李晨晨 黃文文 金 敏 朱婷婷 羅嘉翔 馬紅娜 袁 野 周歧存

(寧波大學(xué)海洋學(xué)院魚類營(yíng)養(yǎng)研究室，寧波 315211)

黃顙魚(Pelteobagrusfulvidraco)是我國(guó)內(nèi)陸的一種小型淡水經(jīng)濟(jì)魚類[1]，其隸屬鲇形目(Siluriformes)，鲿科(Bagridae)，黃顙魚屬(Pelteobagrus)，在我國(guó)俗稱嘎牙子、黃臘丁、嘎魚等。屬于溫水性底層魚類，喜棲息于緩流或者靜水中，其肉質(zhì)細(xì)膩、口感鮮美、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、無肌間刺等優(yōu)點(diǎn)[2]，深受人們的喜愛，具有很大的市場(chǎng)潛力。近年來，黃顙魚的養(yǎng)殖規(guī)模迅速擴(kuò)大[3]，成了內(nèi)陸淡水地區(qū)一種重要的養(yǎng)殖品種。

魚粉是一種優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)來源，可以廣泛的應(yīng)用于水產(chǎn)飼料中。隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)的不斷發(fā)展，對(duì)水產(chǎn)飼料的需求越來越大，對(duì)魚粉的需求量也不斷增加。但由于資源的減少以及過度捕撈，使得魚粉供應(yīng)不足，市場(chǎng)價(jià)格高昂。為有效降低水產(chǎn)飼料的成本，尋求其他可靠的蛋白質(zhì)源部分或全部替代魚粉，成為一個(gè)必然的趨勢(shì)。豆粕的蛋白質(zhì)含量高，氨基酸相對(duì)較為平衡。菜籽粕也是廣泛用于淡水魚類的植物蛋白質(zhì)源，但在實(shí)際生產(chǎn)中，菜籽粕經(jīng)常與大豆蛋白質(zhì)混合使用以達(dá)到最適的氨基酸平衡[4]；在日本鱸魚[5]等魚類的研究中表明，菜籽粕可以替代一定比例的魚粉。棉籽粕是繼豆粕、菜籽粕之后的第三大植物蛋白質(zhì)源。在中國(guó)，每年棉籽粕的產(chǎn)量都在600萬(wàn)t以上[6]?，F(xiàn)有的研究表明，棉籽粕可以替代一定比例的魚粉[7-8]。限制棉籽粕使用的主要因素是其內(nèi)較高含量的棉酚，棉酚通常以多酚二醛的形式存在。近年來研究發(fā)現(xiàn)，以豆粕為代表的植物蛋白質(zhì)源替代魚粉會(huì)破壞魚類消化和代謝系統(tǒng)的組織結(jié)構(gòu)，抑制魚類消化和代謝能力，魚類對(duì)含有豆粕的飼料，表現(xiàn)出攝食率、消化率降低[9]。

大豆?jié)饪s蛋白(SPC)是由大豆制作而成的，品質(zhì)穩(wěn)定、氨基酸消化率高、抗?fàn)I養(yǎng)因子含量極低[10-11]。SPC除去豆腥味物質(zhì)及大豆的脹氣因子，粗蛋白質(zhì)含量一般為65%～70%[12-13]。由于去除豆粕中大部分的可溶性碳水化合物、粗纖維、抗?fàn)I養(yǎng)因子等影響水生動(dòng)物對(duì)植物蛋白質(zhì)源吸收利用的物質(zhì)，SPC在水產(chǎn)飼料行業(yè)中具有很好的應(yīng)用前景[12]。SPC雖然氨基酸含量豐富，但氨基酸平衡遠(yuǎn)不如魚粉，某些必需氨基酸含量仍然不足，尤其是蛋氨酸含量不到優(yōu)質(zhì)魚粉含量的一半[14-15]。在多種魚類的研究中發(fā)現(xiàn)，SPC雖可以替代25%～100%的魚粉[16-18]，但SPC部分或全部替代魚粉時(shí)結(jié)果差異較大[12,16,19]。在瓦式黃顙魚的研究中發(fā)現(xiàn)SPC替代魚粉對(duì)幼魚存活率的影響不顯著，但對(duì)生長(zhǎng)以及攝食產(chǎn)生了顯著影響[13]。本試驗(yàn)在前述研究的基礎(chǔ)上，通過在飼料中添加賴氨酸和蛋氨酸，保證必需氨基酸供給充足的前提下，探討SPC替代魚粉水平對(duì)黃顙魚生長(zhǎng)、飼料利用、消化酶和抗氧化酶活性的影響，從而為研制高效環(huán)保黃顙魚配合飼料提供科學(xué)的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料

以魚粉、豆粕和魷魚粉為蛋白質(zhì)源，魚油和大豆卵磷脂為脂肪源，面粉為糖源，配制成6組等氮等脂的飼料(粗蛋白質(zhì)45%，粗脂肪10%)。以飼料魚粉含量為50%的組為對(duì)照組，替代組飼料中SPC替代魚粉水平分別為10.0%、20.0%、30.0%、40.0%和60.0%，同時(shí)在替代組飼料中添加蛋氨酸和賴氨酸，使其蛋氨酸和賴氨酸含量與對(duì)照組飼料一致。試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)成分見表1，試驗(yàn)飼料的氨基酸組成見表2。飼料原料粉碎后過60目篩，按照配方表1稱取各種飼料原料，微量添加成分采取逐級(jí)擴(kuò)大法混合均勻，添加35%左右的水混勻后，壓制成粒徑為2～3 mm的顆粒飼料。自然風(fēng)干至含水量約10%，分組置于封口袋中并放于-20 ℃冰柜冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

