宋恩杰

人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)是具有雙螺旋結(jié)構(gòu)的DNA病毒，屬于皰疹病毒科中的β亞科。HCMV可以感染成年人但并不發(fā)病，當(dāng)機(jī)體處于免疫功能低下時(shí)HCMV可以發(fā)生活動(dòng)性感染。我國(guó)屬于巨細(xì)胞病毒(CMV)感染的高發(fā)區(qū)域，特別是兒童由于機(jī)體的免疫力低下，容易發(fā)生CMV活動(dòng)性感染，以CMV肺炎常見[1-3]。當(dāng)CMV病毒侵入兒童體內(nèi)并引起活動(dòng)性感染后，CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞和CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量會(huì)發(fā)生相應(yīng)的變化，因此分析CMV感染的患兒淋巴細(xì)胞亞群對(duì)于診斷CMV活動(dòng)性感染情況有著診斷價(jià)值[4]。本研究在此基礎(chǔ)上，通過CMV-pp65抗原檢測(cè)結(jié)果將CMV肺炎患兒分為CMV肺炎高活動(dòng)性感染組和CMV肺炎活動(dòng)性感染組，并檢測(cè)各組兒童外周血液中CD3+T淋巴細(xì)胞、CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞和CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞的比例，為臨床輔助診斷CMV肺炎提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2014年11月至2016年12月在我院收治的幼兒CMV肺炎感染者共102例，其中男67例，女35例，年齡1～2.5歲，平均(1.7±0.2)歲。同時(shí)選取健康的兒童外周血液標(biāo)本15例作為對(duì)照組。本研究經(jīng)我院倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，選擇研究納入人群均獲得其兒童監(jiān)護(hù)人的同意并簽署知情同意書。

1.2 試劑及檢測(cè)方法 CMV-pp65抗原檢測(cè)：采用CMV BriteTM Turbo Kit試劑盒(荷蘭IQ公司)通過ELISA法定性檢測(cè)患兒血液中CMV-pp65抗原。CD3、CD4和CD8檢測(cè)：CD3、CD4和CD8抗體購(gòu)買于美國(guó)BD公司，使用破膜固定液將白細(xì)胞分離后，使用PBS將白細(xì)胞密度調(diào)整為5×106/mL細(xì)胞懸液，取出195 μL，并加入5 μL CD11b流式抗體，避光保存20 min后，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

1.3 CMV活動(dòng)性感染診斷標(biāo)準(zhǔn) 兒童外周血中CMV-pp65抗原檢測(cè)陽性，CMV-pp65抗原檢驗(yàn)陽性細(xì)胞＞100個(gè)/5×104WBC為高活動(dòng)性CMV感染，CMV-pp65抗原檢驗(yàn)陽性細(xì)胞＜100個(gè)/5×104WBC診斷為CMV活動(dòng)性感染。

兒童CMV肺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照1998年有中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科分會(huì)制定的《CMV感染診斷方案》[5]：①?gòu)膬和軝z的血、尿、唾液或組織等任何一種中分離出CMV。②用特異的單克隆抗體從受檢的組織或細(xì)胞中檢測(cè)到CMV抗原如IEA、FA或pp65等。③從外周血白細(xì)胞中查得CMV抗原(以上3項(xiàng)中有任何一項(xiàng)陽性時(shí)，不僅可以診斷CMV感染，并能診斷為產(chǎn)毒性感染)。④用分子雜交或PCR法從受檢材料中檢出CMV-mRNA，表明產(chǎn)毒性感染，如檢出CMV-DNA特異片段，只能表明CMV感染，不能區(qū)分為產(chǎn)毒性或潛伏性感染。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 數(shù)據(jù)分析使用SPSS 19.5軟件完成，以(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CMV-pp65抗原檢測(cè)結(jié)果 根據(jù)CMV-pp65抗原檢測(cè)結(jié)果，將CMV肺炎的患兒分為CMV高活動(dòng)性感染組和CMV活動(dòng)性感染組。其中兒童CMV高活動(dòng)性感染組21例，占實(shí)驗(yàn)組中兒童總數(shù)的20.59%，CMV活動(dòng)性感染組81例，占實(shí)驗(yàn)組中兒童總數(shù)的79.41%。

2.2 CMV肺炎患兒體內(nèi)的T淋巴細(xì)胞亞群的變化比較 在CMV肺炎高活動(dòng)性感染組患兒體內(nèi)，與健康對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；在CMV肺炎活動(dòng)性感染組患兒體內(nèi)，與健康對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，表1)。

