韓 洋 任建強(qiáng)* 盛宇偉 潘 炯

（1 南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江西 南昌 330006；2 上海市第一人民醫(yī)院寶山分院，上海 200940）

根據(jù)2015年世界衛(wèi)生組織報道，乳腺癌已經(jīng)成為近年來全球女性因惡性腫瘤死亡的主要原因[1]。在過去的30年里，從改善癌癥早期檢測的乳腺鉬靶篩查到乳腺癌患者內(nèi)分泌治療和全身化療，再到現(xiàn)在基于疾病生物標(biāo)志物分型的目標(biāo)激素受體和HER2/neu致癌基因信號通路藥物的發(fā)展，使人們對乳腺癌疾病的認(rèn)識有了很大的進(jìn)步，使乳腺癌的治療成為一個更精準(zhǔn)的科學(xué)[2]。凋亡是細(xì)胞對環(huán)境的生理性病理性刺激信號和環(huán)境條件的變化或緩和性損傷產(chǎn)生的有序變化應(yīng)答的死亡過程。細(xì)胞凋亡首先要通過接受凋亡信號凋亡使調(diào)控分子間產(chǎn)生相互作用以激活蛋白水解酶（Caspase）從而發(fā)生凋亡蛋白酶的層疊級聯(lián)反應(yīng)，發(fā)生不可逆的凋亡。如今對細(xì)胞凋亡過程中信號傳遞系統(tǒng)有兩種認(rèn)識，包括細(xì)胞凋亡的膜受體通路，細(xì)胞色素C釋放和Caspases激活的生物化學(xué)途徑[3]。近年來乳腺癌的基因治療已經(jīng)成為了乳腺癌研究的熱點(diǎn)，而對于細(xì)胞凋亡的研究對于乳腺癌發(fā)生機(jī)制和新的臨床治療方法具有重大意義。Bcl2L12作為Bcl-2蛋白家族的一員在許多腫瘤疾病中發(fā)現(xiàn)了大量表達(dá)。Bcl2L12作為一種抗凋亡因子有可能成為一個新的乳腺癌預(yù)后標(biāo)志物，本文將對Bcl2L12在乳腺癌研究中的進(jìn)展作一綜述。

1 Bcl-2蛋白家族

Bcl-2蛋白家族，按功能可分為兩類，一類具有抑制凋亡的作用，另一類具有促進(jìn)凋亡的作用。多數(shù)成員間有兩個結(jié)構(gòu)同源區(qū)域，在介導(dǎo)成員之間的二聚體化過程中起重要作用。Bcl-2成員之間的二聚體化是成員之間功能實(shí)現(xiàn)或功能調(diào)節(jié)的重要形式。它在不同的細(xì)胞類型可以定位于線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以及核膜上，并通過阻止線粒體細(xì)胞色素C的釋放而發(fā)揮抗凋亡作用。此外，Bcl-2具有保護(hù)細(xì)胞的功能，Bcl-2的過度表達(dá)可引起細(xì)胞核谷胱苷肽（GSH）的積聚，導(dǎo)致核內(nèi)氧化還原平衡的改變，從而降低了Caspase的活性。由于其在調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡、腫瘤發(fā)生和對抗癌治療的細(xì)胞反應(yīng)中的重要性，在過去的20年中人們對其進(jìn)行了深入的研究。Bcl-2蛋白家族單獨(dú)控制細(xì)胞生存的臨界點(diǎn)，從而影響宿主和病原體的相互作用，調(diào)節(jié)腫瘤發(fā)生和發(fā)展[4]。在人類腫瘤細(xì)胞中，Bcl-2蛋白家族的表達(dá)通常發(fā)生改變，并通過抑制細(xì)胞程序性死亡和延長腫瘤細(xì)胞的壽命來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散。由于化療藥物通過細(xì)胞毒性作用誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，因此Bcl-2蛋白家族成員激活的相對水平和狀態(tài)將決定大多數(shù)化療藥物的最終療效[5]。關(guān)于Bcl-2蛋白家族抗凋亡的機(jī)制有多種說法，在大多數(shù)細(xì)胞凋亡刺激后，促凋亡的Bcl-2蛋白家族成員Bax和Bak可使線粒體外膜具有通透性，這個事件被稱為“線粒體外膜通透性（MOMP）”。MOMP可通過釋放線粒體蛋白（包括激活半胱天冬酶的細(xì)胞色素C），而導(dǎo)致細(xì)胞的快速死亡。然而，即使在沒有半胱天冬酶活性的情況下，一旦發(fā)生MOMP，細(xì)胞通常就會死亡，最有可能是由于漸進(jìn)性的線粒體功能障礙所致。在癌癥當(dāng)中，抑制細(xì)胞凋亡能促進(jìn)腫瘤發(fā)生和阻礙抗癌治療的效果。Bcl-2蛋白家族成員上調(diào)來防止MOMP而產(chǎn)生凋亡抑制作用，然而Bcl-2蛋白家族是如何相互作用啟動MOMP機(jī)制仍然存在爭議[6-7]。近年來的組織學(xué)和生物學(xué)研究建議重新考慮在程序性細(xì)胞死亡中公認(rèn)的家族和家族之間的相互作用的原則。雖然Bcl-2蛋白家族之間的相互作用揭示了這些蛋白是如何調(diào)控的，但是他們共同激活Caspase機(jī)制的假說仍然讓人難以捉摸[3]。

