于 洋，蔣春亮，黎先軍，張桂萍

(天津紅日藥業(yè)股份有限公司，天津 301700)

血必凈注射液是由國(guó)內(nèi)著名中西醫(yī)急救專家王今達(dá)教授在我國(guó)經(jīng)典古方血府逐瘀湯的基礎(chǔ)上，以紅花、丹參、赤芍、川芎、當(dāng)歸五味中藥提取制劑而成的中藥注射劑。其主要有效成分有羥基紅花黃色素A、芍藥苷、氧化芍藥苷、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯和丹酚酸B等[1-3]。血必凈注射液具有較強(qiáng)的化瘀解毒功能，用于溫?zé)犷惣膊?，癥見發(fā)熱、喘促、心悸、煩躁等瘀毒互結(jié)證；適用于因感染誘發(fā)的全身炎癥反應(yīng)綜合征；也可配合治療多器官功能失常綜合征的臟器功能受損期[4，5]。血必凈注射液在骨科治療領(lǐng)域也有較多應(yīng)用，治療作用明顯。在治療骨科創(chuàng)傷時(shí)，可縮短愈合時(shí)間，減少創(chuàng)傷并發(fā)癥；治療嚴(yán)重四肢骨折時(shí)，可明顯縮短發(fā)熱、腫脹、疼痛及瘀斑等臨床表現(xiàn)的持續(xù)時(shí)間，促進(jìn)肢體功能恢復(fù)，可有效地恢復(fù)患者早期的凝血功能障礙，穩(wěn)定凝血與纖溶系統(tǒng)的動(dòng)態(tài)平衡[6，7]。

注射用七葉皂苷鈉的主要成分是從七葉樹科植物天師栗的種子娑羅子中提取的三萜皂苷的鈉鹽,具有抗炎、抗?jié)B出、消水腫以及抗氧自由基等神經(jīng)保護(hù)作用。在臨床上, 應(yīng)用七葉皂苷治療各種原因引起的腦水腫以及伴發(fā)的腦神經(jīng)功能性失調(diào), 此外在創(chuàng)傷、骨折、燒傷、術(shù)后腫脹以及慢性靜脈功能性障礙等相關(guān)疾病方面也有較為廣泛的適應(yīng)證[8]。注射用血塞通主要成分為三七總皂苷，具有活血祛瘀、擴(kuò)張血管、改善血液循環(huán)、抗心律失常等作用，用于瘀血阻絡(luò)、中風(fēng)偏癱、胸痹心痛及視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞癥，是臨床常用的治療心腦血管病藥物[9]，同時(shí)在骨科也多有應(yīng)用[10]。

血必凈注射液在骨科治療中常會(huì)與其他骨科用藥交替輸入體內(nèi)，短時(shí)間混合的配伍情況未知，本試驗(yàn)選取骨科常用輸液藥物注射用七葉皂苷鈉、注射用血塞通與血必凈注射液配伍后進(jìn)行物理、化學(xué)穩(wěn)定性考查，研究血必凈注射液與兩者的配伍穩(wěn)定性，為臨床安全合理應(yīng)用藥物提供參考。

1 儀器與試藥

1.1儀器 GWJ-16微粒檢測(cè)儀(天大天發(fā)科技有限公司)，STY-1A滲透壓測(cè)定儀(天大天發(fā)科技有限公司)，YB-2型澄明度檢測(cè)儀(天大天發(fā)科技有限公司)，pH計(jì)(METTLER TOLEDO)，高效液相色譜儀(WATERS e2695)。

1.2試藥 血必凈注射液(天津紅日藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)1410131)；注射用七葉皂苷鈉(無錫凱夫制藥有限公司，批號(hào)14091101)；注射用血塞通(哈爾濱珍寶制藥有限公司，批號(hào)E140832a4)；10%葡萄糖注射液(四川科倫藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)B14021201-1)；羥基紅花黃色素A對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)111637-201310)；芍藥苷(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110736-201438)。甲醇、乙腈為色譜純(Fisher Scientific),冰醋酸、磷酸二氫鉀、磷酸為優(yōu)級(jí)純，水為純化水。

2 方法和結(jié)果

2.1配伍溶液制備 根據(jù)三種藥品使用說明書，本試驗(yàn)全部采用臨床藥品使用中各藥品單次給藥最大濃度進(jìn)行試驗(yàn)，樣品全部在層流超凈臺(tái)中模擬臨床給藥過程進(jìn)行配制。

