馬麗莎，李麗春，謝文平，單 奇，劉書貴，尹 怡，戴曉欣，鄭光明

(中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院，珠江水產(chǎn)研究所/農(nóng)業(yè)部熱帶亞熱帶水產(chǎn)種質(zhì)資源利用與養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室(廣州)， 廣東 廣州 510380)

雌激素是一類新型環(huán)境激素類污染物，普遍存在于我國(guó)自然水體中[1-3]，其激素效應(yīng)是其他常見(jiàn)內(nèi)分泌干擾物的10 000～100 000倍[4]，能促發(fā)多種癌癥[5]，對(duì)人體健康具有嚴(yán)重的潛在威脅。由于雌激素可通過(guò)水生生物富集，危害生態(tài)安全和人類健康，因此養(yǎng)殖水域的生態(tài)安全問(wèn)題已成為社會(huì)關(guān)注的焦點(diǎn)。

目前，關(guān)于水環(huán)境中雌激素檢測(cè)報(bào)道多集中于海水、江河及城市污水[6-8]，尚未見(jiàn)養(yǎng)殖水體的報(bào)道。養(yǎng)殖水體的基質(zhì)成分與上述水體差異較大，如藻類較多、水質(zhì)粘性大、腐殖酸含量高等。雌酮(E1)、β-雌二醇(E2)、雌三醇(E3)是自然雌激素，炔雌醇甲醚(mestranol)、乙炔雌二醇(EE2)、己烯雌酚(DES)是人工合成的雌激素，它們都是口服避孕藥、畜牧養(yǎng)殖用藥的主要成分，也是水環(huán)境中安全隱患風(fēng)險(xiǎn)較高的雌激素。為加強(qiáng)我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境安全管理，建立上述6種雌激素在養(yǎng)殖水域中的檢測(cè)方法勢(shì)在必行。

雌激素的檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC/MS)及高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)[9-14]等。HPLC法具有一定的普遍性，但其檢出限較高； HPLC-MS/MS法與GC/MS法均具有較高的選擇性和靈敏度，但液質(zhì)很難排除基質(zhì)干擾[15]，且儀器價(jià)格昂貴；GC/MS法無(wú)基質(zhì)效應(yīng)且儀器價(jià)格適中，實(shí)驗(yàn)室普及率較高，但樣品需衍生化，操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)，使其實(shí)際應(yīng)用受到一定限制。近年來(lái)，通過(guò)分子極化和離子導(dǎo)電兩個(gè)效應(yīng)在短時(shí)間內(nèi)完成樣品加熱的技術(shù)，在樣品提取、消解、衍生等諸多領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用[16-21]。

為改進(jìn)GC/MS法衍生化的操作繁瑣，本工作擬采用微波輔助技術(shù)與GC/MS法結(jié)合分析養(yǎng)殖水體中的6種雌激素殘留，希望為養(yǎng)殖水體中痕量雌激素類物質(zhì)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和批量分析提供技術(shù)支持。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 7890A-5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：美國(guó)Agilent公司產(chǎn)品，配有電子電離源，HP-5MS柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：日本Eyela公司產(chǎn)品；GAST無(wú)油隔膜真空泵及12通道半自動(dòng)固相萃取裝置：美國(guó)嘉仕達(dá)公司產(chǎn)品；甲醇、乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷：均為色譜純，美國(guó)Tedia公司產(chǎn)品；Supelclean ENVI-18 SPE小柱(500 mg/6 mL)：德國(guó)Sigma-Aldrich公司產(chǎn)品；Oasis HLB 固相萃取柱(500 mg/6 mL)：美國(guó)Waters公司產(chǎn)品；G70F 20CN1L-DG(S0)家用微波爐：廣東格蘭仕集團(tuán)有限公司產(chǎn)品。

雌酮(E1)、雌三醇(E3)、炔雌醇甲醚(mestranol)、乙炔雌二醇(EE2)、β-雌二醇(E2)、己烯雌酚(DES)標(biāo)準(zhǔn)品：均為德國(guó)Dr.Ehrenstorfor公司產(chǎn)品；β-雌二醇-D2標(biāo)準(zhǔn)品(E2-D2)：美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品；己烯雌酚-D8標(biāo)準(zhǔn)品(DES-D8)：加拿大Toronto公司產(chǎn)品。

