李鳳迪，高丹丹，李明生，陳士恩，馬忠仁

（西北民族大學生命科學與工程學院，甘肅蘭州730124）

0 引言

雞肉富含營養(yǎng)，有滋補保養(yǎng)的功效，中醫(yī)學研究認為雞肉具有溫中益氣、補虛填精、健脾養(yǎng)胃、強筋骨、活血脈等功效。隨著禽類養(yǎng)殖業(yè)的大力發(fā)展，我國每年雞的屠宰量日益增加，但是大量的雞血作為廢物排放，難以進行資源利用，還污染環(huán)境。在以動物血作為蛋白質和礦物質來源方面，我國利用牛血比較廣泛，提取蛋白并利用活性物質，但雞血的利用率比較低[1]。雞血作為動物性蛋白質血資源，同樣富有蛋白質、脂類、氨基酸、無機鹽和多種酶類。雞血內營養(yǎng)物質種類繁多、生物學效價較高，以雞血作為原料提取與利用前景廣闊。因此，對雞血清在飼料工業(yè)、醫(yī)藥等方面的進一步開發(fā)利用進行了闡述。

1 雞血清成分的分析

將雞血通過離心技術分為血漿和血細胞，得到的血漿再進行冷凍處理后，利用快速融解法除去纖維蛋白原分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原即是血清。血漿約占血液總量的55%，其中含8%的血漿蛋白，通過鹽析法可將其分為3類：白蛋白、球蛋白和纖維蛋白原，其中纖維蛋白原所占比例最小，所以最終得到的血清為60%～80%。

血清中有90%～91%的水，6.5%～8.5%的蛋白質，2%左右的低分子量蛋白質，近年來對血清中的低分子量蛋白質研究較多，但在利用血清之前需要進行過濾提純，除去血清中的血清蛋白和免疫球蛋白，最后對提純的低分子量蛋白進行試驗。Bjorhall K等人[2]對目前多種去除血清中大蛋白的方法進行了分析研究，發(fā)現除蛋白的試劑盒更適用于試驗使用，該試劑盒操作簡易、方便，因僅供一次性使用，所以大大降低了樣品的交叉污染，其中多維親和層析柱還可同時除去多種大蛋白。因此，血清樣品利用之前要與多種技術相結合進行預處理，之后再進行相關研究。

雞血與其他牲畜血比較，雞血清蛋白低于牛血、豬血。雞血中蛋白質分子的質量低但含水量高，同時雞血細胞中的必需氨基酸含量在畜禽類中含量最高，比較容易分離血清中低分子量的蛋白質。因此可以想象，雞血清的應用前景廣闊。

2 雞血清中蛋白質分離純化

通過離心技術可將血液分離為血漿和血細胞，而雞血漿中必需氨基酸含量與牛血漿中的含量相近，略低于豬血漿的量，同時雞血細胞中必需氨基酸的含量在畜禽類中最高。試驗著重利用雞血清中的蛋白質，其中的血清蛋白、免疫球蛋白、膽堿酯酶的提取，為進一步的資源利用、食品開發(fā)和醫(yī)療方面打下基礎，從而避免血液資源的浪費，保護了環(huán)境。

2.1 雞血清蛋白的提取與純化

此階段中血清蛋白的提取采用硫酸銨鹽分級沉淀法，而國內的應月等人[3]利用正交試驗，初步得到了雞血清蛋白的最佳提取條件：當無機鹽硫酸銨添加量0.35 g/mL，正辛酸鈉添加量0.006 8 g/mL時蛋白質的提取值最高；但在蛋白質提取過程中影響最大的因素仍為pH值，其次才是硫酸銨和正辛酸鈉的添加量。通過考馬斯亮藍法在最優(yōu)條件下測定出的血清蛋白中蛋白質含量74.05%（V/V）[4]；而進一步測定出乳化能力值（EC）0.52，乳化穩(wěn)定性值（ES）0.48。

雞血清蛋白提取操作流程：雞血的采集→加抗凝劑→離心提取血清→加適量無機鹽、調節(jié)pH值→靜置→再次離心→分離沉淀→提純干燥→血清蛋白粉。

2.2 雞血清免疫球蛋白的提取

血清免疫球蛋白具有特異性抗體，經初步試驗，發(fā)現免疫球蛋白可以在不產生抗藥性的同時提高雛雞的存活率。因此，目前大量試驗在用免疫球蛋白制劑對肉仔雞進行研究，期望尋找到抗生素替代品。

