馮學花，陶阿麗，戴 一,2，曹殿潔，宋祖榮 (.安徽新華學院 藥學院，合肥 230088； 2.中國科學技術大學 化學系，合肥 230026)

千金子為大戟科植物續(xù)隨子(EuphorbialathylrisL.)的干燥成熟種子，具有逐水消腫、破血消癥的功效[1-3]。千金子中含油脂、二萜類、甾醇類、香豆素類、黃酮類等化學成分，尤其油脂含量可達50%左右，是制備新型的低成本生物柴油的佳品[4-7]。黃酮類化合物有很好的醫(yī)療保健作用，現(xiàn)代研究表明其具有降血壓、降血脂、擴張冠狀動脈等作用。

千金子粕是千金子提油后的副產品。目前，國內較少有關于千金子粕中黃酮類成分提取方面的研究[8-10]。本文采用超聲波輔助提取千金子粕中的總黃酮并利用響應面設計法優(yōu)化其提取條件，以期為千金子的綜合開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

千金子粕：合肥科農生物技術有限公司；蘆丁標準品：上海圻明生物科技有限公司；硝酸鋁、甲醇、乙醇、亞硝酸鈉、氫氧化鈉，均為分析純。

TC-SY-1000超聲波提取器；RE-2000型旋轉蒸發(fā)器；UV1000型紫外可見分光光度計；AL204-IC瑞士電子天平：梅特勒-托利多公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 蘆丁標準曲線的繪制

將蘆丁標準品在105℃條件下干燥至恒重，精密稱取50 mg，置50 mL容量瓶中加甲醇適量，水浴加熱使其溶解后放冷至室溫，加甲醇定容至刻度，搖勻后，精密吸取5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，得蘆丁標準溶液(0.1 mg/mL)備用。

精密吸取上述0.1 mg/mL的蘆丁標準溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分別置于6個10 mL容量瓶中，各精密加入5%亞硝酸鈉溶液0.5 mL，搖勻，靜置 6 min。再分別精密加入10%硝酸鋁溶液0.5 mL，搖勻，靜置6 min。最后分別加4%氫氧化鈉溶液3.5 mL后用60%乙醇定容至刻度，搖勻，靜置15 min。用紫外可見分光光度計在 510 nm 波長處分別測定上述6份溶液的吸光度A，以溶液質量濃度C為橫坐標，對應的吸光度A為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為A=23.6C-0.007 91(R2=0.999 7)。

1.2.2 千金子粕總黃酮的提取

脫脂：將干燥的千金子粕粉碎過40目篩，以石油醚(30～60℃)為溶劑，索氏提取24 h后，在40～50℃條件下進行恒溫干燥，粉碎，過50目篩，密封備用。

精確稱取脫脂千金子粕粉10.0 g置于磨口具塞錐形瓶中，加入一定體積60%乙醇，在一定超聲功率下超聲一定時間，抽濾，收集提取液，濃縮，干燥，得總黃酮粗粉。按照1.2.1標準曲線的測定方法，測吸光度，計算得率。

總黃酮得率=提取的總黃酮質量/千金子粕干粉質量×100%

2 結果與分析

2.1 單因素實驗

2.1.1 液料比對得率的影響

取脫脂千金子粕粉10.0 g，在250 W超聲功率條件下超聲提取30 min，考察液料比對總黃酮得率的影響，結果見圖1。

圖1 液料比對總黃酮得率的影響

從圖1可以看出，開始時總黃酮得率隨著液料比的增加而增加，當液料比達到30∶1時，得率高達1.45%，之后液料比雖增加但總黃酮得率呈下降趨勢，原因可能由于溶劑用量太大而導致熱能消耗較多，加熱需要的時間延長，溶劑中總黃酮濃度下降[11]。因此，液料比宜在30∶1左右。

2.1.2 提取時間對得率的影響

取脫脂千金子粕粉10.0 g，按液料比30∶1加入60%乙醇在超聲功率250 W條件下超聲提取，考察提取時間對總黃酮得率的影響，結果見圖2。

圖2 提取時間對總黃酮得率的影響

從圖2可以看出，在超聲提取的前40 min內，總黃酮得率隨提取時間的延長而增加，40 min后呈現(xiàn)下降趨勢，其中提取時間在10～30 min之間時，總黃酮得率明顯上升，30～40 min時，得率變化不明顯，可能因為剛開始時總黃酮沒有完全浸潤到溶劑中，隨著提取時間的延長，總黃酮被完全浸潤后得率增加，之后總黃酮在溶液中達到飽和得率不再變化。因此，選擇40 min為提取時間較優(yōu)值。

