劉曉麗 王晶 婁閣

【摘 要】目的：檢測宮腔粘連（IUA）組織中與正常子宮內(nèi)膜組織中Erk2及STAT3的表達情況，并分析其在宮腔粘連發(fā)病機制中的作用及意義。方法：采集2016年05月至2017年05月在哈爾濱市紅十字中心醫(yī)院婦產(chǎn)科就診的60例宮腔粘連的患者作為研究組，選擇子宮內(nèi)膜正常的患者28例作為對照組。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法檢測Erk2及STAT3在以上組織中的表達。結(jié)果：Erk2在研究組中的表達高于對照組（=29.031，P <0.001），而STAT3在研究組的表達低于對照組，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（=17.683，P =0.000）。研究組中Smad2和Erk2的表達呈負相關(guān)。結(jié)論：宮腔粘連組織中Erk2及STAT3 的異常表達可能與IUA的發(fā)生有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】宮腔粘連；Erk2；STAT3

【中圖分類號】R77.6 【文獻標(biāo)識碼】A 【文章編號】1005-0019（2018）20-0-02

宮腔粘連（intrauterine adhesion， IUA）又稱Asherman綜合征，是子宮內(nèi)膜損傷后發(fā)生的纖維化病變[1]。目前對 IUA 的研究大多數(shù)局限在診斷和治療方面，對其形成機制和病理生理變化缺乏了解，IUA 的發(fā)生過程和纖維化相關(guān)因子的表達異常密切相關(guān)，但其具體機制尚不清楚。我們對子宮內(nèi)膜組織和粘連組織中Erk2及STAT3 的基因表達差異進行了研究，為防治IUA提供一定的研究基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 研究對象：實驗組 選取2016年05月至2017年05月在哈爾濱市紅十字中心醫(yī)院婦產(chǎn)科行宮腔鏡手術(shù)的IUA患者共60例，依宮腔粘連程度將其分為3個實驗組：輕度粘連組、中度粘連組及重度粘連組。其中輕度粘連組22例，平均年齡為（31.2±5.3 ）歲；中度粘連組20例，平均年齡為（31.4±4.3 ）歲；重度粘連組18例，平均年齡為（34.1±5.2 ）歲。各組年齡、孕產(chǎn)次、宮腔手術(shù)操作次數(shù)等一般性資料經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析比較，差異無顯著性（P >0.05），具備可比性。對照組 選擇同期因不孕行宮腔鏡檢查且子宮內(nèi)膜正常的非lUA患者28例，平均年齡為（34.3±4.2 ）歲，取其內(nèi)膜，病理結(jié)果為增生期子宮內(nèi)膜。

1.2 研究方法

1.2.1 實驗試劑：Trizol試劑（GenePharma公司）、RT試劑盒、PCR試劑盒、100bpDNA ladder及二種信號通路因子引物（由英濰捷基公司有限公司合成）：①Erk2引物：上游為5'-catcagacgtactgccagagaa-3'，下游為5'-aggggatccaagtataccaagg-3'，預(yù)期擴增產(chǎn)物長度為561bp。②STAT3引物：上游為5'-cctgaagctgacccaggtag-3'，下游為5'-ttccaaactgcatcaatgaatc-3'，預(yù)期擴增產(chǎn)物長度為133bp。③內(nèi)參3-磷酸甘油醛脫氫酶（3-glyceraldehyde phosphate dehydrogenase，3-GAPDH）引物：上游為5'-gtcctctctggcaaagtcca-3'，下游為5'-gcttagcaccacccttcaga-3'，預(yù)期擴增產(chǎn)物長度為286bp。

1.2.2 實驗方法：提取子宮內(nèi)膜組織RNA，合成第一鏈cDNA。配制反應(yīng)體系進行PCR反應(yīng)：按下列次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍?.5mL的離心管：10 x PCR Buffer2.5?L，MgCl2（25 mmol/L）1.5?L，dNTP mix（2mmol/L）2.5?L，信號通路因子引物預(yù)混液（上、下游引物各1 x 10-11 mol/?L）2.0 ?L，cDNA模板1.0 ?L，超純水14.0 ?L，TaqDNA聚合酶物（5U/?L）。將反應(yīng)體系放入PCR儀，執(zhí)行下列程序： 95℃，5min→94℃，30s→56℃， 40s→72℃， 30s→72℃，6min→4℃。第6個循環(huán)結(jié)束后，停留在72℃，在PCR反應(yīng)體系中加入內(nèi)參引物1.0?L后同管擴增。PCR產(chǎn)物的檢測：取PCR產(chǎn)物10.0?L進行1. 5%瓊脂糖凝膠電泳。用四星凝膠圖像分析系統(tǒng)測定條帶的亮度。圖像處理：以生長因子條帶亮度與GAPDH條帶亮度之比表示該因子的相對表達量，測量3次，取平均值進行分析。

1.3 統(tǒng)計方法 統(tǒng)計學(xué)分析使用SPSS 18.0軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料以表示。組間比較采用Kruskal-Wallis檢驗。以P <0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

