李 娟 楊偉翔 （廣東省深圳市寶安區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 518101）

生豬狹義上是指育肥階段的豬，具有體格發(fā)育迅速、生理代謝旺盛的特點(diǎn)，此階段的豬免疫系統(tǒng)發(fā)育相對(duì)完善，但仍面臨多種傳染性疾病的威脅，常發(fā)疾病包括病毒類和細(xì)菌類等。不同病原微生物具有的特性不同，臨床檢測(cè)方法也有較大區(qū)別。下面就生豬常見傳染病的檢測(cè)與處理和大家作一下交流。

1 病毒類傳染病檢測(cè)

1.1 病毒培養(yǎng)法

病毒結(jié)構(gòu)非常簡(jiǎn)單，只有核酸、外殼蛋白和少部分附屬物，是自然界最簡(jiǎn)單的生命體。由于缺乏自我增殖的細(xì)胞器，單獨(dú)存在不能進(jìn)行自行復(fù)制，只有在感染細(xì)胞后才能增殖。利用這一特征，人們最初在檢測(cè)病毒性疾病時(shí)，都是依靠細(xì)胞培養(yǎng)法進(jìn)行鑒定。無(wú)菌采取可疑組織器官，將其中病原分離并重新感染新的培養(yǎng)細(xì)胞，培養(yǎng)數(shù)日后，若細(xì)胞組織出現(xiàn)感染特征則可確定。病毒培養(yǎng)法檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)，培養(yǎng)條件苛刻，容易出現(xiàn)污染，失敗概率高，檢測(cè)成本較昂貴，結(jié)果判斷需要較高的專業(yè)水平，故臨床未能大范圍推廣，大部分都是局限于實(shí)驗(yàn)室學(xué)術(shù)研究。

1.2 血清法

血清法是利用不同病毒或病毒的不同亞型具有的抗原決定簇不同，致使在感染機(jī)體后激發(fā)的免疫信號(hào)不同，最終產(chǎn)生針對(duì)性的抗體。臨床上，機(jī)體產(chǎn)生抗體有兩種原因，一種是疫苗免疫，機(jī)體通過(guò)對(duì)疫苗抗原的識(shí)別，針對(duì)性的產(chǎn)生抗體，從而保護(hù)機(jī)體免受野毒感染。另一種是野毒感染，如果生豬在未免疫前發(fā)生感染，機(jī)體也會(huì)產(chǎn)生抗體，但由于野毒一般毒力較強(qiáng)，抗體不足以將其消滅，但能通過(guò)測(cè)定抗體來(lái)驗(yàn)證病豬所感染的病原類型，本文所討論的常見傳染病檢測(cè)屬于后者。

拿常見豬瘟檢測(cè)來(lái)講，采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢查時(shí)，用生理鹽水、磷酸鹽緩沖液或巴比妥緩沖液制成1%濃度的瓊脂，無(wú)菌條件制板后，在平板上打孔，以可疑豬的脾臟、淋巴結(jié)為被檢材料，剪碎、研磨、反復(fù)凍融作為已知抗原，以豬瘟血清為已知抗體，分別加入瓊脂板的中間孔和周邊孔中，讓其自由擴(kuò)散，約4d后，如果能在中間孔和周邊孔中間觀察到白色沉淀線，則代表結(jié)果為陽(yáng)性，可確定被檢材料中含有病毒，反之則無(wú)。

血清法和病毒培養(yǎng)法相比，只需抽取可疑豬的血液，通過(guò)測(cè)定血清中有無(wú)特異性抗體就能得到確診，操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確率高，不但能鑒定出患豬感染的病原種類，還能檢測(cè)出具體血清類型，且檢測(cè)成本較低，對(duì)人員專業(yè)度要求不高，適合大規(guī)模推廣。目前，基于血清法推廣的檢測(cè)方法有瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)、抗原抗體沉淀法、ELISA法等，為我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展起到巨大的推動(dòng)作用。

1.3 分子生物學(xué)法

自從核酸 （DNA或RNA）被發(fā)現(xiàn)并確定結(jié)構(gòu)后，生物界大范圍興起遺傳物質(zhì)的研究，不同生物間之所以不同，本質(zhì)是因?yàn)檫z傳物質(zhì)的堿基序列不同，從而組合成不同的生命密碼。遺傳物質(zhì)的不同是病毒微生物間本質(zhì)的不同，通過(guò)測(cè)定病毒遺傳物質(zhì)的特定序列來(lái)進(jìn)行檢測(cè)無(wú)疑是最為準(zhǔn)確可靠的方法，目前比較成熟的是PCR技術(shù)檢測(cè)，體外合成可疑病毒的特異性引物片段，將其序列擴(kuò)增，如果病料中確實(shí)含有可疑病毒，便會(huì)在引物作用下進(jìn)行大量復(fù)制，如果結(jié)果為陽(yáng)性則可確診。

分子生物學(xué)法和病毒培養(yǎng)法、血清學(xué)方法相比，技術(shù)最為先進(jìn)，檢測(cè)結(jié)果最為可靠，不但能鑒定出病原種類、血清類型，還能鑒定出感染病毒的具體亞型。對(duì)于科研工作者來(lái)講，通過(guò)分析不同病毒序列間的關(guān)系，得到具體的基因遺傳信息，并通過(guò)分析這些信息，對(duì)有用基因片段進(jìn)行修飾、敲除或轉(zhuǎn)移，從而將病毒毒力致弱或消除，但又不會(huì)影響免疫原性，如豬偽狂犬基因缺失苗是將部分基因消除后得到新型疫苗，免疫后不但不會(huì)致病，還能將偽狂犬病毒的抗原決定簇很好的保留，最終得到一種新型偽狂犬疫苗。

