李阿平，周海軍，傅黎明

地中海貧血是由于珠蛋白基因發(fā)生缺陷，致使珠蛋白鏈合成減少或不能合成，使形成血紅蛋白的珠蛋白鏈比例失衡，而導(dǎo)致的一種可遺傳的溶血性血液病[1]。主要包括兩種類型：α-地貧和β-地貧。α地中海貧血（包括缺失型α-地貧和非缺失型α-地貧）是世界上最常見的單基因遺傳病之一，中國南方的海南、廣東、廣西、四川、貴州、云南等省市及其周邊地區(qū)是本病的高發(fā)地區(qū)[2，3]。中國常見的缺失型 α-地貧基因型主要為-α3.7、-α4.2和--SEA[4]，這三種缺失型在個(gè)體中的不同組合，可表現(xiàn)為靜止型、標(biāo)準(zhǔn)型、血紅蛋白H?。℉bH病）和Hb Bart’s胎兒水腫綜合癥這四種表現(xiàn)型[5]。β-地貧多由β-珠蛋白基因點(diǎn)突變所致，常見的突發(fā)位點(diǎn)有CD41/42，IVS-Ⅱ-654，-28，CD71/72 等[6]。 新余市地處江西省中西部，本身是地中海貧血的高發(fā)地區(qū)，作為江西省的一個(gè)新興工業(yè)城市，隨著近年來經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，流動(dòng)人口比例日益增高，也會(huì)帶來一定比例的地中海貧血人群，但針對(duì)新余育齡人群的地中海貧血調(diào)查研究還基本沒有。本研究主要分析新余地區(qū)育齡人群中α和β地中海貧血基因攜帶率、基因類型和分布特點(diǎn)，對(duì)今后采取預(yù)防措施控制新余地區(qū)地中海貧血患兒出生有重要參考作用。

1 材料與方法

1.1 材料來源 收集2015年10月到2017年4月來新余市婦幼保健院婚前檢查、孕期檢查和住院部送檢3265例樣本，用對(duì)地中海貧血有重要診斷意義的MCV和MCH作為篩查指標(biāo)進(jìn)行篩選[7]，把符合篩查標(biāo)準(zhǔn)的1221例地中海高危人群做地中?；驕y(cè)定。篩查標(biāo)準(zhǔn)：平均紅細(xì)胞體積(MCV)<80fl和（或）平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)<27pg或直系親屬中有地中海貧血。

1.2 采集 利用真空采血法，抽取受檢者靜脈血2ml，EDTA 抗凝。

1.3 方法

1.3.1 血常規(guī)篩查 采用SYSMEX公司XS-500i的全自動(dòng)五分類血球分析儀測(cè)定。

1.3.2 基因診斷方法 采用聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）擴(kuò)增儀進(jìn)行擴(kuò)增。采用跨越斷裂點(diǎn)（gap，Gap）-PCR 診斷--SEA基因缺失、-α3.7基因缺失和-α4.2基因缺失3種缺失型α地中海貧血。 采用反向點(diǎn)雜交（reverse dot blot，RDB）-PCR對(duì)α和β地中海貧血非缺失型點(diǎn)突變基因進(jìn)行檢測(cè)， 包括3種基因突變類型 [αConstantSpringα(αCSα)、αQuongSzeα(αQSα)和 αWestmeadα(αWSα)]和 17 種 β 珠蛋白基因突變類型 （41-42M、654M、-28M、71-72M、17M、βEM、IVS-I-1M、IVS-I-5M、27/28M、43M、-29M、-30M、31M、-32M、14-15M、IntM 和CAPM），按照操作說明進(jìn)行實(shí)驗(yàn)和結(jié)果判斷。

2 結(jié)果

對(duì)符合初篩標(biāo)準(zhǔn)的1221例標(biāo)本進(jìn)行基因檢測(cè)，共檢出地中海貧血基因攜帶者476例，占總篩查人數(shù)的14.6%。在基因型分布上看，α-地中海貧血173例，占總篩查人數(shù)的5.3%，并且發(fā)現(xiàn)罕見的非缺失型α-地貧（αWSα）1例。共檢出β-地中海貧血303例占總篩查人數(shù)的9.3%，其中有8種β地中海貧血突變基因類型。地中海貧血基因頻率見表1。

表1 新余市育齡人群α、β地貧基因頻率

173例檢出α地中海貧血基因缺陷血樣中，最常見的是--SEA/αα，占有比例最高，為73.41%，其次為-α3.7/αα，比率為14.45%，α地中海貧血基因缺陷類型與占比見表2。303例檢出β地中海貧血基因缺陷血樣中，最常見的是IVS-2-654（C→T）和CD17（A→T），占有比例為37.29%和20.46%。β地中海貧血基因缺陷類型與占比見表3。