2 Bcl2L12

Bcl2L12是一種編碼富含脯氨酸的Bcl-2蛋白質(zhì)基因，其富含脯氨酸的位點(diǎn)具有調(diào)節(jié)SH3（Src同源區(qū)3）酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域致癌潛力的作用。這種新的基因位于染色體19q13.3，位于IRF3和PRMT1/hrmt1l2基因之間，靠近RRas基因。Bcl2L12由七個編碼外顯子和六個內(nèi)含子組成，跨越8.8 KB的基因組區(qū)域。所有的外顯子—內(nèi)含子剪接位點(diǎn)都符合真核剪接位點(diǎn)的序列一致性。BCL2L12蛋白由334個氨基酸組成，計算分子質(zhì)量為36.8kDa，等電點(diǎn)為9.45。Bcl2L12蛋白質(zhì)包含一個BH2同源域以及類 BH3結(jié)合區(qū)域，一個類似于TC21蛋白質(zhì)的脯氨酸區(qū)域和五個共識PXXP四肽序列，包含2個間接體，包括經(jīng)典轉(zhuǎn)錄體Bcl2L12和轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體Bcl2L12 A[8-9]。在細(xì)胞質(zhì)中，Bcl2L12蛋白作為一種抗凋亡因子抑制Caspase3（半胱氨酸蛋白酶3）和Caspase7（半胱氨酸蛋白酶7）阻斷線粒體后的凋亡信號通路，起到抗凋亡作用。在細(xì)胞核中，Bcl2L12蛋白與p53蛋白結(jié)合，防止其與目標(biāo)基因的結(jié)合促進(jìn)細(xì)胞凋亡，從而發(fā)揮抗凋亡作用。

