李楠楠　王璐

牛血清白蛋白就是我們常說的BSA，相對(duì)分子質(zhì)量為10的4次方這個(gè)級(jí)別，它不是一定的，是多聚物，在做PCR的時(shí)候會(huì)用到它。本文把鐵氰化錳修飾在玻碳電極表面，首次研究了牛血清蛋白在修飾電極表面的電化學(xué)行為。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑

牛血清蛋白，無水乙醇，氫氧化鈉，氯化鉀等。

1.2 儀器

LK98BⅡ微機(jī)電化學(xué)分析系統(tǒng)，Al204i型電子天平，PHS—3B型PH計(jì)，KQ-400KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器，微電腦微波化學(xué)反應(yīng)器LWMC-201 ，二兩裝高速中藥粉碎機(jī)，PHS-3B型pH計(jì)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 溶液的配置

0.05moL/L 磷酸緩沖溶液（PBS）由1.0moL/L NaCl+0.01mo/LKCl+0.05moL/L磷酸氫二鈉+0.004moL/L磷酸二氫鉀組成；0.6moL/L鐵氰化錳修飾劑由0.6moL/L鐵氰化鉀和0.6moL/L硫酸錳組成，由PBS緩沖溶液定容；取10mg牛血清蛋白于50mL燒杯中、取NaCl1.46g于50mL燒杯中、取36%～38%的鹽酸9.27mL于50mL燒杯中，分別加少量去離子水稀釋后再分別轉(zhuǎn)移至100mL、50mL、50mL容量瓶中用去離子水定容至刻度，制成牛血清蛋白、0.5moL/L NaCl、6.0moL/L HCl溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 修飾時(shí)間的影響

取已配制好的鐵氰化錳修飾劑溶液50mL于小燒杯中，將清洗、晾干好的三電極體系置于燒杯中，在掃描速度為300mv/s的條件下，富集電位（+2v，-2v）的區(qū)間內(nèi)，循環(huán)掃描一定時(shí)間修飾電極，發(fā)現(xiàn)隨著修飾時(shí)間的增加電極催化活性變強(qiáng)，修飾達(dá)60min后膜催化活性增加不明顯，綜合考慮工作效率等因素，最后確定修飾時(shí)間為60min。

2.2 pH值的影響

分別取已配制好的0.5mol/LNaCl溶液7mL和牛血清蛋白溶液4mL（即0.008g/L）于9個(gè)50mL的小燒杯中，各滴加HCl溶液并用pH計(jì)調(diào)節(jié)溶液pH值分別為0～8。在電位-2.0V～+2.0V內(nèi)，掃速300mv/s的條件下，分別進(jìn)行線性伏安掃描。

結(jié)果表明，隨著pH值的增大峰電位變化不大，但是峰電流隨著隨著pH值的減小而增大，當(dāng)pH大于6時(shí)，還原峰電流無明顯變化。由于牛血清蛋白氧化峰電流在pH較低時(shí)較穩(wěn)定，且還原峰峰形最好，故選擇在HCl為0.6moL/L（即pH=0）環(huán)境下進(jìn)行測(cè)試。綜上所述，測(cè)定體系確定為0.07moL/L NaCl-0.6moL/L HCl。

2.3 富集電位的影響

取已配制好的6mol/LHCl溶液5mL和0.5mol/LNaCl溶液7mL于50mL的小燒杯中，加入牛血清蛋白溶液4mL進(jìn)行循環(huán)伏安掃描，考查了不同的富集電位（+2.0V～-2.0V）對(duì)峰電流的影響，數(shù)據(jù)如表1所示。

結(jié)果表明不同的富集電位對(duì)峰電流有影響。電位區(qū)間在（-2.0v，+2.0v）內(nèi)的峰電流最大，為最佳富集電位范圍。

2.4 牛血清在鐵氰化錳修飾電極上的電化學(xué)行為

取已配制好的6mol/LHCl溶液5mL和0.5mol/LNaCl溶液7mL于50mL的小燒杯中，加入牛血清蛋白溶液4mL（即0.008g/L），在-2.0V～+2.0V內(nèi)，掃描速度為300mV/s的條件下分別以裸玻碳電極和修飾電極對(duì)0.008g/L牛血清蛋白進(jìn)行循環(huán)掃描，結(jié)果如圖1所示。

由圖1曲線a可知，在電位窗口+2.0～-2.0V內(nèi)無明顯還原峰出現(xiàn)，表明牛血清蛋白在裸玻碳電極上不能直接發(fā)生還原反應(yīng)。而在鐵氰化錳修飾電極上牛血清蛋白在+1V～-0.5V處出現(xiàn)了還原峰，反向掃描時(shí)沒有觀察到相應(yīng)的氧化峰（曲線b）。這表明鐵氰化錳對(duì)牛血清蛋白的還原反應(yīng)具有良好的催化作用，但該反應(yīng)為不可逆過程。

作者單位：1.長(zhǎng)治市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)中心；

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