 niacin 32.5 mg，吡哆醇 pyridoxine 8 mg，生物素 biotin 2 mg，葉酸 folic acid 1.5 mg，VB125 mg，膽堿 choline 500 mg，Mn 70 mg，I 1 mg，F(xiàn)e 80 mg，Cu 8 mg，Zn 80 mg，Se 0.3 mg。

2)代謝能為計(jì)算值，其余為實(shí)測(cè)值。ME was a calculated value, while the others were measured values.

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)期內(nèi)，試驗(yàn)雞只每天06:30、14:30各飼喂1次干拌料，有窗雞舍3層階梯式籠養(yǎng)，上層和中層每窩位4只雞，下層每窩位3只雞，自由采食與飲水，每日恒定光照16 h，飼養(yǎng)管理和免疫均按照試驗(yàn)場(chǎng)原有程序進(jìn)行。

1.4 指標(biāo)測(cè)定及方法

1.4.1 生產(chǎn)性能

觀察每組雞只的健康狀況，試驗(yàn)期以重復(fù)為單位，記錄每天喂料量、產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重、破軟蛋數(shù)和死亡數(shù)，每7 d統(tǒng)計(jì)飼料消耗量。分別于試驗(yàn)第28天和第56天，計(jì)算每重復(fù)產(chǎn)蛋率、平均蛋重、平均日采食量、料蛋比、破軟蛋率和死淘率。

1.4.2 蛋品質(zhì)

收集試驗(yàn)第28天和第56天的雞蛋，每重復(fù)5枚，用蛋形指數(shù)測(cè)定儀(Egg Index Reader, Fujihira Industry Co., Ltd.)測(cè)量蛋形指數(shù)，用蛋殼厚度測(cè)定儀(Egg Shell Thickness Gauge, Orka Techology Ltd.)測(cè)定蛋殼厚度，用SONOVA蛋品質(zhì)自動(dòng)分析儀(Egg AnalyzerTM, Orka Technology Ltd.)測(cè)定蛋黃顏色、哈氏單位。

1.4.3 蛋黃膽固醇含量

收集試驗(yàn)第28天和第56天的雞蛋，每重復(fù)5枚蛋，混合5枚蛋黃，稱取混合樣品0.05 g，經(jīng)無(wú)水乙醇-氫氧化鉀溶液皂化，石油醚和無(wú)水乙醚混合溶液提取，甲醇溶液定量，用高效液相色譜儀測(cè)定。

1.4.4 血清抗氧化能力

試驗(yàn)第56天早上，每重復(fù)隨機(jī)選取1只雞，空腹翅靜脈采血，3 600 r/min 離心10 min制備血清，分裝，-20 ℃保存，黃嘌呤氧化酶法測(cè)定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性，硫代巴比妥酸法測(cè)定血清丙二醛(MDA)含量，比色法測(cè)定血清過(guò)氧化氫酶(CAT)活性。測(cè)定采用南京建成生物工程研究所試劑盒，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用Excel 2010對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行初步處理，用SPSS 19.0進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，多重比較用Duncan氏法，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 杜仲葉提取物對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋后期生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，試驗(yàn)第28天、第56天，飼糧添加杜仲葉提取物組平均蛋重均略高于對(duì)照組，但各組間差異不顯著(P>0.05)，300 g/t組平均蛋重均略高于其他各組。試驗(yàn)第28天、第56天，飼糧添加杜仲葉提取物組平均日采食量略高于對(duì)照組，但各組間差異不顯著(P>0.05)，300 g/t組平均日

采食量略高于其他各組。試驗(yàn)第28天、第56天，飼糧添加杜仲葉提取物組產(chǎn)蛋率均略高于對(duì)照組，但各組間差異不顯著(P>0.05)，300 g/t組產(chǎn)蛋率略高于其他各組。試驗(yàn)第28天、第56天，飼糧添加杜仲葉提取物組料蛋比均略低于對(duì)照組，但各組間差異不顯著(P>0.05)，隨著杜仲葉提取物添加水平增加，料蛋比有降低的趨勢(shì)，300 g/t組料蛋比略低于其他各組。試驗(yàn)第28天、第56天，300 g/t組破軟蛋率顯著低于對(duì)照組和100 g/t組(P<0.05)，100和200 g/t組破軟蛋率顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，100和200 g/t組之間破軟蛋率差異不顯著(P>0.05)，在破軟蛋率方面300 g/t組效果最好。試驗(yàn)第28天、第56天，300 g/t組死淘率顯著低于對(duì)照組和100、200 g/t組(P<0.05)，200 g/t組死淘率顯著低于對(duì)照組和100 g/t組(P<0.05)，100 g/t組死淘率顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，在死淘率方面300 g/t組效果最好。