2.1 Bcl2L12在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義：雖然關(guān)于Bcl2L12在乳腺癌的表達(dá)及其臨床意義的研究較少，但其作為一種新的乳腺癌治療的基因靶點(diǎn)，具有重要意義。Tzovaras等[10]研究發(fā)現(xiàn)，與正常乳腺組織的樣本相比，乳腺癌組織樣本的Bcl2L12 mRNA表達(dá)減少（P=0.012）。Bcl2L12表達(dá)與TNM分期（P=00.009），轉(zhuǎn)移潛能（P=0.012），腫瘤大?。≒=0.04）和年齡（P=0.024）之間存在明顯的關(guān)系。此外，kaplan meier生存曲線和單變量分析表明Bcl2L12的表達(dá)與更長的無病生存期（DFS）有關(guān)，而COX多變量分析顯示出Bcl2L12的獨(dú)立的預(yù)后價值。Talieri等[11]研究發(fā)現(xiàn)，Bcl2L12陽性的乳房癌主要見于較低的臨床分期（Ⅰ/Ⅱ）或病理分級（Ⅰ/Ⅱ）（分別P=0.02或P=0.04）。COX回歸分析顯示，在單變量和多變量分析中Bcl2L12的表達(dá)與無病生存期（DFS）和總生存期（OS）呈正相關(guān)（P=0.021，P=0.029，P=0.032，P=0.044）中。kaplan meier生存曲線表明Bcl2L12陽性的腫瘤患者的無病生存期（DFS）和總生存期（OS）也大大延長（P=0.002，P＜0.001）。Thomadaki等[12]研究發(fā)現(xiàn)，患者年齡組＜45歲或＞55歲以及在雌激素受體（ER）陽性患者和Bcl2L12陽性的乳腺癌患者中發(fā)現(xiàn)有Bcl2基因的過表達(dá)。此外，Bcl-2或Bcl2L12陰性患者的復(fù)發(fā)率或病死率將近是Bcl-2或Bcl2L12陽性乳腺癌患者的4倍。以上研究均顯示了Bcl2L12的高表達(dá)可以使患者獲得良好預(yù)后、更長的無病生存期和總生存期。然而，Chien等[13]研究發(fā)現(xiàn)，Bcl2L12mRNA的高表達(dá)與高分期乳腺癌和三陰性乳腺癌亞型有關(guān)。此外，Bcl2L12及其變體之間的相互作用可能與非三陰性乳腺癌的大量淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。顯然，這與前面正常組織中Bcl2L12mRNA高表達(dá)的研究是相互矛盾的。因為關(guān)于Bcl2L12的研究較少，我們尚未檢索出其他Bcl2l12表達(dá)與乳腺癌患者預(yù)后相關(guān)的報道，需要進(jìn)一步研究以明確Bcl2L12表達(dá)與乳腺癌患者預(yù)后之間的關(guān)系。