Erk2在各組子宮內(nèi)膜組織中的表達 實驗組中，Erk2隨宮腔粘連程度加重呈現(xiàn)遞增趨勢，見表1。重度粘連組與對照組、輕度、中度比較，輕度粘連組與中度粘連組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P <0.001，P <0.001，P <0.001，P=0.006）；對照組與輕度、中度粘連組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P = 0.967、P= 0.082 ）。

STAT3在各組子宮內(nèi)膜組織中的表達 對照組STAT3水平均高于輕度粘連組、中度粘連組及重度粘連組，見表1。對照組與中度、重度粘連組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P <0.001、P <0.001）；輕度粘連組與對照組，中度與重度粘連組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P =0.081，P =0.171）。

3 討論

宮腔粘連是育齡期婦女的常見病之一，其發(fā)病率逐年上升。IUA是由于子宮基底膜損傷，肌層出現(xiàn)裸露，創(chuàng)面積聚炎性因子、膠原蛋白及少許滲血，宮腔各壁緊密接觸，在逐漸修復(fù)的過程中形成纖維帶[2] 。目前，其發(fā)病機制尚不清楚，探索IUA的發(fā)病機制，尋求有效作用靶點預(yù)防IUA的形成為研究熱點。

細胞外調(diào)節(jié)激酶是絲裂原活化蛋白激酶家族中的重要成員，主要有兩種亞型：Erk1和Erk2，Erk1和Erk2普遍分布在組織中，但在非同類組織中的相對密度具有較大差別，主要由聯(lián)系細胞的生長分化信號及核的轉(zhuǎn)錄過程中的蛋白激酶串聯(lián)序列構(gòu)成[3]。Erk2可能參與了宮腔粘連的形成過程，本研究發(fā)現(xiàn)實驗組中，Erk2隨宮腔粘連程度逐漸加重，其表達呈現(xiàn)遞增趨勢，重度粘連組與輕度、中度、對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P <0.001，P <0.001，P <0.001）。我們推測，Erk2通路的激活促進細胞增殖，出現(xiàn)子宮腔內(nèi)纖維組織的大量增生，子宮內(nèi)膜組織毛細血管床和血流量的明顯減少，血液流變學(xué)出現(xiàn)改變，進而內(nèi)膜再生功能降低，導(dǎo)致宮腔粘連。另外，Erk2通路的激活后，出現(xiàn)上皮細胞的不斷分化、分泌，當(dāng)累及子宮內(nèi)膜時表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜炎性表現(xiàn)，導(dǎo)致子宮內(nèi)膜再生功能障礙，從而宮腔纖維組織增多，粘連形成，形成惡性循環(huán)。所以，我們認為抑制Erk2的激活，可能在某種程度上抑制宮腔粘連的發(fā)生或進展。

研究發(fā)現(xiàn)實驗組中，STAT3隨宮腔粘連程度逐漸加重，其表達呈現(xiàn)遞減趨勢，重度粘連組、中度粘連組與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P <0.001，P <0.001）。STAT3基因在對照組和粘連組織中都表達，且在正常中的表達量大于粘連組織中的表達量。這一結(jié)果可能與子宮內(nèi)膜基底層損傷后修復(fù)過程中相關(guān)生長因子受體，如表皮生長因子受體、集落刺因子受體等的激活有關(guān)。

另外，我們研究顯示Erk2 mRNA和STAT3mRNA表達呈負相關(guān)（P <0.05）。進一步研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)子宮內(nèi)膜受損后炎性細胞因子增多，導(dǎo)致機體炎性反應(yīng)增強，同時子宮內(nèi)膜組織中Erk2通路被激活，隨著內(nèi)膜炎癥程度的加重，子宮內(nèi)膜組織Erk2通路進一步活化，進而導(dǎo)致子宮內(nèi)膜病變以及在此基礎(chǔ)上出現(xiàn)纖維化改變，最終導(dǎo)致宮腔粘連。并且，STAT3mRNA減弱了VEGF的血管生成作用，從而減弱了內(nèi)膜的修復(fù)能力，加重宮腔粘連。

根據(jù)本實驗結(jié)果，我們認為Erk2及STAT3 基因在宮腔粘連形成中起到關(guān)鍵作用，這為預(yù)防宮腔粘連的發(fā)生提供重要信息。通過調(diào)節(jié)信號通路因子的表達以預(yù)防宮腔粘連將是今后需要深入探索的課題。

參考文獻

段華，甘露.宮腔粘連的診療現(xiàn)狀與進展.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2017，42（4）：373-376.

中華醫(yī)學(xué)會婦產(chǎn)科學(xué)分會.宮腔粘連臨床診療中國專家共識[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2015，50（12）：881-887.

王丹，陳曉等.自分泌IL-6經(jīng)Ras/MEK/ERK、PI3K/Akt通路促進卵巢癌細黏附和侵襲功能的研究.免疫學(xué)雜志，2016，32（4）：294-298.