表2 杜仲葉提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能的影響

續(xù)表2項(xiàng)目Items時(shí)間Time對(duì)照組Controlgroup杜仲葉提取物添加水平Eucommialeavesextractsupplementallevel/(g/t)100200300P值P?value死淘率Mortalityrate/%第28天The28thday0．76±0．15a0．59±0．21b0．51±0．14c0．21±0．07d0．028第56天The56thday1．02±0．22a0．96±0．09b0．41±0．09c0．24±0．03d0．025

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫(xiě)字母表示差異極顯著(P<0.01)，相同或無(wú)字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), and with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2 杜仲葉提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋品質(zhì)的影響

由表3可知，試驗(yàn)第28天、第56天，100、200、300 g/t組蛋白高度、蛋黃顏色、蛋形指數(shù)、蛋殼比例、蛋黃比例、蛋白比例與對(duì)照組相比均差異不顯著(P>0.05)。試驗(yàn)第28天，300 g/t組哈氏單位顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，100、200、300 g/t組之間差異不顯著(P>0.05)，100、200 g/t組和對(duì)照組之間哈氏單位差異不顯著(P>0.05)，在哈氏單位方面300 g/t組效果最好；試驗(yàn)第56天，各組哈氏單位差異不顯著(P>0.05)。試驗(yàn)第28天，各組間蛋殼厚度差異不顯著(P>0.05)；試驗(yàn)第56天，100、200、300 g/t組蛋殼厚度顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，100、200、300 g/t組之間差異不顯著(P>0.05)，在蛋殼厚度方面300 g/t組最好。試驗(yàn)第28天，各組之間蛋殼強(qiáng)度差異不顯著(P>0.05)；試驗(yàn)第56天，200、300 g/t組蛋殼強(qiáng)度顯著高于100 g/t組和對(duì)照組(P<0.05)，200、300 g/t組之間差異不顯著(P>0.05)，100 g/t組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。

表3 杜仲葉提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋品質(zhì)的影響

續(xù)表3項(xiàng)目Items時(shí)間Time對(duì)照組Controlgroup杜仲葉提取物添加水平Eucommialeavesextractsupplementallevel/(g/t)100200300P值P?value蛋殼強(qiáng)度Eggshellstrength/(N/m2)第28天The28thday37．10±5．3837．49±4．2137．44±5．0339．09±5．380．754第56天The56thday32．55±3．27a36．10±3．53b37．75±3．47c38．17±3．67cd0．032蛋形指數(shù)Eggshapeindex第28天The28thday1．40±0．041．39±0．041．40±0．051．42±0．040．418第56天The56thday1．37±0．0531．40±0．0401．41±0．101．38±0．060．357蛋殼比例Eggshellpercentage/%第28天The28thday11．38±1．0611．63±0．8211．61±0．9311．59±1．180．925第56天The56thday10．79±0．9310．59±0．4110．42±0．5010．90±0．650．321蛋黃比例Yolkpercentage/%第28天The28thday26．10±2．1226．39±1．7426．55±2．4127．10±2．580．406第56天The56thday27．72±1．1828．18±2．2027．78±1．6627．01±2．030．584蛋白比例Albumenpercentage/%第28天The28thday62．51±2．5661．96±1．7261．82±2．4560．53±3．110．315第56天The56thday61．48±1．4061．22±2．0461．79±1．7762．09±2．220．785

2.3 杜仲葉提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋黃膽固醇含量的影響

由表4可知，試驗(yàn)第28天，300 g/t組蛋黃膽固醇含量極顯著低于100、200 g/t組和對(duì)照組(P<0.01)，200 g/t組蛋黃膽固醇含量極顯著低于100 g/t組和對(duì)照組(P<0.01)，100 g/t組蛋黃膽固醇含量極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)。試驗(yàn)第56天，300 g/t組蛋黃膽固醇含量極顯著低于100 g/t組和對(duì)照組(P<0.01)，200 g/t組蛋黃膽固醇含量極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，100 g/t組蛋黃膽固醇含量極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)。由此可見(jiàn)，飼糧中添加杜仲葉提取物可極顯著降低蛋黃的膽固醇的含量，試驗(yàn)第28天300 g/t組蛋黃膽固醇的含量最低。