采用硫酸銨鹽析分級沉淀法提取雞血清免疫球蛋白。首先，用20%飽和度的硫酸銨結合血纖維蛋白原內雜質并去除，再用50%飽和度的硫酸銨提取血清球蛋白，再用33%飽和度的硫酸銨提取、純化血清-γ球蛋白[5-7]；將提取出的免疫球蛋白裝入透析袋內，加入大量生理鹽水進行透析脫鹽；用雙縮脲法制作梯度濃度的雞血清蛋白，標記后使用755型紫外分光光度計檢測并做出標準曲線，同時檢測雞血清免疫球蛋白的濃度并進行，最后滅菌分裝，完成后開始進行下一步試驗或放入冰箱內備用。試驗所得的免疫球蛋白為乳白色液體，顏色較透明，檢測蛋白質含量約為39.5 mg/mL。為之后的試驗用藥品和試驗用飼料，提供初步的試驗處理最佳條件。

2.3 雞血清膽堿酯酶的提取

以血清為材料提取農藥殘留快速檢測酶制劑膽堿酯酶[8-9]。近年來，農藥的大量使用和不合理的使用，嚴重危害了人們的健康，尤其是農副產品的農藥殘留成為熱點問題，其中以有機磷農藥殘留最為嚴重。因此創(chuàng)新農藥殘留速檢方案是如今的首要任務。傳統(tǒng)的農藥殘留檢驗辦法主要是氣相色譜-質譜法和高效液相色譜質譜法，但因二者檢測儀器昂貴、操作過程復雜費時，導致檢測成本高昂，還不利于現場監(jiān)測。而酶抑制法作為新創(chuàng)方法，通過特定酶對有機磷酸和氨基甲酸酯類農藥的敏感程度來檢驗產物中的農藥殘留量，具有高效、簡便、靈敏、成本低等優(yōu)點，備受廣大生產基地、市場和基層監(jiān)督部門的喜愛，因此酶抑制法近期得到了快速發(fā)展。

從雞血清中提取膽堿酯酶，需經由硫酸銨鹽析沉淀、透析袋透析脫鹽和大孔吸附樹脂吸附3項處理，再通過凝膠層析及冷凍干燥等步驟進行純化，來對膽堿酯酶的粗酶液提取完成預處理[8]。粗酶液在經過上述處理加工步驟后，再進行純化評價，評級合格后全部完成，可得膽堿酯酶的酶粉成品。該試驗制得的膽堿酯酶屬于檢測用酶，在農藥檢測方面起很大作用。

3 雞血清作為蛋白飼料的應用

動物血液通過相應加工處理，可制作一種蛋白質飼料——血粉。血粉的營養(yǎng)成分豐富，含粗蛋白80%以上，具有良好應用前景，是一種優(yōu)質動物性蛋白飼料。而血清中主要包含血清白蛋白和血清免疫球蛋白，血清免疫球蛋白在免疫應答反應中能夠產生免疫球蛋白（Ig），Ig屬于血清中的主要抗體成分，占血清免疫球蛋白的78%左右。因此，在飼養(yǎng)過程中加入血清免疫球蛋白，能夠在不發(fā)生抗藥性的前提下提高仔雞成活率。

雞血清作為飼料蛋白，主要是作為添加物加入到飼料中，同時血清免疫球蛋白制劑作為抗生素的替代品，可通過血清免疫球蛋白的制備所得。通過李蕰玉等人[7]的試驗研究，從健康的肉雞體內提取的血清所制備的制劑，用于仔雞的飼養(yǎng)中時，可使雛雞產生被動免疫，從而增強雛雞對常見細菌（如沙門氏菌、副嗜血桿菌等）的抵抗力。因此，雞血清在促進仔雞成長的同時，還提高了仔雞的成活率。

4 雞血清在醫(yī)學工業(yè)的應用

采用一定的技術從中提取免疫球蛋白、膽堿酯酶、丁酰膽堿酯酶、VA醇、淀粉酶等一系列生物活性物質。國外有文獻中指出，現已應用多種物理化學方法從血液中分離出近150種產物。

4.1 雞血清提取丁酰膽堿酯酶

試驗以通過離心提純雞血清得到的膽堿酯酶，繼續(xù)進行農藥殘留相關敏感性檢驗，檢驗中同樣采用Ellman法。探究雞血清丁酰膽堿酯酶的酶學特性及其對有機磷和氨基甲酸酯類農藥的敏感性[8]，為農藥殘留的快速檢驗提供新的敏感酶源。雖然很多報道指出，丁酰膽堿酯酶對農藥存在敏感性，但大多數試驗研究對象都為馬血清提取的丁酰膽堿酯酶，并沒有用雞血清進行比較。而李維[10]在試驗前期對多種動物血清內丁酰膽堿酯的農藥敏感性比較中發(fā)現，雞血清內丁酰膽堿酯的農藥敏感程度優(yōu)于其他試驗數據的禽畜類動物血清。并提供了體外丁酰膽堿酯酶對農藥敏感性的基礎研究結果，雞血清中丁酰膽堿酯酶的最適反應活性為35℃，pH值8.0；對農藥的敏感測試反應中不存在過量底物的抑制效應，尤其對毒扁豆對堿性表現敏感試驗中發(fā)現相比于馬血清的丁酰膽堿酯酶，雞血清的丁酰膽堿酯酶對鹽酸多奈哌齊較為敏感。在通過試驗中5種農藥對2種酶活性抑制率的比較后發(fā)現，除了克百威外，雞血清中的丁酰膽堿酯酶對其他4種農藥的敏感性均高于馬血清中的丁酰膽堿酯酶。因而，雞血清中丁酰膽堿酯酶在含量豐富的同時對多種農藥的敏感程度還高，必然可以作為檢測源應用于酶抑制法檢驗中。

