□ 鄒振宇 汪恩婷 楊 皓 重慶市計量質(zhì)量檢測研究院

ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的檢測原理主要是通過酶的催化反應(yīng)，以及抗原體在反應(yīng)過程中的高度特異性，對食品進(jìn)行安全檢測，能夠?qū)⒖贵w和抗原全部吸附到被檢食品表面中，保證其免疫活性，進(jìn)行準(zhǔn)確分析。ELISA酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)從20世紀(jì)90年代開始應(yīng)用推廣。隨著技術(shù)的成熟發(fā)展，其檢測靈敏性也相繼提升，從而在食品檢測中廣泛應(yīng)用。

1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在食品檢測中的有效應(yīng)用

1.1 農(nóng)藥殘留檢測

農(nóng)藥的使用會給食品成品、半成品或原材料留下少量農(nóng)藥降解物質(zhì)、毒性代謝物以及農(nóng)藥原體等，上述物質(zhì)都屬于農(nóng)藥殘留。在新時期食品問題中，農(nóng)藥殘留問題占據(jù)較大比重，對于我國食品出口產(chǎn)生一定影響，為此檢測食品農(nóng)藥殘留擁有重要意義。從化學(xué)結(jié)構(gòu)角度分析，農(nóng)藥屬于小分子物質(zhì)，不具備免疫性，是一種半抗原。檢測農(nóng)藥殘留時，應(yīng)該率先掌握農(nóng)藥結(jié)構(gòu)，并制訂抗原合成方案，通過雜交瘤技術(shù)檢測農(nóng)藥小分子。同時，應(yīng)用ELISA能夠有效檢測有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和有機(jī)磷等類型的農(nóng)藥[1]。檢測有機(jī)磷農(nóng)藥時可以選擇合成不同種類的半抗原，通過免疫獲取抗體，利用ELISA進(jìn)行檢測，最終檢測出IC50的含量是2 5 ng/m L，最低含量為2 ng/mL，檢測特異性較好，在有機(jī)磷農(nóng)藥中沒有交叉反應(yīng)出現(xiàn)。由此可見，ELISA在檢測有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類的農(nóng)藥中優(yōu)勢較為突出。

1.2 違禁藥物檢測

檢測食品過程中，可能會發(fā)現(xiàn)各種殘留獸藥，例如激素類藥物、抗球蟲類藥物、磺胺類藥物以及抗生素類藥物等。利用ELISA技術(shù)進(jìn)行檢測較為靈敏、便捷，能夠?qū)⒑哿繗埩羲幬锓治鲎兂蓪?shí)驗(yàn)室中的常規(guī)分析技術(shù)，對幾十種甚至上百種藥物進(jìn)行同時檢測，是檢測大量藥品過程中頻繁使用的技術(shù)手段。隨著ELISA的不斷發(fā)展，專用酶標(biāo)儀與試劑盒種類逐漸增多，應(yīng)用技術(shù)也愈發(fā)成熟。比如，瘦肉精是世界范圍內(nèi)被禁止應(yīng)用的一種催化生長劑，本質(zhì)上是針對腎上腺素受體的一種激動劑，其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，只有在加熱到170 ℃的情況下，才會開始分解。因此，單純依靠烹調(diào)加熱的方法，無法有效分解瘦肉精，一旦被人們誤食，會造成無法挽回的后果，可能出現(xiàn)心悸、頭暈等癥狀。假如長時間食用，會在人體形成大量毒素積累，導(dǎo)致畸形、癌癥等問題的發(fā)生，為此需要利用ELISA技術(shù)進(jìn)行科學(xué)檢測。通過ELISA法檢測擁有快速、敏感、準(zhǔn)確等優(yōu)勢。例如，乙烯雌酚是人工合成雌激素藥物，擁有較強(qiáng)的副作用，會導(dǎo)致人體內(nèi)出現(xiàn)腫瘤或基因突變等問題。相關(guān)研究者應(yīng)用生物素與親和素兩者的穩(wěn)定性和高度特性等原理，對雙抗體夾心ELISA法進(jìn)行研究，利用生物素標(biāo)記抗體，最終檢測范圍是0.25～15.6 ng/mL，最低限制是0.125 g/mL。