衍生化試劑：N,O-雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)/三甲基氯硅烷(TMCS)(99∶1，V/V)，德國(guó)r-Biopham公司產(chǎn)品；N-甲基-N-三甲基硅基三氟乙酰胺(MSTFA)：美國(guó)Regis公司產(chǎn)品。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液及標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制

準(zhǔn)確稱取適量的雌激素標(biāo)準(zhǔn)品，分別用甲醇溶解并稀釋，配制成濃度均為100 mg/L的單個(gè)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-20 ℃保存。準(zhǔn)確移取適量的單個(gè)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋、定容，配制成6種激素濃度均為1 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，于-20 ℃保存。

準(zhǔn)確稱取適量的內(nèi)標(biāo)，分別用甲醇溶解并稀釋，配制成濃度均為100 mg/L的內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-20 ℃保存。準(zhǔn)確移取適量的單個(gè)內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋、定容，配制成己烯雌酚-D8和雌二醇-D2濃度均為1 mg/L的混合內(nèi)標(biāo)工作液，于-20 ℃保存。

1.3 水樣的采集與預(yù)處理

采集的水樣保存于棕色瓶中，用HCl調(diào)至pH 4以避免微生物降解，保護(hù)水樣，置于4 ℃冰箱中保存。

取5 000 mL實(shí)際水樣，經(jīng)0.45 μm纖維素膜過(guò)濾。取1 000 mL水樣濾液，加入50 μL 1 mg/L的內(nèi)標(biāo)工作溶液，混合均勻。采用Supelclean ENVI-18 SPE固相萃取小柱，依次用12 mL甲醇、12 mL超純水活化平衡后上樣，控制過(guò)柱流速為3 mL/min。先用12 mL超純水淋洗SPE小柱，再用10 mL正己烷淋洗SPE小柱，速度為3 mL/min，棄去淋洗液。真空干燥30 min后，用18 mL正己烷-二氯甲烷溶液(1∶1，V/V)以1 mL/min的流速分3次洗脫。收集洗脫液，于50 ℃下氮?dú)獯蹈?，向吹干的殘留物中加?00 μL乙酸乙酯溶液，蓋塞并渦旋混合20 s，再加入100 μL MSTFA衍生化試劑，蓋塞并渦旋混合1 min，于700 W功率下微波衍生4 min，冷卻至室溫，待GC/MS分析。

1.4 實(shí)驗(yàn)條件

1.4.1色譜條件 色譜柱：HP-5MS柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；載氣：高純氦氣，純度大于99.999%，流速1.0 mL/min；進(jìn)樣口溫度250 ℃；采用脈沖不分流進(jìn)樣，脈沖壓力207 kPa，持續(xù)時(shí)間0.9 min，分流出口開啟時(shí)間1 min，進(jìn)樣體積1 μL；升溫程序：初始柱溫50 ℃，保持1 min，以20 ℃/min升至220 ℃，保持27 min，以20 ℃/min升至250 ℃，保持20 min。

1.4.2質(zhì)譜條件 離子源溫度230 ℃，四極桿溫度150 ℃，接口溫度250 ℃，溶劑延遲10 min，選擇離子監(jiān)測(cè)模式(SIM)。

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜條件的選擇

在m/z50～550范圍內(nèi)進(jìn)行全掃描，確定各組分的保留時(shí)間和特征離子。為降低干擾、提高靈敏度，采用選擇離子監(jiān)測(cè)模式，每個(gè)化合物選擇1個(gè)定量離子、3個(gè)定性離子。6種雌激素的保留時(shí)間、定性與定量離子及內(nèi)標(biāo)物列于表1。