2.1.1參比溶液配制 取血必凈注射液、注射用七葉皂苷鈉和注射用血塞通作為參比溶液。取注射用七葉皂苷鈉10 mg、注射用血塞通400 mg，分別與溶媒為10%葡萄糖注射液250 ml混勻，制成七葉皂苷鈉10%葡萄糖溶液和血塞通10%葡萄糖溶液。

2.1.2樣品溶液配制 取七葉皂苷鈉10%葡萄糖溶液和血塞通10%葡萄糖溶液各100 ml分別與血必凈注射液100 ml混合。

2.2檢測(cè)頻次及項(xiàng)目 見表1。

表1 檢測(cè)項(xiàng)目

2.3可見異物檢測(cè) 在室溫條件下，按表1取各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的配伍藥液適量，澄明度儀下觀察0～8 h內(nèi)配伍藥液的可見異物變化情況。結(jié)果配伍后藥液均為棕黃色透明液體，澄明度儀下觀察0～8 h內(nèi)可見異物均無明顯變化。

2.4pH測(cè)定 在室溫條件下，按表1取各個(gè)時(shí)間點(diǎn)配伍藥液，測(cè)定其pH，每個(gè)樣本連續(xù)測(cè)定3次，取平均值。配伍溶液pH值在兩參比溶液pH之間，在對(duì)應(yīng)兩種藥品pH值標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，并在 0～8 h內(nèi)數(shù)值RSD分別為0.41%和0.44%，配伍后兩種藥液pH值范圍合理且觀察期間穩(wěn)定，結(jié)果見表2及表3。

表2 各參比溶液pH值

表3 配伍后藥液pH值變化

2.5不溶性微粒測(cè)定 在室溫條件下，按表1取各個(gè)時(shí)間點(diǎn)配伍藥液，用不溶性微粒檢測(cè)儀測(cè)定≥10 μm及≥25 μm的微粒數(shù)。配伍藥液不溶性微粒值在0～8 h均符合《中國(guó)藥典》2015年版光阻法項(xiàng)100 ml以下注射劑規(guī)定，波動(dòng)范圍狹窄，藥液不溶性微粒狀態(tài)穩(wěn)定，結(jié)果見表4、圖1和圖2。

表4 各對(duì)照溶液不溶性微粒個(gè)數(shù) 個(gè)/10 ml

2.6滲透壓測(cè)定 在室溫條件下，按表1取各個(gè)時(shí)間點(diǎn)配伍藥液，用滲透壓測(cè)定儀測(cè)定滲透壓。配伍后藥液0～8 h內(nèi)滲透壓值在兩參比溶液之間，RSD分別為0.23%和0.57%，配伍藥液觀察期間滲透壓穩(wěn)定，結(jié)果見表5。

圖1 配伍后藥液不溶性微粒變化(≥10 μm)

圖2 配伍后藥液不溶性微粒變化(≥25 μm)

藥液滲透壓(mOsmol/kg)0h4h8hRSD(%)血必凈注射液330---七葉皂苷鈉10%葡萄糖溶液538---血塞通10%葡萄糖溶液538---血必凈與七葉皂苷鈉4414394400．23血必凈與血塞通4394444410．57

2.7羥基紅花黃色素A含量測(cè)定

2.7.1色譜條件 色譜柱：Waters symmetry 色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；以乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(8∶92)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)402 nm，進(jìn)樣量10 μl，流速1 ml/min，柱溫35 ℃，理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計(jì)算不低于5 000。

2.7.2溶液制備

2.7.2.1對(duì)照品溶液的制備 取羥基紅花黃色素A對(duì)照品適量，精密稱定，50%甲醇稀釋制成0.04 mg/ml溶液。

2.7.2.2供試品溶液制備 取“2.1.2”項(xiàng)下兩種溶液各10 ml，加水稀釋至100 ml，搖勻，即得供試品溶液。

2.7.2.3空白對(duì)照溶液制備 取“2.1.1”項(xiàng)下七葉皂苷鈉10%葡萄糖溶液和血塞通10%葡萄糖溶液作為空白對(duì)照溶液；分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白對(duì)照溶液各10 μl，按“2.7.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，色譜圖見圖3。

