□ 李 娟 張?jiān)娀?陳 科 蘇嘉妮 廣東省食品檢驗(yàn)所

檢測人員能力驗(yàn)證是實(shí)驗(yàn)室微生物檢測質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其結(jié)果直接關(guān)系到檢驗(yàn)報(bào)告的準(zhǔn)確性和可靠性。通過能力驗(yàn)證，可以綜合判斷檢測人員的檢測水平，進(jìn)而體現(xiàn)該實(shí)驗(yàn)室的檢測水平。能力驗(yàn)證作為評價(jià)實(shí)驗(yàn)室能力的一個(gè)重要手段，一直以來受到國內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室管理者的廣泛重視[1]。它對于實(shí)驗(yàn)室而言是重要的外部質(zhì)量保證手段，能增加客戶及相關(guān)方對實(shí)驗(yàn)室出具可靠數(shù)據(jù)的信心。

糞鏈球菌（Streptococcus faecalis），又名糞腸球菌（Enterococcusfaecalis），在水、土壤和人畜的體內(nèi)及糞便中廣泛存在[2]，屬于條件致病菌，當(dāng)機(jī)體抵抗力下降或有其他因素影響時(shí)，進(jìn)入人體血液或其他部位，可引起尿路感染、敗血癥、腦膜炎、化膿性腹部感染、心內(nèi)膜炎和腹瀉發(fā)燒等[3]。該菌耐熱、耐鹽，對不利環(huán)境的適應(yīng)性強(qiáng)、抵抗力強(qiáng)，甚至可以抵抗多種抗生素，因此存活力持久、感染性強(qiáng)[4]，與大腸菌群相比，該菌更適合作為水質(zhì)糞便污染情況的指標(biāo)菌，更能客觀地反映水質(zhì)的衛(wèi)生狀況[5]。本文就包裝礦泉水中糞鏈球菌的定量檢測對本實(shí)驗(yàn)室兩名檢測人員進(jìn)行能力驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)菌株

糞鏈球菌（Streptococcus faecalis）ATCC29212，購自廣東省食品微生物安全工程技術(shù)研究開發(fā)中心，工作菌株為3代，大腸埃希氏菌（Escherichia coli）ATCC25922購自Microbiologics，工作菌株為2代。

1.2 主要試劑與儀器

KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基（北京陸橋）、腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基（北京陸橋）、腦-心浸萃瓊脂培養(yǎng)基（北京陸橋），抽濾設(shè)備（Millipore）、無菌濾膜（Millipore）、恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒）、旋渦混合器（IKA）。

1.3 檢驗(yàn)方法

1.3.1 制備菌懸液

用無菌棉簽沾取糞鏈球菌陽性菌株至3 mL生理鹽水管中，測定麥?zhǔn)蠞岫龋⑦M(jìn)行稀釋.

1.3.2 陽性污染

各吸取1 mL菌懸液至250 mL礦泉水中，混勻。

1.3.3 過濾

用無菌鑷子夾取0.45 μm無菌濾膜至濾床上，固定好無菌濾器，將250 mL污染樣品倒入無菌濾器中，啟動抽濾裝置，完成后將濾膜轉(zhuǎn)移到KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基上，注意放置時(shí)要避免在濾膜和培養(yǎng)基之間夾留有氣泡，36 ℃倒置培養(yǎng)48 h。

1.3.4 計(jì)數(shù)

記錄典型菌落數(shù)，糞鏈球菌在KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基上呈紅色或粉紅色菌落。

1.3.5 鏡檢

分別挑取不少于5個(gè)典型菌落進(jìn)行革蘭染色，首先挑取菌落涂薄片，用酒精燈灼燒片刻固定，后用結(jié)晶紫染色1 min，自來水沖洗，碘液媒染1 min，自來水沖洗，95 %酒精脫色30 s，自來水沖洗，沙黃復(fù)染1 min。糞鏈球菌為革蘭氏陽性球菌，常排列成短鏈狀。

1.3.6 確證試驗(yàn)

同時(shí)接種到腦-心浸萃瓊脂培養(yǎng)基，36 ℃培養(yǎng)48 h，若有菌生長，進(jìn)行3%過氧化氫酶試驗(yàn)，若無氣泡產(chǎn)生，則轉(zhuǎn)接到腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基及膽汁液態(tài)培養(yǎng)基中，分別于45 ℃、36 ℃培養(yǎng)48 h、3 d，觀察是否能生長繁殖。糞鏈球菌為過氧化氫酶陰性，在上述培養(yǎng)基中均能生長。

2 結(jié)果

2.1 樣品污染

菌懸液麥?zhǔn)蠞岫葹?.51，稀釋6倍，各吸取0.7 mL至250 mL待測礦泉水中。

2.2 計(jì)數(shù)