2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用普通進(jìn)樣方式分析樣品中雌激素時(shí)，其重現(xiàn)性較差。這可能是由于雌激素為弱極性物質(zhì)，其分子中的羥基易受進(jìn)樣系統(tǒng)的吸附而損失；且雌激素高溫易分解，較高的進(jìn)樣口溫度可能導(dǎo)致目標(biāo)化合物的部分降解。而脈沖不分流進(jìn)樣方式通過(guò)瞬間提高進(jìn)樣口壓力的方式，減少了樣品在進(jìn)樣口的停留時(shí)間，降低了目標(biāo)化合物被吸附和分解的風(fēng)險(xiǎn)，可確保進(jìn)樣量的精確度，以保證雌激素峰組分的重現(xiàn)性，提高靈敏度、改善峰形，更適于痕量、易分解化合物的殘留分析。通過(guò)實(shí)驗(yàn)比較發(fā)現(xiàn)，脈沖不分流進(jìn)樣所得的目標(biāo)化合物重現(xiàn)性、靈敏度均比普通不分流進(jìn)樣的好，峰形也更尖銳。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇脈沖不分流進(jìn)樣模式。

表1 6種雌激素的保留時(shí)間、定性離子、定量離子與內(nèi)標(biāo)物Table 1 Retention times, qualitative ions, quantitative ions and internal standards of 6 estrogens

選擇合適的脈沖壓力是獲得目標(biāo)峰最佳靈敏度、準(zhǔn)確性及重現(xiàn)性的關(guān)鍵：脈沖壓力過(guò)小對(duì)改善目標(biāo)峰靈敏度、重現(xiàn)性的作用不大；過(guò)大會(huì)引起進(jìn)樣口隔墊過(guò)早損壞，導(dǎo)致進(jìn)樣口漏氣，且隔墊碎渣掉入襯管易污染襯管，導(dǎo)致雜峰多，干擾目標(biāo)物的測(cè)定，使重現(xiàn)性變差。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，目標(biāo)物靈敏度、重現(xiàn)性均隨脈沖壓力的增大而增大，但當(dāng)脈沖壓力大于207 kPa時(shí)，進(jìn)樣口隔墊受損過(guò)快。因此，經(jīng)綜合考慮，本實(shí)驗(yàn)選擇脈沖壓力為207 kPa。

2.3 SPE萃取條件的優(yōu)化

2.3.1SPE小柱的選擇 雌酮、雌三醇、炔雌醇甲醚、乙炔雌二醇、β-雌二醇、己烯雌酚均為疏水親脂性化合物。Oasis HLB小柱由親脂性的二乙烯苯和親水性的N-乙烯基吡咯烷酮混合而成，可保留親水和親脂兩方面的化合物，被廣泛應(yīng)用于飲用水、河流等自然水體中雌激素的殘留分析[1-5]。但實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，HLB小柱應(yīng)用于養(yǎng)殖水體中雌激素的殘留分析時(shí)，其回收率不穩(wěn)定，在50%～200%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD>30%，且背景干擾大。鑒于雌激素是弱極性化合物，本實(shí)驗(yàn)選用Supelclean ENVI-18 SPE小柱萃取養(yǎng)殖水體中的雌激素，獲得了較高的回收率88.5%～106%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.29%～11.9%，且背景干擾小。分析原因，養(yǎng)殖水體受漁業(yè)活動(dòng)影響較大，水體中的藻類、N、P等親水性雜質(zhì)含量普遍較高，而這些親水性雜質(zhì)可競(jìng)爭(zhēng)HLB小柱上的活性位點(diǎn)，影響雌激素在小柱上的富集，導(dǎo)致其回收率不穩(wěn)定。ENVI-18 SPE小柱主要通過(guò)目標(biāo)物的碳?xì)滏I同硅膠表面的官能團(tuán)產(chǎn)生非極性的范德華力來(lái)保留目標(biāo)物，非常適用于水樣中弱極性有機(jī)物的富集和純化，其碳含量高達(dá)17%，可對(duì)弱極性化合物產(chǎn)生更大的鍵合能力，有利于增強(qiáng)小柱對(duì)化合物的吸附能力，提高小柱的回收率和穩(wěn)定性。綜上所述，本實(shí)驗(yàn)選擇ENVI-18 SPE小柱富集樣品中的雌激素組分。

圖1 不同洗脫溶劑對(duì)6種雌激素回收率的影響Fig.1 Effects of elution solvent on the recoveries of 6 estrogens

