□ 王 瑋 重慶市涪陵食品藥品檢驗(yàn)所

1 蜂花粉的功效

蜂花粉中富含人體所需的氨基酸、維生素等多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，提高人體的免疫力，減緩疲勞。適量食用可以使皮膚紅潤(rùn)有光澤，延緩衰老，同時(shí)還可以防治心腦血管疾病，調(diào)節(jié)腸胃功能，增強(qiáng)骨質(zhì)，對(duì)于便秘也有良好的治療作用。蜂花粉還具有較高的藥用價(jià)值，是恢復(fù)肝功能的高級(jí)營(yíng)養(yǎng)劑，也可以治療慢性肝炎以及脂肪肝[1]。

2 喹諾酮類(lèi)抗生素的危害

大量研究資料表明，喹諾酮類(lèi)藥物及其藥物殘留在對(duì)食用者產(chǎn)生致癌、致畸、致突變的潛在作用的，也會(huì)造成遠(yuǎn)期的毒性作用。喹諾酮類(lèi)藥物會(huì)對(duì)消化系統(tǒng)造成損害，臨床癥狀為惡心，嘔吐，腹部不適，腹痛和食欲不振。更嚴(yán)重的是，食品中的殘留藥物會(huì)使人體的致病菌產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致喹諾酮類(lèi)藥物的療效降低甚至失效。喹諾酮類(lèi)藥物主要指恩諾沙星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星等。因此，人們必須十分重視動(dòng)物性食品中喹諾酮類(lèi)藥物殘留的問(wèn)題。

3 蜂花粉的預(yù)處理方法

由于蜂花粉的基質(zhì)較為復(fù)雜，蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的含量較高，為了保證檢測(cè)過(guò)程的高效性和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，有必要建立一種高效的前處理方法對(duì)蜂花粉樣本進(jìn)行處理。通過(guò)矩陣試驗(yàn)，2%高氯酸能更好地沉淀蛋白，消除雜質(zhì)，宜作為蜂花粉中喹諾酮類(lèi)藥物的最佳提取試劑。

4 喹諾酮類(lèi)藥物檢測(cè)方法

本文主要介紹一種喹諾酮類(lèi)藥物的檢測(cè)方法，即高效液相色譜（HPLC）。

4.1 高效液相色譜法（HPLC）

液相層析法與氣相層析理論相結(jié)合而得到的檢測(cè)方法即為高效液相色譜法。是溶質(zhì)的流動(dòng)相和固定相，在高壓條件下進(jìn)行的，持續(xù)多次的交換過(guò)程。在交換過(guò)程中，由于兩相之間存在諸如分配系數(shù)或分子大小等差異，產(chǎn)生排阻作用導(dǎo)致不同的溶質(zhì)相互分離。這種檢測(cè)方法對(duì)環(huán)境溫度的要求較低，可在室溫下進(jìn)行，因此應(yīng)用范圍較廣，同時(shí)具有很強(qiáng)的分離能力和較高的靈敏度。主要的檢測(cè)器為電化學(xué)探測(cè)器或熒光檢測(cè)器等。整體而言，高效液相色譜法具有較強(qiáng)的特異性和較高的精確度，靈敏度高且結(jié)果較為穩(wěn)定，適合于作確證性試驗(yàn)。另外，基于喹諾酮類(lèi)藥物自身的性質(zhì)，在高效液相色譜法中利用熒光法以及紫外可見(jiàn)分光光度法，可以有效降低實(shí)驗(yàn)樣品中存在的蛋白質(zhì)等干擾物質(zhì)會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生的影響。在該實(shí)驗(yàn)方法中，對(duì)樣品施行預(yù)處理操作，有助于除去干擾。除此之外，利用高效液相色譜法還能夠通過(guò)固液萃取的方法提取水中含有的抗生素[2]。

4.2 HPLC方法的精密度、準(zhǔn)確度、靈敏度

4.2.1 精密度

高效液相色譜法的批內(nèi)變異系數(shù)≤15%，批間變異系數(shù)≤20%。

4.2.2 精確度

高效液相色譜法在20 ～500μg/kg添加濃度的回收率為60%～100%。

4.2.3 靈敏度

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，恩諾沙星、環(huán)丙沙星等喹諾酮類(lèi)藥物，在蜂花粉中的最大殘留限量為100 μg/kg，檢測(cè)限為 20 μg/kg。

5 檢測(cè)實(shí)例

為了檢測(cè)蜂花粉中殘留的喹諾酮類(lèi)藥物，科學(xué)上做了許多實(shí)驗(yàn)，以下以恩諾沙星的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)為實(shí)例進(jìn)行敘述。實(shí)驗(yàn)人員將恩諾沙星分別和兩種性質(zhì)不同的蛋白進(jìn)行偶聯(lián)，進(jìn)而形成了恩諾沙星牛血清蛋白完全抗原和恩諾沙星抗原。以家兔為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，用恩諾沙星牛血清蛋白使家兔產(chǎn)生免疫，制備有較高特異性的恩諾沙星血清，然后用恩諾沙星蛋白將抗原包住，構(gòu)建恩諾沙星測(cè)定方案?；驹硎菍?shí)驗(yàn)對(duì)象的抗體與酶標(biāo)抗體相互競(jìng)爭(zhēng)，從而與固相抗原結(jié)合。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，標(biāo)本中抗體的數(shù)量越大，那么與固相抗原結(jié)合的酶標(biāo)抗體數(shù)量越少，所以陽(yáng)性反應(yīng)的顏色比陰影反應(yīng)的淺。也就是說(shuō)標(biāo)本中的牛血清和被過(guò)氧化物標(biāo)記過(guò)的牛血清相互競(jìng)爭(zhēng)，與數(shù)量有限的牛血清抗體結(jié)合，與此同時(shí)牛血清抗體又會(huì)和覆蓋在微孔板條上的特定抗體結(jié)合。所以，通過(guò)洗滌除去沒(méi)有結(jié)合的牛血清，加入酶底物以及生色劑等藥品，與酶標(biāo)記物融合使無(wú)色的發(fā)色劑轉(zhuǎn)換成藍(lán)色。

6 結(jié)論

現(xiàn)如今，尚沒(méi)有明確國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)規(guī)定來(lái)規(guī)范蜂花粉中恩諾沙星、環(huán)丙沙星等喹諾酮類(lèi)藥物殘留的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，相關(guān)文獻(xiàn)資料報(bào)道較少?，F(xiàn)有的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)也只適用于飼料、蜂王漿、蜂蜜和動(dòng)物性食品中喹諾酮類(lèi)藥物殘留量的檢查。因此，為了確保蜂花粉的安全性，有必要建立一種檢測(cè)蜂花粉中恩諾沙星、環(huán)丙沙星等喹諾酮類(lèi)藥物殘留的方法。