表2 新余市育齡人群α地貧基因型及構(gòu)成比

3 討論

本次實(shí)驗(yàn)以MCV和MCH作為地中海貧血高危人群的初篩指標(biāo)進(jìn)行篩查，再對(duì)地中海高危人群的標(biāo)本進(jìn)行基因檢測(cè)，有研究表明地中海貧血患者的紅細(xì)胞參數(shù)中MCV和MCH降低最明顯，其中MCV對(duì)檢出地中海貧血有較高的敏感性和特異性[8]。我國長(zhǎng)江以南各省是α地中海貧血的主要高發(fā)地，尤其以廣西、廣東發(fā)生率最高，大約為14.95%和8.3%[9]。本次研究在3265例人群中共檢出有α缺陷基因者173例，陽性率達(dá)5.3%。雖然低于廣東廣西地區(qū)，但是發(fā)病率還是比較高，其中-SEA/αα、-α3.7/αα、-α4.2/αα 為主要的 α 地中海貧血缺陷基因類型。此外本地區(qū)育齡人群β基因攜帶率為9.3%，檢出β地中海貧血基因型8種，比較常見的 4種基因型為 IVS-2-654 （C→T）、CD17 （A→T）、CD41-42（-TCTT）、-28（A→G），共占 84.5%，其中數(shù)量最多的為IVS-2-654（C→T）型，占37.29%。與饒兆英等對(duì)江西地區(qū)β地中海貧血基因突變類型的分析結(jié)果相近[10]。

表3 新余市育齡人群β地貧基因型及構(gòu)成比

輕度α地中海貧血者平時(shí)無癥狀或只有輕度貧血，但能將地中海致病基因傳給下一代。父母雙方都是α地中海貧血患者，有很大幾率生出重型α地中海貧血，又稱Hb Bart’s胎兒水腫綜合癥，它是造成流產(chǎn)、死產(chǎn)的重要原因之一。而β地中海貧血攜帶者婚配有可能生出β地中海貧血患兒，β地中海貧血根據(jù)臨床癥狀可分為靜止型、輕型、中間型和重型[11]。對(duì)生活質(zhì)量影響比較大的是中間型和重型，中間型β地貧發(fā)病年齡較晚，可不依賴輸血生存，但部分中間型偏重的患者進(jìn)入青少年時(shí)期后，Hb將逐漸下降，會(huì)出現(xiàn)肝脾腫大、心臟增大和地貧面容等表現(xiàn)，需要定期輸血。重型β地貧需要終身依賴高量輸血和除鐵藥生存，否則會(huì)出現(xiàn)肝脾腫大、顴骨隆起、眼距增寬、鼻梁低平等骨骼改變，并且發(fā)育滯后[12]，會(huì)給家庭和社會(huì)帶來很大負(fù)擔(dān)。

目前對(duì)于地中海貧血尚無理想的根治方法，因此通過產(chǎn)前基因診斷和選擇性流產(chǎn)淘汰重癥地貧胎兒是目前國際上公認(rèn)的防治地貧的首要措施[13]。對(duì)地中海貧血的預(yù)防和監(jiān)控在國內(nèi)外已經(jīng)有不少的成功的先例，早在70年代末80年代初，在意大利、塞浦路斯、古巴等地開始實(shí)行地貧的人群篩查計(jì)劃并一直延續(xù)至今，1998年以來塞浦路斯、希臘及地中海其他地區(qū)β重型地貧兒已從原有的每年幾百人下降到幾人，意大利撒丁地區(qū)β重型地貧兒出生率從1975年的4%下降到1996年的0.25%。中國廣西橫縣對(duì)10萬人口的的區(qū)域進(jìn)行了宣教、咨詢、產(chǎn)前診斷等醫(yī)療保健服務(wù)，對(duì)高危孕婦實(shí)施了產(chǎn)前診斷和知情生育選擇，收到了切實(shí)的效果[14，15]?？偨Y(jié)以上各地經(jīng)驗(yàn)，根據(jù)新余市的實(shí)際情況，建議對(duì)市民進(jìn)行宣傳教育并實(shí)行有效組織監(jiān)控，對(duì)到各醫(yī)院就診的育齡夫婦開展群體篩查，對(duì)高危夫婦進(jìn)行基因診斷，根據(jù)結(jié)果提出醫(yī)學(xué)建議。

本研究分析了新余地區(qū)育齡人群中α和β地中海貧血基因攜帶率、基因類型和分布特點(diǎn)，對(duì)今后采取預(yù)防措施降低重癥地中海貧血患兒出生率，提高人口質(zhì)量具有重要的意義。