續(xù)表1項(xiàng)目Items大豆?jié)饪s蛋白質(zhì)替代魚粉水平ReplacementleveloffishmealwithSPC/%01020304060維生素預(yù)混料Vitaminpremix2)1．501．501．501．501．501．50礦物質(zhì)預(yù)混料Mineralpremix2)1．501．501．501．501．501．50賴氨酸Lysine3)0．050．100．150．190．29蛋氨酸Methionine3)0．050．110．160．220．33氯化膽堿Cholinechloride0．300．300．300．300．300．30磷酸二氫鈣Ca(H2PO4)21．001．001．001．001．001．00纖維素Cellulose5．564．643．712．781．86合計(jì)Total100．00100．00100．00100．00100．00100．00營(yíng)養(yǎng)水平Nutrientlevels4)干物質(zhì)Drymatter89．8290．2690．1990．2689．8789．94粗蛋白質(zhì)Crudeprotein45．3946．0145．8345．7246．1346．13粗脂肪Crudelipid10．1010．0410．0410．0710．1610．27粗灰分Ash11．6311．8310．0710．139．939．24

1)大豆?jié)饪s蛋白采購(gòu)于益海(泰州)糧油工業(yè)有限公司。SPC was purchased fromYihai(Taizhou) grain and oil industry Co., Ltd.

2)維生素預(yù)混料和礦物質(zhì)預(yù)混料組成參考黃文文等[20]。Vitamin premix and mineral premix composition referred to Huang, et al[20].

3)賴氨酸和蛋氨酸為L(zhǎng)晶體形式，純度≥99%。Lysine and methionine wereL-crystal style, and purity≥99%.

4)營(yíng)養(yǎng)水平均為實(shí)測(cè)值。 Nutrient levels were all measured values.

表2 試驗(yàn)飼料的氨基酸組成(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1.2 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)所用黃顙魚魚苗購(gòu)自浙江省嘉興市，于寧波大學(xué)魚類營(yíng)養(yǎng)研究室淡水養(yǎng)殖基地養(yǎng)殖車間進(jìn)行投喂試驗(yàn)。試驗(yàn)前黃顙魚苗用商品飼料(寧波天邦股份有限公司，粗蛋白質(zhì)含量45%，粗脂肪含量10%)暫養(yǎng)2周，分組前停食24 h，挑選體格健壯、規(guī)格基本一致的個(gè)體540尾[初始體重約為(2.17±0.02) g]，每個(gè)300 L玻璃鋼養(yǎng)殖桶中隨機(jī)放養(yǎng)30尾，每組飼料隨機(jī)投喂3個(gè)養(yǎng)殖桶里的試驗(yàn)魚，即每組的3個(gè)重復(fù)。每天投喂2次，日投喂量為其體重的4%～6%，投喂時(shí)間分別為07:30和17:00，投喂后1 h內(nèi)觀察其攝食情況，養(yǎng)殖前期每隔1 d換水50%左右，養(yǎng)殖中后期每天換水量50%～100%。養(yǎng)殖期間每天檢查充氣和水溫情況，及時(shí)記錄死魚數(shù)量及重量，投喂周期為8周。每2周稱重、計(jì)數(shù)并以此次調(diào)整隨后2周飼料投喂量。試驗(yàn)期間，不間斷充氧以保證水體中含有足夠的溶解氧(>6.0 mg/L)，水溫為23.0～29.5 ℃，pH為7.5～8.0。

1.3 樣品采集與分析方法

投喂試驗(yàn)結(jié)束后，魚停食24 h，取樣前每桶單獨(dú)稱重并計(jì)數(shù)，計(jì)算增重率、特定生長(zhǎng)率、存活率、飼料效率及蛋白質(zhì)效率。每個(gè)試驗(yàn)桶隨機(jī)取3尾魚分別測(cè)出其體長(zhǎng)和體重，剝離內(nèi)臟團(tuán)和腸系膜脂肪稱重，用于計(jì)算臟體比、腸脂比和肥滿度；剝離肌肉(無皮膚的背部肌肉)置于封口袋，用于肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的分析。每桶隨機(jī)取4尾魚置于封口袋中，用于全魚常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的分析。每個(gè)試驗(yàn)桶另隨機(jī)取3尾魚，分別剝離肝臟、胃、前腸于1.5 mL離心管中，用于抗氧化酶及消化酶活性的檢測(cè)。用注射器抽取5～8尾魚的血液注入1.5 mL離心管中，于4 ℃下靜置過夜后5 000 r/min離心10 min，取上清液保存于-80 ℃?zhèn)溆?，用于血清中生化指?biāo)的分析。

飼料、肌肉及全魚常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分分析：水分含量測(cè)定采用105 ℃常壓干燥法；粗蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用蛋白質(zhì)分析儀(FP-528，美國(guó)LECO公司)；粗脂肪含量測(cè)定采用索氏抽提法；粗灰分含量測(cè)定采用550 ℃馬福爐灼燒法。飼料樣品中氨基酸含量采用高速氨基酸自動(dòng)分析儀(L-8900，日本HITACHI公司)進(jìn)行測(cè)定。