2.3.2洗脫劑和淋洗溶劑的選擇 洗脫劑是決定回收率高低的關(guān)鍵因素。本實(shí)驗(yàn)比較了甲醇、乙腈、乙酸乙酯、正己烷-二氯甲烷溶液(1∶1，V/V)4種不同極性溶劑的洗脫效果，結(jié)果示于圖1。使用甲醇時(shí)，EE2與 mestranol的回收率過(guò)低，僅有50%左右；而使用乙腈時(shí)，EE2與 mestranol的回收率又過(guò)高，達(dá)170%以上。因此，甲醇、乙腈均不適于作為雌激素的洗脫溶液。使用乙酸乙酯和正己烷-二氯甲烷溶液作為洗脫劑時(shí)，各雌激素的回收率均在100%左右，可滿足實(shí)驗(yàn)要求，但乙酸乙酯的洗脫液顏色略呈黃色，圖譜基線沒(méi)有正己烷-二氯甲烷溶液的平整，雜峰也較多。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇正己烷-二氯甲烷溶液(1∶1，V/V)作為洗脫溶劑。

另外，由于養(yǎng)殖水樣基質(zhì)復(fù)雜，有必要在洗脫之前對(duì)ENVI-18 SPE小柱進(jìn)行淋洗。本實(shí)驗(yàn)先用12 mL超純水淋洗SPE小柱，除去富集在小柱上的親水性雜質(zhì)，再用10 mL脂溶性強(qiáng)的正己烷淋洗SPE小柱，除去小柱上色素等非極性雜質(zhì)，最后用正己烷-二氯甲烷(1∶1，V/V)溶液洗脫，從而獲得比較理想的色譜圖。

2.4 衍生條件的優(yōu)化

2.4.1衍生化方法的確定 傳統(tǒng)的雌激素衍生方法是烘箱加熱或水浴加熱，均是由外部熱源通過(guò)熱輻射由表及里進(jìn)行傳導(dǎo)式加熱，衍生反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)、衍生效率低且能耗高，極大地限制了GC/MS法的應(yīng)用。微波輔助衍生技術(shù)通過(guò)分子極化和離子導(dǎo)電兩個(gè)效應(yīng)對(duì)物質(zhì)直接加熱，消除了一般加熱過(guò)程中由于電熱板、空氣、容器壁的熱傳導(dǎo)和熱輻射造成的熱量損失，具有較高的傳熱效率。本實(shí)驗(yàn)采用該技術(shù)加速雌激素的衍生化反應(yīng)，與傳統(tǒng)加熱法的衍生效果對(duì)比圖示于圖2。可見(jiàn)，微波輔助衍生法所得6種雌激素衍生物的峰面積均大于烘箱加熱法，增強(qiáng)了GC/MS法檢測(cè)雌激素的靈敏度，微波衍生法的衍生化效率比烘箱加熱法的提高了50%左右，雌激素的衍生化時(shí)間從烘箱加熱的90 min縮短到4 min。

圖2 不同衍生方式對(duì)衍生效果的影響Fig.2 Effects of different derivatize methods

2.4.2衍生化試劑的選擇 分別選用MSTFA與BSTFA-TMCS(99∶1，V/V)兩種常用的硅烷化試劑與雌激素分子的羥基進(jìn)行硅烷化反應(yīng)。結(jié)果表明，MSTFA可與6種雌激素發(fā)生較好的衍生化反應(yīng)，而BSTFA-TMCS雖能與E1、E2、E3、DES的羥基進(jìn)行硅烷化反應(yīng)，但不與mestranol、EE2發(fā)生反應(yīng)。根據(jù)化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，推測(cè)其原因?yàn)閙estranol、EE2分子的脂族羥基碳鏈上連有其他基團(tuán)，BSTFA分子較大，不能與mestranol、EE2的反應(yīng)基團(tuán)有效結(jié)合，而MSTFA分子較小，不受空間位阻效應(yīng)的影響，能與之結(jié)合，得到硅烷化產(chǎn)物。因此，本實(shí)驗(yàn)選用MSTFA為衍生化試劑。此外，極性溶劑能更好地吸收微波，可增強(qiáng)衍生反應(yīng)效率。本實(shí)驗(yàn)考察了乙腈、乙酸乙酯和正己烷對(duì)雌激素衍生效率的影響，結(jié)果表明，當(dāng)乙酸乙酯作為衍生溶劑時(shí)，雌激素的衍生效率最高且穩(wěn)定性更好。因此，選用乙酸乙酯作為雌激素的衍生溶劑。