表4 杜仲葉提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋黃膽固醇含量的影響

2.4 杜仲葉提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞血清抗氧化能力的影響

由表5可知，與對(duì)照組相比，飼糧添加杜仲葉提取物可極顯著提高血清SOD活性，300 g/t組極顯著高于100、200 g/t組和對(duì)照組(P<0.01)，200 g/t組極顯著高于100 g/t組和對(duì)照組(P<0.01)，100 g/t組極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)；在改善血清SOD活性方面，300 g/t組效果最好。與對(duì)照組相比，飼糧添加杜仲葉提取物可極顯著降低血清MDA含量，300 g/t組極顯著低于100、200 g/t組和對(duì)照組(P<0.01)，200 g/t組極顯著低于100 g/t組和對(duì)照組(P<0.01)，100 g/t組極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)；在改善血清MDA含量方面，300 g/t組效果最好。與對(duì)照組相比，飼糧添加杜仲葉提取物可極顯著提高血清CAT活性，300 g/t組極顯著高于100、200 g/t組和對(duì)照組(P<0.01)，200 g/t組極顯著高于100 g/t組和對(duì)照組(P<0.01)，100 g/t組極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)；在改善血清CAT活性方面， 300 g/t組效果最好。

表5 杜仲葉提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

3 討 論

3.1 杜仲葉提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能的影響

影響蛋雞生產(chǎn)性能的因素很多，包括個(gè)體差異、年齡、環(huán)境、活動(dòng)量、繁殖階段、飼糧能量水平等[4-6]。本研究表明，飼糧中添加100、200、300 g/t的杜仲葉提取物對(duì)試驗(yàn)期蛋雞的平均蛋重、平均日采食量、產(chǎn)蛋率、料蛋比無(wú)顯著影響，馬得瑩等[7]的研究表明，中草藥添加劑對(duì)蛋雛雞的體重及增重?zé)o顯著影響，這與本試驗(yàn)結(jié)果相似，杜仲葉提取物中的黃酮類化合物能夠促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖，加速成骨細(xì)胞分化和礦化，并且能夠刺激胃腸道，增加消化酶的分泌，促進(jìn)血液循環(huán)，提高機(jī)體消化率和吸收率，提高動(dòng)物生產(chǎn)性能。但也有研究表明，杜仲葉提取物作為飼料添加劑可增強(qiáng)動(dòng)物免疫力，提高畜禽生長(zhǎng)性能，改善畜產(chǎn)品質(zhì)量[8]。蛋雞產(chǎn)蛋后期機(jī)體氧化加速衰老，采食量增加，產(chǎn)蛋率下降，添加300 g/t的杜仲葉提取物有延緩蛋雞產(chǎn)蛋率下降的趨勢(shì)。本試驗(yàn)期為8周，杜仲葉提取物作用緩慢，試驗(yàn)期相對(duì)較短，可能未對(duì)蛋雞的平均蛋重、平均日采食量、產(chǎn)蛋率、料蛋比產(chǎn)生影響。飼糧中添加300 g/t的杜仲葉提取物可顯著改善破軟蛋率和死淘率，可能是杜仲葉提取物中的綠原酸具有抗菌、止血及增加白血球數(shù)量的作用。Okada等[9]研究表明，萜類化合物地芰普內(nèi)酯是一種干擾T淋巴細(xì)胞的主要物質(zhì)，具有免疫抑制活性，可以提高機(jī)體免疫力，可能與破軟蛋率和蛋雞死淘率下降有關(guān)。