2.7.3線性關(guān)系考查 取羥基紅花黃色素A對(duì)照品適量，精密稱定，50%甲醇稀釋制成0.2 mg/ml貯備溶液。再取適量貯備液逐級(jí)稀釋至系列濃度，各取10 μl進(jìn)樣分析。以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，濃度為橫坐標(biāo)(X)，求得回歸方程為Y=3×107X-20 043(r=0.999 6)，羥基紅花黃色素A在0.01～0.10 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.羥基紅花黃色素A

2.7.4精密度試驗(yàn) 取羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，對(duì)照品峰面積的RSD為0.32%，表明儀器精密度良好。

2.7.5重復(fù)性試驗(yàn) 取“2.1.2”項(xiàng)下兩種溶液，按“2.7.2.2”項(xiàng)下方法分別制備兩種供試品溶液各6份，按“2.7.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄羥基紅花黃色素A的峰面積，計(jì)算RSD分別為0.51%和0.78%,表明重復(fù)性良好。

2.7.6加樣回收率試驗(yàn) 取按“2.7.2.2”項(xiàng)下方法制備的供試品溶液各20 ml,分別加入2 ml羥基紅花黃色素A對(duì)照品貯備溶液，加水定容至25 ml，各制備6份，進(jìn)行分析，計(jì)算七葉皂苷鈉10%葡萄糖血必凈溶液平均回收率為99.60%，RSD為0.39%；計(jì)算血塞通10%葡萄糖血必凈溶液平均回收率為99.57%，RSD為0.26%。表明測(cè)定方法加樣回收率符合要求。

2.7.7穩(wěn)定性研究 分別取“2.7.2.2”項(xiàng)下的兩種溶液，按“2.7.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，色譜圖見圖4和圖5。從圖4和圖5中可以看出，配伍后藥液0～8 h內(nèi)羥基紅花黃色素A的出峰時(shí)間無明顯變化，含量檢測(cè)結(jié)果無明顯變化。表明配伍藥液0～8 h內(nèi)羥基紅花黃色素A含量穩(wěn)定。含量結(jié)果見表6。

圖4 血必凈與七葉皂苷鈉配伍后各時(shí)間點(diǎn)羥基紅花黃色素A高效液相圖譜

圖5 血必凈與血塞通配伍后各時(shí)間點(diǎn)羥基紅花黃色素A高效液相圖譜

藥液羥基紅花黃色素含量(mg/ml)0h4h8hRSD(%)血必凈注射液0．32440．32660．32940．77血必凈與七葉皂苷鈉0．16250．16160．15960．92血必凈與血塞通0．16190．15910．15731．45

2.8芍藥苷含量測(cè)定

2.8.1色譜條件 Waters symmetry 色譜柱(250 mm×4.6 mm 5 μm)；以甲醇-水-冰醋酸(30∶70∶0.5)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm，進(jìn)樣量10 μl，流速1 ml/min，柱溫40 ℃，理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1 500。

2.8.2溶液制備

2.8.2.1對(duì)照品溶液的制備 取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定，50%甲醇稀釋制成0.1 mg/ml溶液。

2.8.2.2供試品溶液制備 取“2.1.2”項(xiàng)下兩種溶液各10 ml，加水稀釋至100 ml，搖勻，即得供試品溶液。

2.8.2.3空白對(duì)照溶液的制備 取“2.1.1”項(xiàng)下七葉皂苷鈉10%葡萄糖溶液和血塞通10%葡萄糖溶液作為空白對(duì)照溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白對(duì)照溶液各10 μl，按“2.8.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，色譜圖見圖6。

1.芍藥苷

2.8.3線性關(guān)系考查 取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定，50%甲醇稀釋制成1.0 mg/ml貯備溶液。再取適量貯備液逐級(jí)稀釋至系列濃度，各取10 μl進(jìn)樣分析。以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，濃度為橫坐標(biāo)(X)，求得回歸方程為Y=456.12X+0.402 8(r=0.999 2)，結(jié)果芍藥苷在0.02～0.25 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.8.4精密度試驗(yàn) 取芍藥苷對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，對(duì)照品峰面積的RSD為0.47%，表明儀器精密度良好。

2.8.5重復(fù)性試驗(yàn) 取“2.1.2”項(xiàng)下兩種溶液，按“2.8.2.2”項(xiàng)下方法分別制備兩種供試品溶液各6份，按“2.8.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄芍藥苷的峰面積，計(jì)算RSD分別為0.68%和0.64%，表明重復(fù)性良好。