1.3 生物毒素檢測

生物毒素實(shí)質(zhì)就是產(chǎn)生菌在一定的環(huán)境狀態(tài)下衍生出來的代謝物，盡管食品加工過程中擁有加熱和烹調(diào)等步驟，但卻依然無法徹底打破毒素內(nèi)部結(jié)構(gòu)，嚴(yán)重影響食用者身體健康[2]。例如：黃曲霉毒素?fù)碛休^強(qiáng)致癌性和制毒性，我國針對其在食品中的含量進(jìn)行了嚴(yán)格的管控。相關(guān)研究人員在利用ELISA分析法檢測黃曲霉素時將酶標(biāo)抗原和黃曲霉素B1抗體融合到一起，通過抗原產(chǎn)生的酶催化顯色反應(yīng)和免疫反應(yīng)確定B1具體成分。該種檢測方式準(zhǔn)確性高、操作步驟簡單、投入成本低，可以同時檢測大量待測物質(zhì)。食品安全檢測中，過敏性物質(zhì)殘留的檢測也十分重要，引起了社會的廣泛關(guān)注。國外研究人員通常使用競爭性ELISA法來識別大豆肽，利用單克隆抗體進(jìn)行測定時的范圍是24～72 ng/mL，最低限度是8 ng/mL，重復(fù)性較好。

2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的具體應(yīng)用問題和解決措施

2.1 酶聯(lián)免疫吸附檢測的主要問題

ELISA檢測的方法擁有較高的靈敏度，無需進(jìn)行反復(fù)處理，此外還擁有檢測成本低、操作便捷、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，因此廣泛應(yīng)用于食品安全檢測當(dāng)中。但是因?yàn)榧夹g(shù)方面的限制，在檢測過程中還存在一定問題，比如制備抗體困難，在選擇試劑的過程中擁有較高的要求，不能對多種物質(zhì)進(jìn)行同時檢測，對化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)以及低分子量物質(zhì)進(jìn)行分析時存在一定的困難，在對物質(zhì)結(jié)構(gòu)檢測過程中容易出現(xiàn)交叉反應(yīng)等。

2.2 解決對策

針對上述問題，可以從以下幾個方面進(jìn)行有效改善。首先是改變制備抗體的方法，結(jié)合待測物實(shí)際特性，合理利用各種學(xué)科知識，融合立體化學(xué)、計算機(jī)模擬和組合化學(xué)等方法，建立科學(xué)的評價模型，提高篩選工作的準(zhǔn)確性和篩選效率。其次，提升克隆抗體親和性，分析多種檢測對象。在合成抗原時，可以通過控制條件，將所有合成抗原體共同針對同一種類型抗體，能夠在一次實(shí)驗(yàn)中檢驗(yàn)出多種物質(zhì)，避免出現(xiàn)假陽性與交叉反應(yīng)等問題。在實(shí)際檢測中，為了避免發(fā)生假陽性等問題，可以將一些明膠類物質(zhì)和牛血清蛋白添加到包被液當(dāng)中，同時提前將吐溫-20添加到洗滌液內(nèi)，能夠有效預(yù)防檢測中因?yàn)榉翘禺愋晕皆斐傻牟涣加绊懀嵘龣z測靈敏度。

3 結(jié)語

隨著生活水平的提升，人們對于食品安全的重視程度也逐漸提高。將ELISA酶聯(lián)免疫吸附應(yīng)用到食品檢測過程中能夠進(jìn)一步提高食品檢測的靈敏性，簡化操作流程，降低檢測成本，不會出現(xiàn)放射性污染等各種問題，應(yīng)用優(yōu)勢較為突出。