2.4.3微波衍生化方法的優(yōu)化 微波衍生技術(shù)是利用微波加熱的特性對(duì)樣品中的目標(biāo)化合物進(jìn)行衍生反應(yīng)。該方法優(yōu)化的關(guān)鍵因素是衍生化反應(yīng)時(shí)間：反應(yīng)時(shí)間過(guò)短，對(duì)待測(cè)物的衍生反應(yīng)不徹底；反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，衍生產(chǎn)物在微波輻照下會(huì)發(fā)生降解，且基體中的許多雜質(zhì)被衍生而生成更多的副產(chǎn)物，產(chǎn)生大量干擾。本實(shí)驗(yàn)在微波700 W時(shí)，比較了衍生化時(shí)間分別為2、3、4、5 min時(shí)，MSTFA的衍生化效率，結(jié)果示于圖3。可見(jiàn)，隨著衍生化反應(yīng)時(shí)間的增加，雌激素衍生化效率逐步提高，在4 min時(shí)達(dá)最大值，之后開始下降。為防止目標(biāo)化合物降解，保障其最佳的衍生化效率，本實(shí)驗(yàn)選擇的衍生化條件為700 W衍生4 min。

圖3 不同衍生時(shí)間對(duì)衍生效果的影響Fig.3 Effects of different derivatize times

2.5 線性關(guān)系、方法的檢出限

配制質(zhì)量濃度分別為1、2、5、25、50、125、250、500 μg/L的8個(gè)水平的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，取100 μL標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入50 μL混合內(nèi)標(biāo)使用液，氮?dú)獯蹈?，之后分別加入100 μL乙酸乙酯溶液及100 μL MSTFA衍生化試劑進(jìn)行衍生化。在選定的色譜條件和質(zhì)譜參數(shù)下分析，以目標(biāo)物的定量離子峰面積和相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的定量離子峰面積之比(y)為縱坐標(biāo)，以目標(biāo)物濃度(x，μg/L)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析，以信噪比(S/N)為3，結(jié)合回收率計(jì)算方法檢出限。結(jié)果表明，雌激素DES在2～500 μg/L，E2在1～500 μg/L，E1、E3、EE2、mestranol在5～500 μg/L范圍內(nèi)均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(R2)均大于0.999 3。6 種化合物的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限列于表2。

表2 6種雌激素的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限及3個(gè)添加水平的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)Table 2 Linear equations, correation coefficients (R2), limits of detection (LODs), recoveries and relative standard deviations (RSDs) of 6 estrogens in water for aquaculture spiked at three leves (n=6)

2.6 回收率與精密度

取1 L經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾的養(yǎng)殖用水，用上述方法測(cè)出目標(biāo)化合物含量，作為空白對(duì)照組。然后對(duì)同一水樣進(jìn)行3個(gè)不同濃度的加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，加標(biāo)量分別為0.01、0.05、0.1 μg/L，測(cè)定目標(biāo)化合物含量。扣除空白含量計(jì)算方法回收率，結(jié)果列于表2。6種雌激素的平均回收率為88.5%～106%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.29%～11.9%，均小于15%。因此，所建立的方法具有較好的準(zhǔn)確度和精密度，可滿足分析要求，所得的加標(biāo)回收色譜圖示于圖4。

2.7 實(shí)際樣品的檢測(cè)

將本實(shí)驗(yàn)建立的方法用于20份池塘養(yǎng)殖水體中雌激素殘留檢測(cè)，在其中3份池塘養(yǎng)殖水體中檢出己烯雌酚殘留，含量分別為0.65、0.80和2.8 ng/L，其余雌激素組分無(wú)檢出。己烯雌酚作為人造求偶素，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中常用作生長(zhǎng)促進(jìn)劑。 由此可見(jiàn)，漁業(yè)行為對(duì)養(yǎng)殖水體雌激素含量有影響，養(yǎng)殖水體環(huán)境中的雌激素可能由漁業(yè)生產(chǎn)者因盲目追求高產(chǎn)量低成本，不恰當(dāng)使用求偶素、排卵素等藥物而引起。

