歐陽(yáng)慧 郭桂英 秦旭 黃鑫（通訊作者）

（1樂(lè)山市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 樂(lè)山 四川 614000（2樂(lè)山市人民醫(yī)院分子實(shí)驗(yàn)室 樂(lè)山 四川 614000）

結(jié)核病至今仍為重要的傳染病。估計(jì)世界人口中1/3感染結(jié)核分歧桿菌。據(jù)WHO報(bào)道，每年約有800萬(wàn)新病例發(fā)生，至少有300萬(wàn)人死于該病。中國(guó)是全球22個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一,每年新發(fā)病例占全球總數(shù)的16%。結(jié)核病也是發(fā)展中國(guó)家流行的一種致死性疾病，現(xiàn)已成為世界嚴(yán)重公共衛(wèi)生問(wèn)題。近些年來(lái)，我國(guó)的結(jié)核病發(fā)病率呈緩慢的上升趨勢(shì)，該病的傳染性極強(qiáng)，傳染方式簡(jiǎn)單，給人們的健康帶來(lái)了重大的威脅[1]。一般來(lái)說(shuō)絕大多數(shù)的感染在肺部，但皮膚，腦膜，腹膜等位置也可以發(fā)生感染[2]。有研究表明，結(jié)核病的延遲診斷給患者及親密接觸者造成嚴(yán)重不良后果，因此，早期的明確診斷具有重要意義[3]。痰標(biāo)本簡(jiǎn)單，易獲得，是一種常用的檢測(cè)樣本。而且檢出痰中含有結(jié)核桿菌是臨床診斷肺結(jié)核或鑒別與其他肺病的依據(jù)。本研究通過(guò)比較痰TB-DNA檢測(cè)以及傳統(tǒng)的痰抗酸染色對(duì)結(jié)核桿菌的檢出率，為臨床提供肺結(jié)核診療的最佳實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方案。

1.資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2015年12月—2016年12月本院診治的202例結(jié)核患者(男性患者167例，女性患者35例，漢族患者121例，少數(shù)民族患者81例)的臨床資料（詳見(jiàn)表1），依據(jù)臨床表現(xiàn)及影像學(xué)等檢查確診為肺結(jié)核患者。按照不同檢測(cè)方式分為PCR組和抗酸染色組。其中PCR組檢測(cè)352份樣本，抗酸染色組檢測(cè)648份樣本。

1.2 方法

1.2.1 采集痰標(biāo)本 患者晨起后漱口，咳出1～2口痰至已進(jìn)行過(guò)滅菌處理的無(wú)菌杯加蓋送檢，樣本中避免混入唾液。

1.2.2 試劑和儀器 抗酸染色用5%石炭酸復(fù)紅，3%鹽酸酒精再加呂氏美蘭液。PCR儀器為DA7600型全自動(dòng)熒光定量PCR儀。

1.2.3 方法

（1）萋-尼氏抗酸染色法鏡檢，嚴(yán)格按照《結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷檢驗(yàn)規(guī)程》操作。

（2）PCR檢測(cè) 使用胰酶懸液消化痰標(biāo)本。離心棄上清液得沉淀物用于TB-DNA提取，然后按設(shè)定程序進(jìn)行DNA擴(kuò)增和分析。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用spss 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，技術(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)χ2，P＜0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 PCR法和抗酸染色法在痰抗酸桿菌檢測(cè)中陽(yáng)性率比較結(jié)果顯示PCR法檢出痰液里的結(jié)核分枝桿菌陽(yáng)性率明顯高于傳統(tǒng)的涂片抗酸染色法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（詳見(jiàn)表2）

2.2 PCR法和抗酸染色涂片法檢出結(jié)核病人陽(yáng)性率比較202例結(jié)核患者中痰PCR檢出陽(yáng)性為72例，抗酸染色檢出陽(yáng)性53例，PCR的陽(yáng)性患者檢出明顯高于抗酸染色。（詳見(jiàn)表3）。

