周朝東，黃哲甦

(天津市藥品檢驗研究院，天津 300070)

復方乳酸鈉葡萄糖注射液為乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、二水氯化鈣與無水葡萄糖的滅菌水溶液[1，2]，可調(diào)節(jié)體液容量、滲透壓，補充鈉、鉀、鈣及氯離子，并供給熱量。當體內(nèi)循環(huán)血液量及組織液減少時，可作為組織液的補充調(diào)整劑，對電解質(zhì)紊亂及酸中毒有糾正作用[3]。目前現(xiàn)行版《中國藥典》收載的復方乳酸鈉葡萄糖注射液中乳酸鈉的含量測定方法是用陽離子交換樹脂結(jié)合滴定的方法測定，葡萄糖含量的測定方法則是采用旋光法[2]。由于制備陽離子交換樹脂比較費時費力，且離子交換過程比較長，同時乳酸鈉與葡萄糖的測定是分開進行的，因此該方法特別不適用于大批量樣品的檢驗。筆者通過查閱文獻[1，4，5]發(fā)現(xiàn)，目前有報道用HPLC法測定乳酸鈉的含量，均使用C18色譜柱，紫外檢測器，檢測波長為210 nm。同時也有文獻[6]報道利用離子交換色譜柱結(jié)合示差折光檢測器同時測定腹膜透析液(乳酸鹽)中葡萄糖和乳酸鈉的含量。筆者通過實驗優(yōu)化，建立了用離子排阻色譜柱結(jié)合紫外檢測器同時測定乳酸鈉和葡萄糖含量的高效液相色譜法，且通過了方法學驗證，由于該方法簡單易行，可以大大降低工作量，同時縮短分析時間，特別適用于大批量樣品的檢驗。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Waters e2695型高效液相色譜儀，2489 UV/Vis檢測器，Empower 3色譜工作站，METTLER XS205型十萬分之一電子天平。

1.2試藥 乳酸鈉對照品(批號BCBS5446V，純度≥99.0%)，葡萄糖對照品(批號SLBF3437V，純度≥99.5%)，均購自sigma公司；3批復方乳酸鈉葡萄糖注射液為中國大冢制藥有限公司生產(chǎn)，批號分別為FNTRL-1、 FNTRL-2和 FNTRL-3；氯化鈉為天津市華東試劑廠生產(chǎn)；氯化鉀和二水氯化鈣為天津市贏達稀貴化學試劑廠生產(chǎn)；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱為Bio-Rad Aminex HPX-87H ion exclusion column(300 mm×7.8 mm，9 μm)，流動相為0.025 mol/L硫酸溶液，柱溫為40 ℃，流速為1.0 ml/min，進樣體積為20 μl，紫外檢測器，檢測波長為195 nm。理論板數(shù)乳酸鈉為10 707，葡萄糖為6 809，均不低于2 000。葡萄糖與氯離子的分離度為5.84，葡萄糖與乳酸鈉的分離度為8.66，均大于1.5。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備 精密稱取乳酸鈉對照品約0.31 g和葡萄糖對照品約5.0 g置同一100 ml量瓶中，用水溶解并定容至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取該貯備液5 ml置10 ml量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，即得。此時乳酸鈉對照品濃度約為1.55 mg/ml，葡萄糖對照品濃度約為25 mg/ml，平行制備2份對照品。

2.2.2供試品溶液的制備 精密量取復方乳酸鈉葡萄糖注射液5 ml置10 ml量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.3陰性對照溶液的制備 按復方乳酸鈉葡萄糖注射液的處方稱取除了乳酸鈉和葡萄糖之外的成分配制成溶液，然后按“2.2.2”項下供試品溶液的制備方法制備成陰性對照溶液。

2.3專屬性試驗 取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液，按照“2.1”項下色譜條件分別進樣，檢查陰性對照溶液在乳酸鈉和葡萄糖色譜峰相應的位置上有無雜質(zhì)色譜峰的干擾，結(jié)果表明專屬性較強，見圖1。

2.4線性關(guān)系考查 分別精密量取“2.2.1”項下對照品貯備液2.5、4、5、6、7.5和10 ml置10 ml量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，制成系列濃度的供試品溶液，分別精密吸取20 μl，注入液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件分析，測定各自峰面積，以濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，計算回歸方程及相關(guān)系數(shù)。乳酸鈉線性方程為Y=510 986X-7 701.4(r=0.999 9，n=6)，其濃度在0.760～3.041 mg/ml內(nèi)，濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系。葡萄糖線性方程為Y=75 172X+93 510(r=0.999 9，n=6)，其濃度在12.442～49.770 mg/ml內(nèi)，濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.5精密度試驗 取“2.2.1”項下對照品溶液連續(xù)進樣6次，按“2.1”項下的色譜條件測定，記錄峰面積，乳酸鈉峰面積的RSD為0.18%，葡萄糖峰面積的RSD為0.10%，表明儀器精密性良好。