3 結(jié)論

建立了微波輔助衍生-氣相色譜-質(zhì)譜法檢測(cè)養(yǎng)殖水體中6種痕量雌激素，該方法利用微波加熱的特性衍生樣品中的目標(biāo)化合物，改進(jìn)了傳統(tǒng)GC/MS法在樣品前處理中衍生化操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)的不足，使衍生化時(shí)間從烘箱加熱的90 min縮短到4 min，提高了樣品前處理的效率，具有高效、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、節(jié)能環(huán)保的優(yōu)點(diǎn)，可滿足養(yǎng)殖水體中痕量雌激素類物質(zhì)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的需要，適用于養(yǎng)殖水體中雌激素類化合物的批量分析。

[1] 吳世閩,賈瑗,彭輝,等. 遼東灣海水中甾體雌激素的檢測(cè)及生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)[J]. 中國(guó)環(huán)境科學(xué)，2011,31(11):1 904-1 909.

WU Shimin, JIA Ai, PENG Hui, et al. Determination and risk assessment of steroidal estrogens in Liaodong Bay, China[J]. China Environmental Science, 2011, 31(11): 1 904-1 909(in Chinese).

[2] 宋文婷,陸光華,李湘鳴,等. 長(zhǎng)江(南京段)環(huán)境雌激素的污染特征[J]. 生態(tài)環(huán)境學(xué)報(bào),2009,18(5):1 615-1 619.

SONG Wenting, LU Guanghua, LI Xiangming, et al. Characters of environmental estrogen pollution in Yangtze River (Nanjing section)[J]. Ecology and Environmental Sciences, 2009, 18(5): 1 615-1 619(in Chinese).

圖4 選擇離子監(jiān)測(cè)模式下，養(yǎng)殖用水的加標(biāo)回收色譜圖Fig.4 Selective ion monitor (SIM) chromatograms of water for aquaculture spiked with estrogens

[3] 田懷軍,舒為群,邱志群,等. 長(zhǎng)江流域某市飲用水雌激素污染物初步研究[J]. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2004,26(19):1 751-1 754.

TIAN Huaijun, SHU Weiqun, QIU Zhiqun, et al. Primary study of estrogenic pollutants in drinking water in a city on the Yangtze River[J]. Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae, 2004, 26(19): 1 751-1 754(in Chinese).

[4] HANSELMAN T A, GRAETZ D A,WILKIE A C. Manure-borne estrogens as potential environmental contaminants: a review[J]. Environmental Science Technology, 2003, 37(24): 5 471-5 478.

[5] FEIGELSON H S, HENDERSON B E. Estrogens and breast cancer[J]. Careinogenesis, 1996, 17(11): 2 279-2 284.

[6] QUINTANA J B, CARPINTEIRO J, RODR′IGUEZ I, et al. Determination of natural and synthetic estrogens in water by gas chromatography with mass spectrometric detection[J]. Journal of Chromatography A, 2004, 1 024(1/2): 177-185.

[7] LIU S, YING G G, ZHAO J L, et al. Trace analysis of 28 steroids in surface water, waste water and sludge samples by rapid resolution liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A, 2011, 1 218(10): 1 367-1 378.

[8] CHEN B B, HUANG Y L, HE M, et al. Hollow fiber liquid-liquid-liquid microextraction combined with high performance liquid chromatography-ultraviolet detection for the determination of various environmental estrogens in environmentaland biological samples[J]. Journal of Chromatography A, 2013, 1 305(1): 17-26.

[9] 廖濤,吳曉翠,王少華,等. 固相萃取-氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用法同時(shí)檢測(cè)水體中9種環(huán)境雌激素[J]. 分析化學(xué)研究簡(jiǎn)報(bào),2013,41(3):422-426.

LIAO Tao, WU Xiaocui, WANG Shaohua, et al. Simultaneous detection of nine kinds of estrogens in water by solid phase extraction coupled with gas chromatography-mass spectrometry[J]. Chinese Journal of Analytical Chemistry, 2013, 41(3): 422-426(in Chinese).

[10] 譚麗超,葛峰,單正軍,等. 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定污水處理廠水樣中的雌激素[J]. 生態(tài)與農(nóng)村環(huán)境學(xué)報(bào),2011,27(5):86-92.