血清中生化指標(biāo)分析：總蛋白、白蛋白、球蛋白、總膽固醇和甘油三酯含量均由寧波大學(xué)附屬醫(yī)院使用全自動(dòng)生化分析儀(7600-110，日本HITACHI公司)測(cè)定。谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的相關(guān)試劑盒測(cè)定，相應(yīng)操作均參照說明書進(jìn)行。

肝臟抗氧化指標(biāo)分析：超氧化物歧化酶、過氧化氫酶活性及丙二醛含量均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的相關(guān)試劑盒測(cè)定，相應(yīng)操作均參照說明書進(jìn)行。

消化酶活性分析：胃蛋白酶以及胃、前腸和肝臟淀粉酶活性均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的相關(guān)試劑盒測(cè)定，相應(yīng)操作均參照說明書進(jìn)行。

1.4 計(jì)算公式

攝食率[feed intake,g/(g BW·d)]=攝入的
干物質(zhì)含量/[飼養(yǎng)天數(shù)×(終末體重+
初始體重)/2]；增重率(weight gain rate,WGR,%)=100×
(終末均重-初始均重)/初始均重；特定生長(zhǎng)率(specific growth rate,SGR,%/d)=
100×(ln終末體重-ln初始體重)/
飼養(yǎng)天數(shù)；蛋白質(zhì)效率(protein efficiency ratio,PER)=
(終末體重-初始體重)/蛋白質(zhì)攝入量；飼料效率(feed efficiency,FE)=(終末總重+
死亡總重-初始總重)/(投飼總量×
飼料干物質(zhì)含量)；肥滿度(condition factor,CF,g/cm3)=
100×體重/體長(zhǎng)3；腸脂比(intraperitoneal fat ratio,IPF,%)=
100×腸系膜脂肪重/體重；臟體比(viserosomatic index,VSI,%)=
100×內(nèi)臟團(tuán)重/體重；

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 17.0軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，當(dāng)處理之間有差異顯著時(shí)，進(jìn)行Duncan多重比較。以P<0.05作為差異顯著判斷標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。

2 結(jié) 果

2.1 SPC替代魚粉對(duì)黃顙魚生長(zhǎng)性能、飼料利用以及形態(tài)學(xué)指標(biāo)的影響

各組黃顙魚成活率均為100%。表3的結(jié)果表明，隨著飼料中SPC替代魚粉水平增加，攝食率、飼料效率和蛋白質(zhì)效率各組間無顯著差異(P>0.05)。增重率和特定生長(zhǎng)率隨SPC替代魚粉水平升高而降低，當(dāng)SPC替代魚粉水平不超過20%時(shí)，增重率和特定生長(zhǎng)率無顯著變化(P>0.05)，而當(dāng)飼料中SPC替代魚粉水平提高到30%以上時(shí)，這2個(gè)指標(biāo)顯著降低(P<0.05)，提高到60%時(shí)，增重率較其他替代水平顯著降低(P<0.05)。黃顙魚肥滿度、臟體比與腸脂比在各試驗(yàn)組間無顯著差異(P>0.05)，但均有隨SPC替代魚粉水平升高而下降的趨勢(shì)。

表3 大豆?jié)饪s蛋白替代魚粉對(duì)黃顙魚生長(zhǎng)性能、飼料利用以及形態(tài)學(xué)指標(biāo)的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)無字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

2.2 SPC替代魚粉對(duì)黃顙魚全魚和肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的影響

表4的結(jié)果表明，SPC替代魚粉水平對(duì)全魚干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)及灰分含量無顯著影響(P>0.05)，但對(duì)全魚粗脂肪含量有顯著影響(P<0.05)。SPC替代魚粉水平為10%時(shí)，全魚粗脂肪含量與對(duì)照組無顯著性差異(P>0.05)，當(dāng)SPC替代魚粉水平從10%升高到20%和30%時(shí)，全魚粗脂肪含量顯著降低(P<0.05)。SPC替代魚粉水平對(duì)黃顙魚肌肉干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)與粗脂肪含量影響不顯著(P>0.05)，但對(duì)肌肉灰分含量有顯著影響(P<0.05)。當(dāng)SPC替代魚粉水平為10%時(shí)，肌肉灰分含量與對(duì)照組無顯著差異(P>0.05)，當(dāng)SPC替代魚粉的水平由10%提高到20%以上時(shí)，肌肉粗灰分含量顯著下降(P<0.05)。

表4 大豆?jié)饪s蛋白替代魚粉對(duì)黃顙魚全魚和肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的影響

2.3 SPC替代魚粉對(duì)黃顙魚血清生化指標(biāo)的影響

表5的結(jié)果表明，血清中總蛋白、白蛋白、球蛋白和甘油三酯含量及谷草轉(zhuǎn)氨酶活性在各組間無顯著差異(P>0.05)。SPC替代魚粉水平對(duì)血清中葡萄糖、總膽固醇含量及谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性有顯著影響(P<0.05)。血清葡萄糖含量隨SPC替代魚粉水平的升高呈先升高后下降的趨勢(shì)，當(dāng)SPC替代魚粉水平由10%提高到30%時(shí)，血清葡萄糖含量顯著升高(P<0.05)，隨SPC替代魚粉水平由30%提高到40%以上時(shí)，血清葡萄糖含量顯著下降(P<0.05)，在SPC替代水平為30%時(shí)為最大值。隨SPC替代魚粉水平升高，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性總體呈上升的趨勢(shì)，血清總膽固醇含量總體呈下降趨勢(shì)。