表1 CMV肺炎患兒體內(nèi)的T淋巴細(xì)胞亞群的變化比較(±s) 單位：%

表1 CMV肺炎患兒體內(nèi)的T淋巴細(xì)胞亞群的變化比較(±s) 單位：%

注：與健康對(duì)照組比較，*P＜0.05。

組別 例數(shù) CD3+T淋巴細(xì)胞 CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞 CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞CMV高活動(dòng)性感染組 21 71.35±2.58* 30.31±2.47* 41.36±1.24*CMV活動(dòng)性感染組 81 74.89±1.78* 45.69±3.11* 33.39±2.01*健康對(duì)照組 15 85.22±3.13 65.41±4.34 21.58±2.43

3 討論

兒童由于免疫力低下容易誘發(fā)丙肝病毒、柯薩奇B病毒、風(fēng)疹病毒、流行性腮腺炎病毒、輪狀病毒和CMV等病毒感染[6]。巨細(xì)胞病毒是已知的病原微生物中最容易引起兒童急、慢性感染的病毒之一，而且巨細(xì)胞病毒具有潛伏-活化的生物學(xué)特征，有研究顯示1周歲兒童CMV抗原的陽性檢出率高達(dá)80%，一旦兒童的免疫功能低下時(shí)，就可以直接誘發(fā)巨細(xì)胞病毒的活化并最終導(dǎo)致CMV活動(dòng)性感染，其臨床表現(xiàn)以兒童CMV肺炎最為常見[7]。在早期由于缺乏特異性的檢測(cè)指標(biāo)，因此極易引起誤診，造成病情延誤。同時(shí)，CMV具有泛嗜性的特點(diǎn)，特別是在免疫力低下的患者中，CMV感染可以引起多個(gè)器官的病變，而且臨床表現(xiàn)往往不典型，臨床上鑒別診斷CMV感染十分困難。因此，臨床上應(yīng)對(duì)兒童巨細(xì)胞病毒性肺炎引起高度重視，及時(shí)完善相關(guān)檢查，做好鑒別診斷并采用適當(dāng)治療方案，實(shí)現(xiàn)搶先治療，以改善兒童病情及預(yù)后，提高兒童生存質(zhì)量。

目前，對(duì)兒童CMV肺性肺炎主要依靠CMV-pp65抗原檢測(cè)和CMV基因的PCR檢查，其中CMV基因的PCR檢查是應(yīng)用最為廣泛的檢查手段，但是這種方法的假陽性率高，因此CMV-pp65抗原檢測(cè)逐漸發(fā)展為診斷CMV感染的金標(biāo)準(zhǔn)[8-10]。CMV-pp65抗原檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)是可以有效的檢出CMV的活動(dòng)性感染，而且通過陽性檢出的數(shù)量可以判斷CMV感染的情況，但這種方法耗時(shí)長(zhǎng)，成本高，而且需要人工計(jì)數(shù)。由于CMV病毒在感染機(jī)體后，人體內(nèi)的T淋巴細(xì)胞活化并清除體內(nèi)的CMV，因此患兒體內(nèi)的T淋巴細(xì)胞亞群也隨之發(fā)生改變。這種變化可以從一定程度上反映出機(jī)體的免疫功能和病情，為判斷患兒的感染狀況提供參考依據(jù)。

在1～6歲兒童外周血中T淋巴細(xì)胞的比例明顯高于成人，約占白細(xì)胞總數(shù)40%～70%，而在CMV感染的過程中，T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫對(duì)CMV的清除發(fā)揮了關(guān)鍵作用[11]。其中CD3+的細(xì)胞為T淋巴細(xì)胞，CD3+CD4+陽性為輔助性T淋巴細(xì)胞，CD3+CD8+陽性為抑制性T淋巴細(xì)胞[12]?，F(xiàn)有的研究顯示[13]，MHCⅡ類分子可以將CMV基因中US2-11編碼的蛋白通過抗原提呈給CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞進(jìn)行識(shí)別和殺傷，從而改變T淋巴細(xì)胞亞群的免疫功能，因此T淋巴細(xì)胞亞群的變化與病毒復(fù)制的活動(dòng)程度密切相關(guān)。在CMV肺炎高活動(dòng)性感染組患兒體內(nèi)，CD3+T淋巴細(xì)胞、CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞和CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞的比例分為(71.35±2.58)%、(30.31±2.47)%和(41.36±1.24)%，與健康對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在CMV肺炎活動(dòng)性感染組患兒體內(nèi)，CD3+T淋巴細(xì)胞、CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞和CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞的比例分為(74.89±1.78)%、(45.69±3.11)%和(33.39±2.01)%，與健康對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由此可見，當(dāng)CMV肺炎活動(dòng)性感染嚴(yán)重時(shí)，患兒體內(nèi)CD3+T淋巴細(xì)胞和CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞比例下降，而CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞則相反，而這種變化特點(diǎn)與CMV-pp65抗原檢測(cè)結(jié)果相對(duì)應(yīng)，因此可為臨床輔助診斷CMV肺炎提供參考依據(jù)。

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