TAN Lichao, GE Feng, SHAN Zhengjun, et al. Determination of estrogens in water samples from wastewater treatment plant using ultra-performance liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry method[J]. Journal of Ecology and Rural Environment, 2011, 27(5): 86-92(in Chinese).

[11] KUMIRSKA J, PLENIS ALINA,UKASZEWICZ P, et al. Chemometric optimization of derivatization reactions prior to gas chromatography-mass spectrometry analysis[J]. Journal of Chromatography A, 2013, 1 296(12): 164-178.

[12] RAO K F, LEI B L, LI N, et al. Determination of estrogens and estrogenic activities in water from three rivers in Tianjin, China[J]. Journal of Environmental Sciences, 2013, 25(6): 1 164-1 171.

[13] 趙云芝,錢蜀,謝永洪,等. 固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水中6種雌激素[J]. 中國(guó)環(huán)境監(jiān)測(cè),2013,29(1):107-111.

ZHAO Yunzhi, QIAN Shu, XIE Yonghong, et al. Determination of six estrogens in water using solid phase extraction-ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Environmental Monitoring in China, 2013, 29(1): 107-111(in Chinese).

[14] 那廣水,陳彤,張?jiān)旅?等. SPE-HPLC-MS/MS法檢測(cè)水體和沉積物中六種甾體雌激素[J]. 海洋環(huán)境科學(xué),2011,30(3):424-427.

NA Guangshui, CHEN Tong, ZHANG Yuemei, et al. Determination of six estrogens in water and sediment by SPE-HPLC-MS/MS[J]. Marine Environmental Science, 2011, 30(3): 424-427(in Chinese).

[15] YAN W, ZHAO L X，F(xiàn)ENG Q Z, et al. Simultaneous determination of ten estrogens and their metabolites in waters by imroved two-step SPE followed by LC-MS[J]. Chromatographia, 2009, (69): 621-628.

[16] 郭雙雙,楊利民,張一鳴,等. 微波輔助萃取人參總皂苷與單體皂苷含量分析[J]. 食品科學(xué),2015,36(2):1-5.

GUO Shuangshuang, YANG Limin, ZHANG Yiming, et al. Determination of contents of total saponins and monomer saponins inPanaxginsengby microwave-assisted extractiion method[J]. Food Science, 2015, 36(2): 1-5(in Chinese).

[17] 賴鶯,林睿,蔡鷺欣,等. 微波輔助萃取-氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定丙烯酸樹脂中9種殘余單體[J]. 色譜,2012,36(1):21-26.

LAI Ying, LIN Rui, CAI Luxin, et al. Determination of 9 residual acrylic monomers in acrylic resins by gas chromatography-mass spectrometry coupled with microwave assisted extraction[J]. Chinese Journal of Chromatography, 2012, 36(1): 21-26(in Chinese).

[18] 李攻科,何小青,張展霞. 微波消解同時(shí)衍生化GC-MS法測(cè)定血漿中脂肪酸的研究[J]. 分析測(cè)試學(xué)報(bào),2000,19(1):16-18.

LI Gongke, HE Xiaoqing, ZHANG Zhanxia. Determination of fatty acids in plasma sample by GC-MS using microwave-assisted digestion and derivatization[J]. Journal of Instrumental Analysis, 2000, 19(1): 16-18(in Chinese).

[19] 林維宣,董偉峰,陳溪,等. 氣相色譜-質(zhì)譜法同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物組織中多種激素類獸藥的殘留量[J]. 色譜,2009,27(3):294-298.

LIN Weixiong, DONG Weifeng, CHEN Xi, et al. Determination of hormonemulti-residues in animal tissues by gas chromatography-massspectrometry[J]. Chinese Journal of Chromatography, 2009, 27(3): 294-298(in Chinese).

[20] ZUO Y, ZHANG K, LIN Y. Microwave-accelerated derivatization for the simultaneous gas chromatographic-mass spectrometric analysis of natural and synthetic estrogenic steroids[J]. Journal of Chromatography A, 2007, 1 148(2): 211-218.

[21] MOMENBEIK F, KHORASANI J H. Separation and determination of sugara by reversed-phase high-performance liquid chromatography after pre-column microwave-assisted derivatization[J]. Analytical and Bioanalytical Chemistry, 2006, 384(3): 844-850.