表5 大豆?jié)饪s蛋白替代魚粉對(duì)黃顙魚血清生化指標(biāo)的影響

2.4 SPC替代魚粉對(duì)黃顙魚肝臟抗氧化酶活性的影響

表6的結(jié)果表明，隨SPC替代魚粉水平升高，肝臟超氧化物歧化酶、過氧化氫酶活性及丙二醛含量有顯著變化(P<0.05)。在SPC替代魚粉水平為30%時(shí)，肝臟超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性達(dá)到最大值，肝臟丙二醛含量達(dá)到最小值。當(dāng)SPC替代魚粉水平不低于20%時(shí)，肝臟超氧化物歧化酶活性升高，且顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，當(dāng)SPC替代魚粉水平在10%以上時(shí)，肝臟丙二醛含量顯著降低(P<0.05)。

表6 大豆?jié)饪s蛋白替代魚粉對(duì)黃顙魚肝臟抗氧化酶活性的影響

2.5 SPC替代魚粉對(duì)黃顙魚消化酶活性的影響

表7的結(jié)果表明，胃蛋白酶活性在各組間無顯著差異(P>0.05)，當(dāng)SPC替代魚粉水平為30%以下時(shí)，胃蛋白酶活性基本保持恒定，當(dāng)SPC替代魚粉水平在40%以上時(shí)，胃蛋白酶活性有下降趨勢(shì)。SPC替代魚粉水平對(duì)胃淀粉酶、前腸淀粉酶和肝臟淀粉酶活性有顯著影響(P<0.05)，當(dāng)SPC替代魚粉水平為10%和30%時(shí)，胃淀粉酶活性顯著高于其他替代水平(P<0.05)；前腸淀粉酶活性最小的SPC替代魚粉水平為10%；肝臟淀粉酶活性在SPC替代魚粉水平為40%時(shí)為到最小值，且顯著低于對(duì)照組和SPC替代魚粉水平為10%、20%時(shí)(P<0.05)。

表7 大豆?jié)饪s蛋白替代魚粉對(duì)黃顙魚消化酶活性的影響

3 討 論

3.1 SPC替代魚粉對(duì)黃顙魚生長(zhǎng)性能、飼料利用以及形態(tài)學(xué)指標(biāo)的影響

有研究發(fā)現(xiàn)，攝食以豆粕為主要蛋白質(zhì)源的飼料時(shí)，大西洋鮭(SalmosalarL.)[28]和虹鱒(Onchorynchusmykiss)[29]出現(xiàn)了腸炎等健康問題，Storebakken[30]在研究中發(fā)現(xiàn)大豆類蛋白質(zhì)源中非淀粉多糖會(huì)引起腸炎從而使脂肪吸收率下降。本試驗(yàn)中，當(dāng)SPC替代魚粉水平為10%～60%時(shí)，全魚粗脂肪含量隨SPC替代魚粉水平的增加而下降，黃顙魚肥滿度、臟體比和腸脂比的變化趨勢(shì)與其基本一致，可能是由于植物蛋白質(zhì)源對(duì)脂肪代謝的影響所致，此結(jié)果與劉興旺等[12]在大菱鲆和Nahashon等[31]在黑鯛(Acanthopagrusschlegelii)中的研究結(jié)果相似。

3.2 SPC替代魚粉對(duì)黃顙魚全魚及肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，SPC替代魚粉水平為10%～60%時(shí)，黃顙魚全魚粗脂肪含量隨著SPC替代魚粉水平升高呈下降的趨勢(shì)。這與Elangovan等[32]關(guān)于飼料中添加豆粕蛋白質(zhì)對(duì)全魚常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分以及Wang等[33]對(duì)于飼料中不同蛋白質(zhì)水平對(duì)黃顙魚中全魚常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分所得到的研究結(jié)果相似。推測(cè)出現(xiàn)本試驗(yàn)結(jié)果的原因可能是SPC中含有較多的非淀粉多糖，它會(huì)引起腸炎，導(dǎo)致脂肪吸收率下降，從而間接影響機(jī)體粗脂肪的含量[30]。肌肉灰分含量在SPC替代魚粉水平為10%～60%時(shí)，隨替代水平的增加呈下降趨勢(shì)，其他魚體和肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分無顯著變化，這與López等[34]的研究發(fā)現(xiàn)相似。