2.1.3 超聲功率對得率的影響

取脫脂千金子粕粉10.0 g，按液料比30∶1加入60%乙醇，超聲提取40 min，考察超聲功率對總黃酮得率的影響，結果見圖3。

圖3 超聲功率對總黃酮得率的影響

從圖3可以看出，超聲功率在150～450 W之間，總黃酮得率呈上升狀態(tài)，超過450 W后得率逐漸下降，可能因為超聲功率增大，促進細胞破裂，有利于黃酮成分的溶出，但超聲功率過大，溶液分子發(fā)生劇烈振動，溫度急劇升高導致黃酮的結構被破壞，使其得率下降[12]。故選擇450 W為超聲功率較優(yōu)值。

2.1.4 提取次數(shù)對得率的影響

取脫脂千金子粕粉10.0 g，按液料比30∶1加入60%乙醇，在超聲功率450 W、超聲時間40 min條件下，考察提取次數(shù)對總黃酮得率的影響，結果見圖4。

從圖4可以看出，提取次數(shù)對總黃酮得率影響甚微?？紤]節(jié)約生產成本，故選擇超聲提取1次。

圖4 提取次數(shù)對總黃酮得率的影響

2.2 響應面實驗

2.2.1 響應面實驗設計及結果

依據單因素實驗結果，以總黃酮得率(Y)為指標，考察液料比(A)、超聲功率(B)和提取時間(C)3個因素對總黃酮得率的影響，采用響應面實驗優(yōu)化提取條件。響應面實驗因素水平和響應面實驗設計及結果如表1和表2所示，方差分析見表3。

表1 響應面實驗因素水平

表2 響應面實驗設計及結果

表3 方差分析

由表3可知，模型p為0.035 5，小于0.05，表示該模型顯著，失擬項p為0.865 0，不顯著，表明回歸方程擬合度和可信度均很高，可以用來預測總黃酮得率。由回歸模型系數(shù)顯著性檢驗結果可知，模型的一次項A、B對總黃酮提取的線性效應顯著，二次項B2對總黃酮提取的曲面效應極顯著；表明各影響因素對總黃酮得率的影響不是簡單的線性關系?；貧w擬合后得到的回歸方程為：

Y=1.09+0.14A+0.14B-0.01C-0.08AB-0.028AC+0.028BC+0.007 5A2+0.24B2+0.04C2

2.2.2 驗證實驗

根據二次回歸的數(shù)學模型分析結果，最優(yōu)條件為液料比35∶1、超聲功率550 W、提取時間30 min，此時預測的總黃酮得率最大值為1.585%。根據上述最優(yōu)條件，進行3次平行驗證實驗，總黃酮得率平均值為 1.576%。將實際測得值與擬合方程的預測最大值進行比較，計算平均偏差為0.57%，偏差較小，說明該模型有效。

3 結 論

在單因素實驗基礎上采用響應面優(yōu)化實驗，得到超聲波輔助提取千金子粕中總黃酮的最佳工藝條件為液料比35∶1、超聲功率550 W、提取時間30 min。在最優(yōu)條件下，千金子粕中總黃酮得率為1.576%，與預測值1.585%的偏差較小。因此，該模型較為準確可靠，對指導千金子粕中提取總黃酮生產實踐具有一定借鑒意義。

[1] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典：一部[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015:34-35.

[2] 劉玉婷，楊洋，弓佩含，等. 千金子化學成分研究進展[J]. 中國實驗方劑學雜志，2017，23(9)：243-248.

[3] 焦威，魯璐，鄧美彩，等. 千金子化學成分的研究[J]. 中草藥，2010，41(2)：181-187.

[4] 賈元超. 用千金子油制備生物柴油的方法：CN101418227[P]. 2009-04-29.

[5] 田琴. 續(xù)隨子中活性成分分析及提取工藝優(yōu)化[D]. 太原：山西大學，2015.

[6] PASCUAL-VILLALOBOS M J，LOPEZ M D. Leaf lipids fromEuphorbialagascaeSpreng. andEuphorbialathyrisL. [J]. Ind Crops Prod,2010,32:560-565.

[7] 楊君，盧禁，王書云，等. 千金子中非萜類化學成分的分離與鑒定[J]. 沈陽藥科大學學報，2016，33(3)：194-197,214.

[8] 吳瑞環(huán)，張振凌，都盼盼，等. 泛油對千金子中秦皮乙素含量影響的比較研究[J]. 中醫(yī)學報，2016，31(12)：1943-1946.

[9] 孫國君，張付玉，占扎君，等. 千金子化學成分和藥理活性研究進展[J]. 中藥材，2010，33(2)：308-312.

[10] 孟夏，王延年，莊賀飛，等. HPLC 同時測定千金子不同部位中4種有效成分的含量[J]. 中國實驗方劑學雜志，2012，18(18)：91-94.

[11] 寧偉偉，陶寧萍，榮旭，等. 響應面法優(yōu)化奇亞籽餅脫脂工藝研究[J]. 中國油脂，2016，41(7)：20-23.

[12] 原姣姣，王成章，張紅玉，等. 超聲輔助酶法提取橄欖油的研究[J]. 中國油脂，2016，41(7)：10-14.