表1 202例確診結(jié)核病人基本資料

表2 1000份痰標(biāo)本兩種不同檢測(cè)法比較

表3 202例結(jié)核患者痰檢測(cè)PCR和抗酸染色結(jié)果比較

3.討論

結(jié)核病的細(xì)菌學(xué)檢查是檢測(cè)結(jié)核桿菌的主要手段，是結(jié)核病確診和制定治療方案的的重要依據(jù)。傳統(tǒng)的抗酸染色是常用且簡(jiǎn)單易行的檢測(cè)方法，但是特異性較差，不易區(qū)分結(jié)核分枝桿菌和非結(jié)核分枝桿菌，而且干擾因素多，漏檢率很高，陽(yáng)性率低。而要在金標(biāo)準(zhǔn)下進(jìn)行結(jié)核桿菌培養(yǎng)，一般需要45天時(shí)間，且對(duì)培養(yǎng)要求很高，不易用作早期診斷手段，不太適用于臨床。所以需要加入更有效，特異性更高且快速的方法加以輔佐，彌補(bǔ)其部分不足。而近年來(lái)有很多新的檢測(cè)痰中結(jié)核桿菌的技術(shù)比如環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP），免疫磁珠分離技術(shù)(immunomagnefic beads separation techniques,IMBS) 等，都反映出能更好的檢測(cè)痰中結(jié)核桿菌，但是其要用于基層醫(yī)院的臨床檢測(cè)還需要更長(zhǎng)的時(shí)間。

目前臨床上應(yīng)用較好的較成熟的是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)基因擴(kuò)增（簡(jiǎn)稱(chēng)PCR）對(duì)痰結(jié)核桿菌進(jìn)行檢測(cè)的方法，該方法的好處是利用較為穩(wěn)定的痰結(jié)核DNA進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)對(duì)痰樣本中的生物DNA進(jìn)行提取，并以結(jié)核桿菌DNA的特異性寡核苷酸作為引物進(jìn)行的基因擴(kuò)增，可以檢測(cè)到所提取的DNA提取物中是否含有要檢測(cè)的結(jié)核桿菌DNA，這種方法大大提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性和可靠性，可為臨床提供及時(shí)，準(zhǔn)確的診斷依據(jù)，值得在臨床實(shí)踐中加以推廣應(yīng)用。為了廣泛推廣該項(xiàng)技術(shù)在臨床的應(yīng)用，提高臨床醫(yī)生對(duì)TB-DNA檢測(cè)意義的認(rèn)識(shí)。本研究通過(guò)比較結(jié)核病人痰抗酸染色和PCR兩種檢測(cè)方法檢測(cè)抗酸桿菌的情況，結(jié)果顯示PCR檢測(cè)法明顯優(yōu)于傳統(tǒng)抗酸染色。其操作方法簡(jiǎn)便，診斷快速，特異性較高，且檢查結(jié)果具有較高的真實(shí)度和可靠性，表明PCR法對(duì)結(jié)核分枝桿菌的快速檢測(cè)具有重要的意義。

綜上所述,用PCR技術(shù)檢測(cè)痰結(jié)核分枝桿菌具有較高的陽(yáng)性檢出率，檢測(cè)特異性較高，臨床操作簡(jiǎn)潔，耗時(shí)短且彌補(bǔ)了其他一些傳統(tǒng)檢測(cè)方法的不足，具有臨床實(shí)際應(yīng)用價(jià)值，是一種值得推薦和推廣的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)，但是也有其局限性，就是易受外界干擾，還存在一定程度的不穩(wěn)定性易產(chǎn)生假陽(yáng)性?？梢院涂顾崛旧黄鹱鳛榻Y(jié)核病常規(guī)檢測(cè)方法。

[1]陸再英，鐘南山.內(nèi)科學(xué)[M]第7版，北京：人民衛(wèi)生出版社，2008:43.

[2]楊光武，不同檢驗(yàn)方法在肺結(jié)核早期診斷中的應(yīng)用[J].航天醫(yī)學(xué)雜志，2012,23（3）,309-310.

[3]梁建琴，高華方，李洪敏，等.PCR-熒光探針?lè)z測(cè)臨床痰標(biāo)本結(jié)核分枝桿菌的可靠性研究[J].中國(guó)防癆雜志，2012,34(5):271-274.