3.3 SPC替代魚粉對(duì)黃顙魚血清生化指標(biāo)的影響

動(dòng)物血液中的總蛋白與總膽固醇的含量會(huì)受到蛋白質(zhì)代謝、脂質(zhì)代謝和碳水化合物代謝的影響[35]，總膽固醇作為脂質(zhì)代謝的重要組成部分，與肝臟細(xì)胞發(fā)揮正常功能、機(jī)體脂質(zhì)正常代謝息息相關(guān)，總膽固醇含量的高低變化可以反映肝臟細(xì)胞功能狀態(tài)。本試驗(yàn)中總膽固醇含量隨SPC替代魚粉水平升高而下降，這與劉偉等[19]在中華鱘(Acipensersinensis)和Dias等[36]在歐洲海鱸(Barbodesaltus)發(fā)現(xiàn)血清中甘油三酯和總膽固醇含量隨SPC替代魚粉水平升高逐漸下降的結(jié)果一致。一般來講，動(dòng)物蛋白質(zhì)原料中含有較高的膽固醇，而植物蛋白質(zhì)原料中膽固醇含量很低[37]，飼料中膽固醇含量會(huì)影響?zhàn)B殖動(dòng)物血液膽固醇含量[23,38]。有研究報(bào)道，在狼鱸飼料中使用植物蛋白質(zhì)源替代魚粉，導(dǎo)致血清的總膽固醇含量降低。這可能是因?yàn)槟懼}排泄量增加，也有可能是由于膽固醇胃腸道吸收受到限制，或者是植物蛋白質(zhì)源替代使得飼料中膽固醇的含量不足[39]，大部分學(xué)者認(rèn)為植物蛋白質(zhì)源中含有的抗?fàn)I養(yǎng)因子等非蛋白質(zhì)組分使得其具有降血液膽固醇含量的作用[40-41]。但有關(guān)植物蛋白質(zhì)源中抗?fàn)I養(yǎng)因子是否會(huì)干擾魚類膽固醇代謝，目前還沒有定論。葡萄糖是魚體營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)之一，也是反映動(dòng)物糖代謝和全身組織細(xì)胞功能狀態(tài)以及內(nèi)分泌機(jī)能的一個(gè)重要指標(biāo)。在一定的閾值內(nèi)，血液葡萄糖含量越高，表明魚類攝食越積極，健康狀況良好。但當(dāng)葡萄糖含量超過一定閾值時(shí)，會(huì)造成機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)生理脅迫，損害魚體健康[42]。在本試驗(yàn)中，當(dāng)SPC替代魚粉水平為20%和30%時(shí)血清葡萄糖含量顯著高于對(duì)照組，而在SPC替代魚粉水平超過30%時(shí)，增重率和特定生長(zhǎng)率也顯著低于對(duì)照組，說明SPC替代魚粉水平超過30%時(shí)，SPC會(huì)通過影響魚體的糖脂代謝進(jìn)而影響魚的生長(zhǎng)。

谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶是參與體內(nèi)氨基酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖類代謝的重要酶，谷草轉(zhuǎn)氨酶主要與草酰乙酸與谷氨酸間的轉(zhuǎn)氨反應(yīng)有關(guān)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶則主要參與丙酮酸和谷氨酸之間的轉(zhuǎn)氨作用[43]。谷丙轉(zhuǎn)氨酶正常情況下主要存在于肝細(xì)胞中，而谷草轉(zhuǎn)氨酶主要存在于肝細(xì)胞線粒體，它們?cè)谘逯械幕钚院艿?，只有在肝功能發(fā)生障礙時(shí)才會(huì)大量進(jìn)入血液，使血清酶活性增加[44]。血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性可作為反映肝功能的重要指標(biāo)。在本試驗(yàn)中，當(dāng)SPC替代魚粉水平不超過40%時(shí)，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性與對(duì)照組間差異不顯著，但當(dāng)SPC替代魚粉水平為60%時(shí)，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性顯著高于對(duì)照組。這一結(jié)果表明當(dāng)SPC替代魚粉水平不超過40%時(shí)，未造成魚體肝臟損傷，這可能是由于SPC中含有的抗?fàn)I養(yǎng)因子含量極低，從而減小了對(duì)肝功能的影響。有研究發(fā)現(xiàn)，添加過多的豆粕會(huì)導(dǎo)致軍曹魚肝臟受損，引發(fā)功能性障礙[45]。植物蛋白質(zhì)源中的抗?fàn)I養(yǎng)因子可能是造成免疫指標(biāo)變化的主要原因[46]。當(dāng)SPC替代魚粉水平為60%時(shí)可能是因?yàn)楦咚降腟PC替代魚粉使得氨基酸代謝增強(qiáng)，產(chǎn)生更多的代謝廢物，造成肝臟的負(fù)擔(dān)，從而導(dǎo)致血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的上升。關(guān)于這方面的原因還有待進(jìn)一步的探究。

3.4 SPC替代魚粉對(duì)黃顙魚抗氧化酶活性的影響

超氧化物歧化酶和過氧化氫酶是生物防御體系中的關(guān)鍵酶，分別可以清除生物體內(nèi)的超氧陰離子、過氧化氫，減少自由基對(duì)機(jī)體的危害，從而反映了魚體的抗應(yīng)激能力，丙二醛是機(jī)體內(nèi)自由基作用于脂肪發(fā)生過氧化反應(yīng)的氧化終產(chǎn)物，具有細(xì)胞毒性[47]，其含量可反映機(jī)體中脂質(zhì)過氧化程度以及細(xì)胞的損傷程度[48]。本試驗(yàn)中，SPC替代魚粉水平對(duì)肝臟超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性以及丙二醛含量均有顯著影響。當(dāng)SPC替代魚粉水平不低于20%時(shí)，肝臟超氧化物歧化酶活性顯著高于對(duì)照組，肝臟過氧化氫酶活性在SPC替代魚粉水平為20%和30%時(shí)顯著高于對(duì)照組，當(dāng)SPC替代魚粉水平在10%以上時(shí)，肝臟丙二醛含量顯著降低。以上結(jié)果說明，SPC替代魚粉水平為20%和30%時(shí)顯著提高了魚體抗氧化能力。這可能與SPC中含有大豆異黃酮有關(guān)，大豆異黃酮具有抗氧化活性以及較強(qiáng)的超氧陰離子自由基清除作用[49]。

