郁再洛 （廣西凌云縣動物疫病預(yù)防控制中心 533199）

1 試劑因素

試劑選擇是保證抗體檢測質(zhì)量的關(guān)鍵要素，但不同廠家的試劑在使用效果上仍存在差異，在購買與ELISA檢測相關(guān)試劑時應(yīng)引起注意，盡量購買與ELISA檢測試劑盒相配套的化學(xué)試劑，注意ELISA檢測試劑盒相配套的化學(xué)試劑生產(chǎn)日期及保存環(huán)境溫度。保存方式不對均會影響ELISA檢測結(jié)果，過期的試劑也會出現(xiàn)假陽性[1]。

2 樣品因素

被檢測的樣本應(yīng)該是新鮮的，尤其是血清樣本，在采集過程中，應(yīng)使用無菌采集管和采集針，分離血清后要分裝到無菌EP管中，由于被檢樣品的污染可以導(dǎo)致ELISA敏感性和準確性降低。因此，采集樣品時應(yīng)注意無菌操作，減少被檢驗品的污染。被檢樣品的保存溫度要適宜。尤其是抗體檢測，樣品要進行分裝若干份，嚴禁反復(fù)凍融樣品，被檢樣品在反復(fù)凍融過程中會破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，在檢測過程中易形成假陽性，因此，被檢樣品在嚴禁反復(fù)凍融。

3 人為操作因素

人為因素也是影響獸醫(yī)實驗室抗體檢測結(jié)果的主要因素，人為因素主要表現(xiàn)在加樣、溫育、洗板、顯色、結(jié)果判定等眾多因素均可以影響實驗結(jié)果。

3.1 加樣操作因素

不同類型抗體檢測技術(shù)被應(yīng)用于動物傳染性疾病抗體效價檢測中，在檢測過程中加樣成為影響動物傳染性疾病抗體效價主要因素。尤其在添加樣品過程中，一定要注意加樣過程中不能出現(xiàn)氣泡，加樣要均勻，加樣過程中一定要定量，一般為50μl樣品，輕輕加到被檢樣品孔。另外，要注意樣品在檢測前一定要解凍完全，樣品在使用之前提前拿出來，在室溫解凍后，混合均勻后，在進行檢測。

3.2 孵育時間與溫度

ELISA檢測相關(guān)抗體時，被檢樣品在加完后，一般進行孵育，使被檢樣品和所包被抗原或者抗體更好的結(jié)合，在被檢樣品和所包被抗原或者抗體更好的結(jié)合時需要合適溫度與時間。不同類型抗體檢測過程中應(yīng)參照說明書要求進行孵育，孵育時間和溫度嚴格按照說明書推薦進行操作。使ELISA包被的抗原或者抗體失活后，使被檢樣品不能與抗體或者抗原結(jié)合形成抗原符合物，嚴重影響實驗結(jié)果。

3.3 洗板次數(shù)因素

ELISA檢測相關(guān)抗體時，加完二抗進行孵育后需進行洗板，一般情況性有手工洗板和機器洗板兩種方式。尤其在洗板過程中，洗滌次數(shù)應(yīng)該合理，洗滌次數(shù)過多容易洗掉反應(yīng)結(jié)合的復(fù)合物，洗板次數(shù)過少導(dǎo)致洗滌不干凈，容易造成二抗稀釋液的殘留，影響反應(yīng)結(jié)果。在洗滌完后注意拍板，把多余洗滌液甩出去，以免影響實驗結(jié)果。

3.4 結(jié)果判定因素

在檢測過程中，顯色反應(yīng)結(jié)束，加終止液，將酶標板放在酶標儀上讀取結(jié)果要在15min內(nèi)完成，設(shè)定的波長要與試劑說明書保持一致，酶標儀使用前先預(yù)熱15～30min后，空白板自檢1～2次再進行樣品測試[2]。

4 環(huán)境因素

溫度、濕度等外界的環(huán)境對ELISA檢測結(jié)果影響極大。實驗室溫度過高或過低都會影響試劑的穩(wěn)定性、敏感性和樣品與試劑的有效結(jié)合，實驗室檢測時適宜的溫度是20～25℃。

綜上所述，用不同類型的ELISA檢測動物相關(guān)傳染性疾病抗體效價時，操作過程中應(yīng)嚴格按照說明書進行操作，避免出現(xiàn)不良因素影響實驗結(jié)果，因此，在實驗過程中嚴格進行操作，減少誤差，提高實驗的準確性。

參考文獻：

[1]王奧.化學(xué)實驗室檢測結(jié)果質(zhì)量控制的影響因素及對策[J].化工設(shè)計通訊,2017,43(2):125,143.

[2]李清竹.影響血凝和血凝抑制試驗結(jié)果的因素[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī),2012(5):70.