3.2 杜仲葉提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋品質(zhì)的影響

蛋雞產(chǎn)蛋后期蛋體變大，蛋殼變薄，蛋殼顏色不均一。影響蛋品質(zhì)的因素較多，除遺傳因素外，還受飼糧、光照和雞體健康狀況影響。蛋形指數(shù)、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度是衡量蛋品質(zhì)的重要指標(biāo)，蛋殼主要是由94%～97%的無(wú)機(jī)物和3%～6%的有機(jī)物組成，無(wú)機(jī)物包括93%碳酸鈣、1%碳酸鎂和2.8%碳酸鈣與碳酸鎂混合物，還有銅、鐵、錳、鋅、硒等微量元素。本研究表明，飼糧中添加不同水平的杜仲葉提取物對(duì)蛋黃顏色、蛋形指數(shù)、蛋成分比例未產(chǎn)生顯著影響，但可提高哈氏單位，哈氏單位越高說(shuō)明蛋白質(zhì)越黏稠，蛋品質(zhì)越好，雞蛋中含有許多活性蛋白質(zhì)，如卵轉(zhuǎn)鐵蛋白、溶菌酶、卵球蛋白、卵黃磷脂蛋白、生物結(jié)合蛋白等，這些活性蛋白質(zhì)具有多種生理作用，決定雞蛋的新鮮度，徐賢柱等[10]研究表明，杜仲多糖可以有效提高小鼠的免疫機(jī)能，其作用機(jī)理可能是刺激了脾臟增加，使其對(duì)免疫應(yīng)答的能力加強(qiáng)；刺激T細(xì)胞等分泌更多的免疫因子，使一些處于休眠狀態(tài)的免疫細(xì)胞活化；增加免疫細(xì)胞的數(shù)量，提高機(jī)體免疫力，進(jìn)一步提高活性蛋白質(zhì)的活性，提高雞蛋哈氏單位。俞路等[11]研究表明，蛋殼鈣沉積過(guò)程與輸卵管、子宮部鈣結(jié)合蛋白(CaBP)表達(dá)量密切相關(guān)。第56天蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，分析其原因可能是蛋殼膜形成過(guò)程中因飼糧中添加杜仲葉提取物產(chǎn)生變化，杜仲葉提取物中礦物質(zhì)及有機(jī)酸可溶性強(qiáng)，能顯著增加血液中鈣、磷的含量，蛋殼形成過(guò)程杜仲葉提取物影響蛋雞輸卵管和子宮中CaBP表達(dá)量，決定蛋殼鈣沉積量，從而影響蛋殼質(zhì)量。

3.3 杜仲葉提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋黃膽固醇含量的影響

家禽通過(guò)合成、轉(zhuǎn)運(yùn)、降解3種途徑來(lái)維持體內(nèi)膽固醇平衡，肝臟和卵巢是膽固醇的合成場(chǎng)所，膽固醇的合成通過(guò)類異戊二烯合成來(lái)實(shí)現(xiàn)，類異戊二烯以乙酰輔酶A(CoA)為原料，經(jīng)過(guò)多種酶共同作用形成膽固醇，3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(HMGR)為體內(nèi)膽固醇合成代謝的關(guān)鍵限速酶，膽固醇7α羥化酶(CYP7α1)為膽固醇分解為膽汁酸的關(guān)鍵酶，HMGR在胞液中經(jīng)蛋白激酶催化磷酸化喪失活性，鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶(GC)等通過(guò)第二信使環(huán)磷酸腺苷(cAMP)影響蛋白激酶，加速HMGR磷酸化失活從而抑制HMGR活性，減少膽固醇的合成，溫安詳?shù)萚12]研究表明，在飼糧中添加200、400 mg/kg綠原酸能顯著提高中華鱉裙邊和肌肉膠原蛋白的含量，并顯著降低肌肉膽固醇含量。本研究表明，飼糧中添加100、200和300 g/t杜仲葉提取物可極顯著降低蛋黃中膽固醇的含量，但杜仲葉提取物降低膽固醇含量的機(jī)理尚未完全清楚，可能的原因是杜仲葉提取物中綠原酸降低血清HMGR活性，同時(shí)提高血清GC、CYP7α1等活性，通過(guò)提高血清GC活性來(lái)抑制HMGR活性，以促進(jìn)膽固醇向膽汁酸轉(zhuǎn)化，降低體內(nèi)膽固醇含量，進(jìn)而降低蛋黃中膽固醇的含量，這與賴玲林等[13]的研究結(jié)果一致。

3.4 杜仲葉提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

4 結(jié) 論

對(duì)于產(chǎn)蛋后期蛋雞，飼糧中添加300 g/t杜仲葉提取物的效果最好，可改善哈氏單位、蛋殼強(qiáng)度和蛋殼厚度，極顯著降低蛋黃膽固醇含量，改善機(jī)體抗氧化能力。

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*Corresponding author, professor, E-mail: wushugeng@caas.cn