3.5 SPC替代魚粉對(duì)黃顙魚消化酶活性的影響

消化酶是檢測(cè)魚類的消化能力及飼料利用的關(guān)鍵酶，同種魚類中不同部位的消化酶活性不同，其活性與食性有關(guān)[50]。淀粉酶的作用是催化淀粉水解，使得碳水化合物降解為糖，提高魚類對(duì)碳水化合物的利用率[51]。本試驗(yàn)中，腸道淀粉酶活性明顯高于肝臟淀粉酶活性，這與吳婷婷[52]與Hidalgo等[53]在其他魚類中的研究結(jié)果一致。黃顙魚屬于肉食性魚類，其淀粉酶生成的主要部位不是肝臟[54]。當(dāng)SPC替代魚粉水平為30%～60%時(shí)，肝臟淀粉酶活性低于對(duì)照組。楊英豪[9]通過組織切片觀察發(fā)現(xiàn)，隨著SPC替代魚粉水平的提高，伴隨有腸炎的發(fā)生，飼料中SPC對(duì)瓦氏黃顙魚肝臟組織結(jié)構(gòu)的破壞程度逐漸加大。所以推測(cè)在本試驗(yàn)中這可能是由于飼料中SPC替代魚粉水平的提高，導(dǎo)致魚體肝臟組織結(jié)構(gòu)受到一定程度的破壞。試驗(yàn)組前腸淀粉酶活性均低于對(duì)照組，且在SPC替代魚粉水平為10%時(shí)出現(xiàn)顯著差異，這可能是因?yàn)轱暳现蠸PC損害了后腸結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，抑制了酶活性。當(dāng)SPC替代魚粉水平低于30%時(shí)，胃蛋白酶活性基本保持不變，在30%～60%時(shí)，胃蛋白酶活性下降，Lin等[55]在羅非魚和Xu等[56]在史氏鱘中的研究顯示，隨豆粕替代魚粉水平的升高蛋白酶活性降低，與本試驗(yàn)中的結(jié)果相似。這說明黃顙魚的胃對(duì)SPC比較敏感，當(dāng)SPC替代魚粉水平低于30%時(shí)，黃顙魚胃消化吸收能力受到的影響較小。今后評(píng)估植物蛋白質(zhì)源替代魚粉時(shí)，要考慮其對(duì)魚體肝臟胃腸道等的影響機(jī)制。

4 結(jié) 論

SPC是優(yōu)質(zhì)的植物蛋白質(zhì)源，SPC替代魚粉水平不超過20%(對(duì)應(yīng)飼料中SPC的添加量為10.72%)時(shí)，黃顙魚生長(zhǎng)性能、飼料利用、形態(tài)學(xué)指標(biāo)、體成分、消化酶活性、總膽固醇含量變化不顯著，抗氧化能力和健康狀況良好，推薦在實(shí)際生產(chǎn)中采用該水平替代魚粉。

[1] 白東清,吳旋,郭永軍,等.長(zhǎng)期投喂黃芪多糖對(duì)黃顙魚抗氧化及非特異性免疫指標(biāo)的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2011,23(9):1622-1630.

[2] 文遠(yuǎn)紅,曹俊明,黃燕華,等.黃顙魚營(yíng)養(yǎng)需求研究進(jìn)展[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,38(18):108-111.

[3] ZHENG K K,ZHU X M,DONG H,et al.Effects of dietary lipid levels on growth,survival and lipid metabolism during early ontogeny ofPelteobagrusvachellilarvae.[J].Aquaculture,2010,299(1/2/3/4):121-127.

[4] DAVIS D A,ARNOLD C R,MCCALLUM I.Nutritional value of feed peas (Pisum sativum) in practical diet formulations forLitopenaeusvannamei[J].Aquaculture Nutrition,2015,8(2):87-94.

[5] CHENG Z Y,AI Q H,MAI K S,et al.Effects of dietary canola meal on growth performance,digestion and metabolism of Japanese seabass,Lateolabraxjaponicus[J].Aquaculture,2010,305(1/2/3/4):102-108.

[6] LUO L,XUE M,WU X,et al.Partial or total replacement of fishmeal by solvent-extracted cottonseed meal in diets for juvenile rainbow trout (Oncorhynchusmykiss)[J].Aquaculture Nutrition,2010,12(6):418-424.

[7] ROBINSON E H,TIERSCH T R.Effects of long-term feeding of cottonseed meal on growth,testis development,and sperm motility of male channel catfishIctaluruspunctatusbroodfish[J].Journal of the World Aquaculture Society,1995,26(4):426-431.

[8] CHENG Z J,HARDY R W.Apparent digestibility coefficients and nutritional value of cottonseed meal for rainbow trout (Oncorhynchusmykiss)[J].Aquaculture,2002,212(1/2/3/4):361-372.

[9] 楊英豪.大豆?jié)饪s蛋白對(duì)瓦氏黃顙魚幼魚攝食、生長(zhǎng)、消化和蛋白質(zhì)代謝的影響[D].碩士學(xué)位論文.青島:中國(guó)海洋大學(xué),2011.

[10] 李二超,陳立僑,彭士明,等.大豆?jié)饪s蛋白作為水產(chǎn)飼料蛋白源的評(píng)價(jià)[J].水產(chǎn)養(yǎng)殖,2005,26(1):18-20.

[11] LUSAS E W,RIAZ M N.Soy protein products:processing and use[J].The Journal of Nutrition,1995,125(3 S):573S-580S.

[12] 劉興旺,艾慶輝,麥康森,等.大豆?jié)饪s蛋白替代魚粉對(duì)大菱鲆攝食、生長(zhǎng)及體組成的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),2014,38(1):91-98.