2.8.6加樣回收率試驗(yàn) 取按“2.8.2.2”項(xiàng)下方法制備的供試品溶液各20 ml,分別加入1 ml芍藥苷對(duì)照品貯備溶液，加水定容至25 ml，各制備6份，進(jìn)行分析，計(jì)算七葉皂苷鈉10%葡萄糖血必凈溶液平均回收率為99.11%，RSD為0.44%；血塞通10%葡萄糖血必凈溶液平均回收率為99.25%，RSD為0.51%；表明測(cè)定方法加樣回收率符合要求。

2.8.7穩(wěn)定性研究 分別取“2.8.2.2”項(xiàng)下兩種溶液，按“2.8.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，色譜圖見圖7和圖8。從圖7和圖8中可以看出，兩種配伍藥液0～8 h內(nèi)芍藥苷的出峰時(shí)間無明顯變化，含量檢測(cè)結(jié)果無明顯變化。表明配伍藥液0～8 h內(nèi)芍藥苷含量穩(wěn)定。含量結(jié)果見表7。

圖7 血必凈與七葉皂苷鈉配伍后各時(shí)間點(diǎn)芍藥苷高效液相圖譜

圖8 血必凈與血塞通配伍后各時(shí)間點(diǎn)芍藥苷高效液相圖譜

藥液芍藥苷含量(mg/ml)0h4h8hRSD(%)血必凈注射液1．30101．29901．30500．23血必凈與七葉皂苷鈉芍藥苷0．62970．63380．63370．37血必凈與血塞通芍藥苷0．63090．63160．63320．19

3 討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，血必凈注射液分別與注射用七葉皂苷鈉和注射用血塞通以10%葡萄糖為溶媒單次給藥最大濃度進(jìn)行配伍后，室溫放置8 h內(nèi)，可見異物、pH值、不溶性微粒數(shù)、滲透壓值穩(wěn)定，羥基紅花黃色素A和芍藥苷含量穩(wěn)定，配伍穩(wěn)定性良好。

注射用七葉皂苷鈉說明書中規(guī)定溶媒為10%葡萄糖注射液或氯化鈉注射液，注射用血塞通說明書中規(guī)定溶媒為5%葡萄糖注射液或10%葡萄糖注射液，本試驗(yàn)選用10%葡萄糖注射液。作者對(duì)氯化鈉注射液溶解的注射用七葉皂鈉以及5%葡萄糖注射液溶解的注射用血塞通與血必凈注射液的配伍穩(wěn)定性也做了相同研究，結(jié)論與本文研究結(jié)論一致。

本試驗(yàn)采用的是血必凈注射液與兩種藥物臨床使用中各自單次給藥的最大濃度進(jìn)行配伍試驗(yàn)，因此推斷，本試驗(yàn)結(jié)論支持血必凈注射液與兩種藥物臨床單次給藥低濃度時(shí)也能獲得良好的配伍穩(wěn)定性。

《中國(guó)藥典》2015年版四部0903中“光阻法”[11]測(cè)定原理為：當(dāng)液體中的微粒通過一窄細(xì)檢測(cè)通道時(shí)，與液體流向垂直的入射光由于被微粒阻擋而減弱，因此由傳感器輸出的信號(hào)降低，這種信號(hào)變化與微粒的截面積大小相關(guān)。因氣泡的存在使光線發(fā)生散射或折射，會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果，《中國(guó)藥典》也規(guī)定“不適用于進(jìn)入傳感器時(shí)產(chǎn)生氣泡的注射劑”。配伍藥液為兩種液體混合而成，勢(shì)必會(huì)產(chǎn)生一定氣泡，按《中國(guó)藥典》方法“靜置2 min脫氣泡”效果難以達(dá)到，因此在檢測(cè)過程中可以考慮使用一些脫氣的方式，如針對(duì)檢測(cè)不溶性微粒藥液進(jìn)行超聲或真空脫氣。配伍溶液不溶微粒檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，有建議參考不小于100 ml靜脈注射液標(biāo)準(zhǔn)，但分析本試驗(yàn)配伍兩液均為非大輸液，以小于100 ml靜脈注射液標(biāo)準(zhǔn)更為合理。

綜上所述，血必凈注射液與注射用七葉皂苷鈉或注射血塞通配伍后0～8 h內(nèi)物理、化學(xué)性質(zhì)無明顯變化，配伍穩(wěn)定。

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