2 細(xì)菌類傳染病檢測(cè)

2.1 細(xì)菌培養(yǎng)法

細(xì)菌在分類學(xué)上高于病毒，具有完整成套的細(xì)胞器，可以自我合成蛋白、脂類等有機(jī)化合物，和病毒培養(yǎng)的方法不同，細(xì)菌的培養(yǎng)并不需要感染細(xì)胞，只需要特定培養(yǎng)基就可以體外培養(yǎng)，培養(yǎng)基從形態(tài)上大致可以分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基3種，固體培養(yǎng)基主要用于細(xì)菌菌落的鑒別和菌株的短期保存，半固體培養(yǎng)基主要用于可疑菌株運(yùn)動(dòng)性考察，而液體培養(yǎng)基則主要用于菌株增殖。

培養(yǎng)后的細(xì)菌并不能直接進(jìn)行鑒定，必須通過(guò)綜合鑒別培養(yǎng)基結(jié)果、革蘭氏染色結(jié)果、鏡檢觀察結(jié)果綜合分析確定。如沙門氏菌在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂上培養(yǎng)的菌落特征為表面光滑、邊緣整齊、半透明、近似灰白色、圓形突起的小菌落，革蘭氏染色呈陰性，鏡檢可見散在的，大小約為0.7～1.5μm×2.0～5.5μm，表面無(wú)莢膜，不形成芽孢的短小桿菌。細(xì)菌培養(yǎng)法操作簡(jiǎn)單，容易掌握，檢測(cè)成本低，但結(jié)果可靠性差，大多數(shù)都是通過(guò)肉眼主觀判斷，不同的人可能會(huì)出現(xiàn)判讀結(jié)果的不一致。

2.2 生化鑒定法

細(xì)菌可以利用培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行自我生長(zhǎng)繁殖和代謝，營(yíng)養(yǎng)成分主要包括糖類、蛋白質(zhì)、生長(zhǎng)因子、礦物質(zhì)等，不同病原性細(xì)菌所能利用的營(yíng)養(yǎng)物有所差異，如大腸桿菌可利用乳糖而沙門氏菌不能，但二者都為革蘭氏染色呈陰性的球桿菌，通過(guò)鏡檢很難鑒別，利用乳糖發(fā)酵的生化鑒定便能將二者區(qū)別開來(lái)。除了能發(fā)酵不同的營(yíng)養(yǎng)物外，發(fā)酵后產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物也有較大差異，生化鑒定法正是利用不同微生物菌株所能利用的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及最終代謝產(chǎn)物的不同而加以鑒別。常用的生化鑒定試驗(yàn)有糖類發(fā)酵試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、MR試驗(yàn)、淀粉水解試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)、明膠液化試驗(yàn)、接觸酶試驗(yàn)等。

生化反應(yīng)法檢測(cè)成本不高，結(jié)果與細(xì)菌培養(yǎng)法相比更為可靠，有時(shí)根據(jù)生化特征甚至能鑒定到菌株具體亞型，無(wú)需引入特殊檢驗(yàn)設(shè)備，對(duì)操作人員的專業(yè)度要求也不高，臨床應(yīng)用更為廣泛。但結(jié)果準(zhǔn)確度仍存在較大偏差，即使同一種菌也有少部分菌因變異而出現(xiàn)與生化結(jié)果不一致的現(xiàn)象，且有些菌株發(fā)酵過(guò)程遲緩，結(jié)果判斷模糊。正因如此，生化發(fā)酵結(jié)果除了陽(yáng)性和陰性之外，還有一個(gè)可疑的判定。

2.3 血清學(xué)和分子生物學(xué)法

血清學(xué)和分子生物學(xué)法基本和病毒的檢測(cè)法相同，只是細(xì)菌更為高等，結(jié)構(gòu)更為復(fù)雜，有些菌如大腸桿菌、沙門氏菌等血清型達(dá)上百種，鑒定時(shí)需要種類非常多的特異性抗體才能檢測(cè)出，樣本處理量大。如按常規(guī)作大腸桿菌分離培養(yǎng)時(shí)，當(dāng)病料中的可疑菌株被成功分離且驗(yàn)純后，挑取乳糖培養(yǎng)基發(fā)酵的菌落分別與多價(jià)OK抗血清作玻片凝集試驗(yàn)，如未發(fā)生凝集反應(yīng)或凝集反應(yīng)很弱，則視為陰性，如果其中的某些菌落與多價(jià)OK血清發(fā)生凝集反應(yīng)，將菌落移種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上作進(jìn)一步鑒定。再作進(jìn)一步鑒定時(shí)推薦采用分子生物學(xué)法，細(xì)菌與病毒相比，因內(nèi)部存在的核糖核酸較多，有些存在于細(xì)胞核中，有些存在于細(xì)胞質(zhì)中，可供檢測(cè)的基因片段也要比病毒多，但檢測(cè)方法基本相同，最終檢測(cè)結(jié)果可靠，在這里不再詳述。

3 討論

生豬常見傳染性疾病除了病毒性和細(xì)菌性病原外，還有支原體、附紅細(xì)胞體、螺旋體等病原，只是臨床發(fā)病相對(duì)較少，且檢測(cè)方法較為復(fù)雜，很多基層硬性檢測(cè)條件不能滿足，人員專業(yè)度也不夠，使本病的報(bào)道較少，但其實(shí)這些病一直在基層呈地方流行。希望我國(guó)政府部門重視動(dòng)物疫病檢測(cè)，加大快速檢測(cè)方法的研究投入，使基層對(duì)生豬傳染性疾病的檢測(cè)無(wú)強(qiáng)的專業(yè)性壁壘，真正做到疫病監(jiān)控及時(shí)、高效，最大程度減少疫病帶來(lái)的損失。