4.2 雞血清淀粉酶多態(tài)性在育種中的應用

雞血清同工酶是雞生理代謝過程中的重要酶類，其同時存在于血液和細胞中，具有極為重要的生理功能。雞血清淀粉酶多態(tài)性作用于家雞品質特性的選擇、快速選育中遺傳指標的確認和輔助標記的檢測[11]，如今在家雞血清酶研究中，人們應用較多的是堿性磷酸酶、酯酶和淀粉酶。其中，由于淀粉酶染料低廉，同時又有重要的應用價值，因而受到人們的廣泛關注與利用。

Amy-1是常染色體上的一對等顯性基因，Amy-2是由一對顯隱性基因控制的，Amy-3則是由顯性等位基因控制，其中Amy-1與Amy-2屬同一種酶，Amy-1的基因型分布具有品種和品質的特異性。王延峰等人[11]就多態(tài)性淀粉酶進行了綜述。結合了國外的Hashiguichi T等人[12]與國內學者肖朝武[13]、鄒平[14]，張細權等人[15-17]的研究，利用標記輔助選擇應用在家畜育種實踐，通過分析Amy-1血液蛋白質位點，對家禽遺傳有了可改良的基礎。盡管研究表明了Amy-1對家禽的產蛋率、肉質品質都有影響，但是由于蛋白質多態(tài)性與數量相關經濟性建立較為困難，導致大量研究仍集中于低遺傳力性狀及其他經濟性狀篩選適宜的分子標記上，遠落后于大型的家畜類研究，盡管如此，該研究還是大大促進了家禽產業(yè)的發(fā)展。

4.3 雞血清抗腫瘤活性研究

經常用到細胞培養(yǎng)的血清有牛、羊血清，都可為細胞生長提供營養(yǎng)成分。中醫(yī)古書記載雞血味咸、無毒、性熱，有益氣補血、解毒通絡的作用?，F代醫(yī)學研究中常用于增強免疫、輔助腫瘤治療等方面。劉翠翠等人[18-19]通過雞血體內外試驗，初步證實雞血清具有抗腫瘤活性的功能，其試驗選取A549人肺癌細胞，測試雞血清在小鼠體內和體外對其的影響，以腫瘤生長抑制率作為雞血清抗腫瘤活性的評價指標，再以臟器指數作為雞血清免疫活性的評價指標。體外試驗結果表明[20-23]，雞血清對其具備一定的殺傷效果，對腫瘤細胞造成損傷的同時伴隨細胞碎片產生，并對人乳腺癌，胃癌也進行了體外試驗，結果表明雞血清對其也有殺傷作用。體內研究是通過3種不同的給藥途徑對腫瘤生長的影響，結果表明經灌胃途徑效果最好。因此，為雞血清作為功能食品、藥品的開發(fā)提供了一定的試驗依據。

5 雞血清相關應用的前景展望

盡管雞血資源非常豐富，但就目前世界范圍來看，食用目的的雞血很少，而雞血清的利用率就更低了。雞血應用除飼料加工和作坊式食品加工等方面外，食品和醫(yī)藥上幾乎都是空白的，所以開發(fā)可食性的動物血液尤為重要，值得重視，因此目前對雞血清開發(fā)研究的主要方向有：①積極研究開發(fā)可食性的血清制品；②分離血清蛋白作為功能性食品添加劑；③血清免疫球蛋白制劑作為免疫力低下人群的補充劑；④積極研究開發(fā)有藥用價值的血清制品；⑤做好血液資源的利用，減少浪費，防止血液污染，保護環(huán)境；⑥結合國外產品和樣品，融合相關技術，不斷創(chuàng)新，開發(fā)新的技術、設備。

綜上所述，雞血清的開發(fā)與利用仍具有廣闊的前景，試驗僅為雞血資源和其他牲畜血液資源的充分利用提供參考，以期雞血在食品、醫(yī)療方面的開發(fā)得到快速發(fā)展，提高血液資源的利用率，減少浪費，做到環(huán)境保護。