2.2 Bcl2L12與乳腺癌的化療：大多數(shù)抗凋亡基因通過調(diào)節(jié)細(xì)胞的凋亡作為對抗癌藥物的應(yīng)答，而對這些基因mRNA表達(dá)水平上的調(diào)節(jié)往往與腫瘤細(xì)胞對化療的敏感性有關(guān)。盡管抗腫瘤藥物可以調(diào)節(jié)包括抗凋亡基因Bcl2L12在內(nèi)的多種基因的表達(dá)，但是抗癌藥物的作用機(jī)制尚未完全闡明。Thomadaki等[14]為了定義這些基因作為抗癌藥物（順鉑、卡鉑和阿霉素）的細(xì)胞毒性反應(yīng)活動表達(dá)模式的意義，在對乳腺癌細(xì)胞系（MCF-7細(xì)胞）進(jìn)行不同的抗癌藥物（順鉑、卡鉑和阿霉素）治療后，研究了包括Bcl2L12在內(nèi)的各種抗凋亡基因在mRNA表達(dá)水平上的改變。通過MTT法評估細(xì)胞毒性的動力學(xué)，而通過使用特異性引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)（rt-pcr）對不同抗凋亡基因在表達(dá)水平上的改變進(jìn)行了分析。發(fā)現(xiàn)不能存活的細(xì)胞比例隨著不同的抗癌藥物濃度和細(xì)胞接觸時間而上調(diào)，也觀察到不同的抗凋亡基因在mRNA水平的明顯調(diào)節(jié)。Thomadaki等[16]還研究了在通過紫杉醇和依托泊苷兩種抗癌藥物的治療后，乳腺癌細(xì)胞系MCF-7中所表現(xiàn)的基因Bcl-2，Bcl2L12，Bax，F(xiàn)as和Caspase-9在mRNA表達(dá)水平的改變。用MTT法，臺盼藍(lán)染色和DNA梯狀條帶來測定細(xì)胞毒性，而通過使用基因特異性引物進(jìn)行rt-pcr分析凋亡相關(guān)基因的表達(dá)水平。在應(yīng)用依托泊苷處理的情況下，觀察到Bcl2L12A和Caspase-9的下調(diào)，以及Bax的上調(diào)，而與紫杉醇治療MCF-7細(xì)胞導(dǎo)致的各種基因的mRNA水平下調(diào)。其長期的臨床研究結(jié)果支持Bcl2L12和Bcl-2基因家族的其他成員的mRNA表達(dá)分析可以作為預(yù)測乳腺癌化療反應(yīng)的分子標(biāo)記這一觀點(diǎn)。Hong等[15]報道，抗癌藥物順鉑在治療乳腺癌細(xì)胞系（madmb-231細(xì)胞）時，會出現(xiàn)Bcl2L12及其轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體（Bcl2L12A）在mRNA表達(dá)水平的上調(diào)。敲減Bcl2L12及其轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體（Bcl2L12A）會顯著抑制順鉑介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。相比之下，異位表達(dá)兩種蛋白質(zhì)均可上調(diào)順鉑介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。這些結(jié)果表明，Bcl2L12及其轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體（Bcl2L12A）的表達(dá)減少或丟失可能導(dǎo)致順鉑在乳腺癌患者治療過程中的耐藥性。此外，研究還發(fā)現(xiàn)在敲減了Bcl2L12及其轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體（Bcl2L12A）的mad-mb-231細(xì)胞系中，順鉑介導(dǎo)的β-連環(huán)蛋白的表達(dá)降低被部分抑制，這表明敲減這兩個蛋白可能在順鉑介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中起穩(wěn)定β-連環(huán)蛋白的作用。總之，Bcl2L12，Bcl2L12A在順鉑介導(dǎo)的乳腺癌mad-mb-231細(xì)胞凋亡中可能發(fā)揮重要作用。然而，Lee等[17]研究發(fā)現(xiàn)了不同結(jié)果，雌激素受體β亞型5（ERβ5）的表達(dá)與乳腺癌患者的良好預(yù)后和生存期呈正相關(guān)，而Bcl2L12以雌激素依賴的方式與ERβ5相互作用。敲減Bcl2L12的表達(dá)可以增強(qiáng)阿霉素或順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，然而這一現(xiàn)象隨著ERβ5的異位表達(dá)進(jìn)一步增強(qiáng)。Bcl2L12通常被認(rèn)為與Caspase7相互作用抑制細(xì)胞凋亡，然而這種抑制作用在ERβ5表達(dá)時減少，這提示了ERβ5敏感細(xì)胞的凋亡機(jī)制。ERβ5與Bcl2L12以一種新的雌激素依賴的方式相互作用而發(fā)揮促進(jìn)化療藥物誘導(dǎo)的體外乳腺腫瘤細(xì)胞系的凋亡的功能。在不同學(xué)者的研究中出現(xiàn)了明顯對立的兩種不同結(jié)果。對此，我們需要進(jìn)一步研究，以確定這種基因的mRNA表達(dá)譜是否可以提供對乳腺癌的治療作出更具體、敏感的預(yù)測反應(yīng)，作為更合適更成功的個性化治療的依據(jù)。

3 小 結(jié)

細(xì)胞凋亡作為維持各組織器官相對穩(wěn)定性的方式，其過程在體內(nèi)受到調(diào)控。通過對文獻(xiàn)的學(xué)習(xí)，我們認(rèn)識到Bcl2L12在控制細(xì)胞凋亡的過程中發(fā)揮重要作用。Bcl2L12的表達(dá)與乳腺癌患預(yù)后存在明顯相關(guān)性。而Bcl2L12表達(dá)高低與乳腺癌患者預(yù)后、乳腺癌的分子生物學(xué)特征的關(guān)系需要進(jìn)一步研究。Bcl2L12表達(dá)的變化可能會導(dǎo)致某些化療藥物在乳腺癌患者治療過程中的耐藥性。因此，Bcl2L12作為Bcl-2蛋白家族的一員，其在乳腺癌組織中的表達(dá)，及其細(xì)胞生物學(xué)行為將提供對乳腺癌更具體、敏感的個性化治療依據(jù)。

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