檢測人員A所做的KF平板上典型菌落數(shù)為33個(gè)，檢測人員B所做的KF平板上典型菌落數(shù)為21個(gè)。

2.3 鏡檢

檢測人員A挑取的5個(gè)典型菌落均為革蘭氏陽性球菌，并排列成短鏈狀；檢測人員B挑取的5個(gè)典型菌落均為革蘭氏陽性球菌，并排列成短鏈狀。

2.4 確證試驗(yàn)

檢測人員A挑取的5個(gè)典型菌落在腦-心浸萃瓊脂培養(yǎng)基上有生長，3%過氧化氫酶試驗(yàn)陰性，在腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基及膽汁液態(tài)培養(yǎng)基中均能生長繁殖；檢測人員B挑取的5個(gè)典型菌落在腦-心浸萃瓊脂培養(yǎng)基上有生長，3%過氧化氫酶試驗(yàn)陰性，在腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基及膽汁液態(tài)培養(yǎng)基中均能生長繁殖。

2.5 結(jié)果與報(bào)告

檢測人員A的檢測結(jié)果為33 CFU/250 mL，檢測人員B的檢測結(jié)果為21 CFU/250 mL。

3 結(jié)論

兩次獨(dú)立試驗(yàn)的對數(shù)值之差的絕對值為0.20，小于0.45[6-7]，結(jié)果為滿意，表明A、B檢測人員檢測礦泉水中糞鏈球菌的能力符合質(zhì)量控制要求。

4 討論

水為生命之源，在人的生命活動中不可或缺。但隨著工業(yè)化的普及，飲用水的安全問題變得越來越突出，而其中最重要的問題之一便是飲用水的微生物污染，飲用水一旦受到污染，將會引起大規(guī)模感染和疾病的爆發(fā)[8]。

大腸菌群定植于人及溫血動物的腸道中，通過腸道排泄物污染水質(zhì)，進(jìn)而傳播疾病，但經(jīng)過氯消毒、污水處理和高濃度鹽的環(huán)境中，大腸菌群可能多數(shù)已失活，所以大腸菌群并不能很好地反映水質(zhì)的糞便污染情況。而糞鏈球菌的抵抗力強(qiáng)于大腸菌群，將糞鏈球菌作為衡量水質(zhì)衛(wèi)生質(zhì)量的指標(biāo)菌更具有衛(wèi)生學(xué)意義，現(xiàn)行有效的國家標(biāo)準(zhǔn)《飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法》（GB8538-2016）將糞鏈球菌納入檢驗(yàn)指標(biāo)菌。李飛等研究人員在廣東省采集206份水樣，開展糞鏈球菌的污染調(diào)查，調(diào)查顯示有35份水樣有糞鏈球菌污染，污染率為17%[9],因此飲用水中衛(wèi)生指標(biāo)菌糞鏈球菌（Streptococcus faecalis）、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）等的監(jiān)測至關(guān)重要。

開展此次能力驗(yàn)證，旨在考核本實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)人員的檢測能力，找出檢測過程的薄弱之處，發(fā)現(xiàn)問題，解決問題，提高實(shí)驗(yàn)室檢測人員對食品微生物檢驗(yàn)和細(xì)菌性疾病診斷的應(yīng)急能力，促進(jìn)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)水平的不斷提高[10]。本實(shí)驗(yàn)室還將有序地進(jìn)行其他食品微生物檢驗(yàn)的能力驗(yàn)證，以保證本實(shí)驗(yàn)室檢測人員穩(wěn)定的檢測水平。

[1]江志杰,高春.化妝品中金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌檢出能力驗(yàn)證結(jié)果與分析[J].香料香精化妝品,2015(6):29-32,36.

[2]周玲,李秀貴,王子桂.一起食用甜白酒所致糞鏈球菌食物中毒[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,1991(3):180-181.

[3]成曉維,唐食明,游淑珠.水中糞鏈球菌的檢測研究[J].科技資訊,2010(15):223-225.

[4]于泓洋,劉燕霏,楊建德.糞鏈球菌的分離與鑒定[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2012(17):97-98.

[5]張淑紅,吳清平,張菊梅,等.水中糞鏈球菌顯色培養(yǎng)基-濾膜法快速檢測初步研究[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2008(9):1718-1720,1731.

[6]中華人民共和國,國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局,中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.食品和動物飼料微生物學(xué)30℃菌落計(jì)數(shù)方法:SN/T1800-2006[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2006.

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[10]肖波,周陽,孫松松.食品中副溶血性弧菌檢測能力驗(yàn)證分析[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志,2017(5):447-449.