[13] 楊英豪.大豆?jié)饪s蛋白調(diào)控瓦氏黃顙魚幼魚攝食和蛋白質(zhì)代謝的研究[D].博士學(xué)位論文.青島:中國(guó)海洋大學(xué),2014.

[14] STOREBAKKEN T,REFSTIE S,RUYTER B.Soy products as fat and protein sources in fish feeds for intensive aquaculture[J].Soy in Animal Nutrition,2000:127-170.

[15] 李林桂,肖偉偉,葛夢(mèng)蘭.大豆?jié)饪s蛋白的生產(chǎn)工藝、營(yíng)養(yǎng)組成及在動(dòng)物日糧中的應(yīng)用[J].飼料工業(yè),2015,36(S1):29-32.

[16] DENG J M,MAI K S,AI Q H,et al.Effects of replacing fish meal with soy protein concentrate on feed intake and growth of juvenile Japanese flounder,Paralichthysolivaceus[J].Aquaculture,2006,258(1/2/3/4):503-513.

[17] USTAOGLU S,RENNERT B.The apparent nutrient digestibility of diets containing fish meal or isolated soy protein in sterlet (Acipenserruthenus)[J].International Review of Hydrobiology,2002,87(5/6):577-584.

[18] ROMARHEIM O H,SKREDE A,GAO Y L,et al.Comparison of white flakes and toasted soybean meal partly replacing fish meal as protein source in extruded feed for rainbow trout (Oncorhynchusmykiss)[J].Aquaculture,2006,256(1/2/3/4):354-364.

[19] 劉偉,文華,蔣明,等.大豆?jié)饪s蛋白對(duì)中華鱘幼魚生長(zhǎng)、血脂和體成分的影響研究[J].淡水漁業(yè),2010,40(4):27-32.

[20] 黃文文,李弋,周歧存.不同品質(zhì)魚粉對(duì)黃顙魚幼魚生長(zhǎng)性能、飼料利用及肝臟抗氧化能力的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2015,27(12):3744-3753.

[21] ARAGAO C,LEC C,DIAS J,et al.Soy protein concentrate as a protein source for Senegalese sole (SoleasenegalensisKaup 1858) diets:effects on growth and amino acid metabolism of postlarvae.[J].Aquaculture Research,2004,34(15):1443-1452.

[22] SALZE G,MCLEAN E,BATTLE P R,et al.Use of soy protein concentrate and novel ingredients in the total elimination of fish meal and fish oil in diets for juvenile cobia,Rachycentroncanadum[J].Aquaculture,2010,298(3/4):294-299.

[23] KAUSHIK S J,CRAVEDI J P,LALLES J P,et al.Partial or total replacement of fish meal by soybean protein on growth,protein utilization,potential estrogenic or antigenic effects,cholesterolemia and flesh quality in rainbow trout,Oncorhynchusmykiss[J].Aquaculture,1995,133(3/4):257-274.

[24] KISSINGER K R,GARCA-ORTEGA A,TRUSHENSKI J T.Partial fish meal replacement by soy protein concentrate,squid and algal meals in low fish-oil diets containingSchizochytriumlimacinum,for longfin yellowtailSeriolarivoliana[J].Aquaculture,2016,452:37-44.

[25] KISSIL G W,LUPATSCH I,HIGGS D A,et al.Dietary substitution of soy and rapeseed protein concentrates for fish meal,and their effects on growth and nutrient utilization in gilthead seabreamSparusaurataL[J].Aquaculture Research,2000,31(7):595-601.

[26] AI Q H,XIE X J.Effects of replacement of fish meal by soybean meal and supplementation of methionine in fish meal/soybean meal-based diets on growth performance of the southern catfishSilurusmeridionalis[J].Journal of the World Aquaculture Society,2010,36(4):498-507.

[28] BAEVERFJORD G,KROGDAHL A.Development and regression of soybean meal induced enteritis in Atlantic salmon,SalmosalarL.,distal intestine:a comparison with the intestines of fasted fish[J].Journal of Fish Diseases,2010,19(5):375-387.

[29] BUREAU D P,HARRIS A M,CHO C Y.The effects of purified alcohol extracts from soy products on feed intake and growth of chinook salmon (Oncorhynchustshawytscha) and rainbow trout (Oncorhynchusmykiss)[J].Aquaculture,1998,161(1/2/3/4):27-43.

[30] STOREBAKKEN T,SHEARER K D,ROEM A J.Availability of protein,phosphorus and other elements in fish meal,soy-protein concentrate and phytase-treated soy-protein-concentrate-based diets to Atlantic salmon,Salmosalar[J].Aquaculture,1998,161(1/2/3/4):365-379.

[31] NAHASHON S N,KILONZO-NTHENGE A K.Advances in soybean and soybean by-products in monogastric nutrition and health[M]//EL-SHEMY H.Soybean and nutrition.[S.l.]:InTech.,2011.

[32] ELANGOVAN A,SHIM K F.The influence of replacing fish meal partially in the diet with soybean meal on growth and body composition of juvenile tin foil barb (Barbodesaltus)[J].Aquaculture,2000,189(1/2):133-144.

[33] WANG C F,XIE S Q,ZHU X M,et al.Effects of age and dietary protein level on digestive enzyme activity and gene expression ofPelteobagrusfulvidracolarvae[J].Aquaculture,2006,254(1/2/3/4):554-562.