2.6穩(wěn)定性試驗 取“2.2.1”項下對照品溶液1份，分別于0、4、8、12和24 h進樣，按“2.1”項下的色譜條件測定，考查溶液的穩(wěn)定性。結(jié)果乳酸鈉峰面積的RSD為0.45%，葡萄糖峰面積的RSD為0.86%，表明溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7回收率試驗 按復方乳酸鈉葡萄糖注射液處方稱取氯化鈉375 mg、氯化鉀18.75 mg和二水氯化鈣12.5 mg置25 ml量瓶中，用水溶解并定容至刻度，搖勻，作為陰性對照溶液貯備液。然后分別精密量取陰性對照溶液貯備液2 ml置10 ml量瓶中，同時分別加入“2.2.1”項下對照品貯備液4、5和6 ml，并用水定容至刻度，搖勻，制成乳酸鈉和葡萄糖濃度分別相當于供試品溶液濃度80%、100%和120%的溶液，每個濃度平行做3份，共9份，按“2.1”項下的色譜條件測定，并計算回收率、平均回收率和相對標準偏差。結(jié)果乳酸鈉平均回收率是100.3%，RSD是0.45%；葡萄糖平均回收率是100.2%，RSD是0.33%。回收率均在98%～101%范圍內(nèi)，RSD均不大于2%，結(jié)果見表1和表2。

1.氯離子 2.葡萄糖 3.乳酸鈉

加入對照品濃度(mg/ml)測得濃度(mg/ml)回收率(%)1．2171．225100．71．2171．226100．81．2171．21399．71．5211．530100．61．5211．528100．51．5211．525100．31．8251．82199．81．8251．81799．61．8251．832100．4

表2 葡萄糖回收率測定結(jié)果(n=9)

2.8檢出限和定量限試驗 取對照品溶液進行逐級稀釋，并按“2.1”項下色譜條件進樣分析，以信噪比S/N=3作為最低檢出限，以信噪比S/N=10作為定量限。乳酸鈉最低檢出限為55.3 ng，定量限為184 ng；葡萄糖最低檢出限為330 ng，定量限為1 μg。

2.9兩種方法測定結(jié)果 《中國藥典》測定方法和HPLC方法測得的結(jié)果非常接近，無明顯差異，證明建立的該方法可用于復方乳酸鈉葡萄糖注射液中乳酸鈉和葡萄糖含量的同時測定。見表3。

表3 《中國藥典》法和HPLC法測定結(jié)果

3 討論

目前，乳酸鈉的含量測定方法有陽離子交換樹脂法(《中國藥典》法)[2]、HPLC法[4-6]、吸收比值法[3]和改進的氧化還原法[7]。葡萄糖含量測定方法有旋光法[2]、HPLC法[8-11]和碘量法[12]。現(xiàn)行版《中國藥典》二部中，復方乳酸鈉葡萄糖注射液中乳酸鈉用陽離子交換樹脂法結(jié)合滴定法進行測定，葡萄糖用旋光法進行測定。這兩種物質(zhì)的含量測定分別采用不同的方法，比較耗時，尤其乳酸鈉測定，制備陽離子交換樹脂以及離子交換過程比較耗時耗力，特別不適用于大批量樣品的檢驗。在試驗條件摸索過程中，筆者經(jīng)過掃描乳酸鈉溶液和葡萄糖溶液，發(fā)現(xiàn)乳酸鈉最大吸收波長在198.5nm，葡萄糖最大吸收波長則在紫外吸收波長末端190nm，為了能夠兼顧兩種物質(zhì)的測定，故選擇195nm作為檢測波長，而且文中所用的色譜柱對二者分離效果好，同時各自理論板數(shù)比較高，且色譜峰無拖尾?？偠灾P者建立的高效液相色譜法經(jīng)過了方法學驗證，同時樣品測定結(jié)果與法定方法(《中國藥典》收載方法)經(jīng)過比較，沒有顯著性差異。因此，該方法可以為未來《中國藥典》標準提高提供參考。

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