[35] ANDERSEN D E,REID S D,MOON T W,et al.Metabolic effects associated with chronically elevated cortisol in rainbow trout (Oncorhynchusmykiss)[J].Canadian Journal of Fisheries & Aquatic Sciences,1993,48(9):1811-1817.

[36] DIAS J,ALVAREZ M J,ARZEL J,et al.Dietary protein source affects lipid metabolism in the European seabass (Dicentrarchuslabrax)[J].Comparative Biochemistry and Physiology Part A:Molecular & Integrative Physiology,2005,142(1):19-31.

[37] CHENG Z J,HARDY R W.Protein and lipid sources affect cholesterol concentrations of juvenile Pacific white shrimp,Litopenaeusvannamei(Boone)[J].Journal of Animal Science,2004,82(4):1136-1145.

[38] GOULDING N J,GIBNEY M J,TAYLOR T G,et al.Reversible hypercholesterolaemia produced by cholesterol-free fish meal protein diets[J].Atherosclerosis,1983,49(2):127-137.

[39] KAUSHIK S J,COVS D,DUTTO G,et al.Almost total replacement of fish meal by plant protein sources in the diet of a marine teleost,the European seabass,Dicentrarchuslabrax[J].Aquaculture,2004,230(1/2/3/4):391-404.

[40] HOSSAIN M A,FOCKEN U,BECKER K.Antinutritive effects of galactomannan-rich endosperm of Sesbania (Sesbaniaaculeata) seeds on growth and feed utilization in tilapia,Oreochromisniloticus[J].Aquaculture Research,2015,34(13):1171-1179.

[41] HANSEN A C,ROSENLUND G,KARLSEN ?,et al.Total replacement of fish meal with plant proteins in diets for Atlantic cod (GadusmorhuaL.) Ⅰ-Effects on growth and protein retention[J].Aquaculture,2007,272(1/2/3/4):599-611.

[42] 林小植,羅毅平,謝小軍.飼料碳水化合物水平對(duì)南方鲇幼魚餐后糖酵解酶活性及血糖濃度的影響[J].水生生物學(xué)報(bào),2006,30(3):304-310.

[43] 成艷波,張?jiān)滦?董智勇,等.小麥蛋白替代魚粉及大豆蛋白對(duì)日本黃姑魚(Nibeajaponica)和黑鯛(Sparusmacrocephalus)血清生化指標(biāo)及肝臟抗氧化指標(biāo)的影響[J].漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展,2017,38(3):106-114.

[44] 馮建,王萍,何嬌嬌,等.大豆?jié)饪s蛋白替代魚粉對(duì)大黃魚幼魚生長(zhǎng)、體成分、血清生化指標(biāo)及肝組織學(xué)的影響[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué),2017,24(2):268-277.

[45] 王廣軍,吳銳全,謝駿,等.軍曹魚飼料中用豆粕代替魚粉的研究[J].大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào),2005,20(4):304-307.

[46] 于曉彤.不同蛋白源對(duì)草魚攝食反應(yīng)、免疫應(yīng)答及肉質(zhì)的影響研究[D].碩士學(xué)位論文.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2016.

[47] 付晶晶,黃燕華,曹俊明,等.五種植物蛋白源替代魚粉對(duì)花鱸血清生化指標(biāo)、轉(zhuǎn)氨酶活性及抗氧化應(yīng)激參數(shù)的影響[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,54(20):5087-5091,5095.

[48] 周顯青,梁洪蒙.擁擠脅迫下小鼠肝臟脂質(zhì)過氧化物含量和抗氧化物酶活性的變化[J].動(dòng)物學(xué)研究,2003,24(3):238-240.

[49] 石冬冬.大豆異黃酮的提取純化工藝及其抗氧化性的研究[D].碩士學(xué)位論文.哈爾濱:東北農(nóng)業(yè)大學(xué),2002.

[50] 錢曦,王桂芹,周洪琪,等.飼料蛋白水平及豆粕替代魚粉比例對(duì)翹嘴紅鲌消化酶活性的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2007,19(2):182-187.

[51] 吳莉芳,秦貴信,趙元,等.飼料中去皮豆粕替代魚粉比例對(duì)草魚消化酶活力的影響[J].中國(guó)畜牧雜志,2010,46(1):23-27.

[52] 吳婷婷,朱曉鳴.鱖魚、青魚、草魚、鯉、鯽、鰱消化酶活性的研究[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué),1994,1(2):10-17.

[53] HIDALGO M C,UREA E,SANZ A.Comparative study of digestive enzymes in fish with different nutritional habits.Proteolytic and amylase activities[J].Aquaculture,1999,170(3/4):267-283.

[54] AGRAWAL V P,SASTRY K V,KAUSHAB S K.Digestive enzymes of three teleost fishes[J].Acta Physiologica Academiae Scientiarum Hungaricae,1975,46(2):93-98.

[55] LIN S M,LUO L.Effects of different levels of soybean meal inclusion in replacement for fish meal on growth,digestive enzymes and transaminase activities in practical diets for juvenile tilapia,Oreochromisniloticus×O.aureus[J].Animal Feed Science and Technology,2011,168(1/2):80-87.

[56] XU Q Y,WANG C A,ZHAO Z G,et al.Effects of replacement of fish meal by soy protein isolate on the growth,digestive enzyme activity and serum biochemical parameters for juvenile Amur sturgeon (Acipenserschrenckii)[J].Asian-Australasian Journal of Animal Sciences,2012,25(11):1588-1594.

*Corresponding author, professor, E-mail: zhouqicun@nbu.edu.cn