□ 王曉琴 廣東省惠州市食品藥品檢驗(yàn)所

高效液相色譜法優(yōu)點(diǎn)顯著，有著非常廣泛的用途，在環(huán)境監(jiān)測(cè)領(lǐng)域、臨床化學(xué)領(lǐng)域、藥物研究領(lǐng)域、食品檢驗(yàn)領(lǐng)域、石油化學(xué)領(lǐng)域以及生命科學(xué)領(lǐng)域等都有一定的應(yīng)用。而當(dāng)前國(guó)內(nèi)外對(duì)于蘇丹紅的測(cè)定基本上采用的是高效液相色譜儀，筆者在本文中選用LC5500高效液相色譜儀對(duì)于食品中的蘇丹紅進(jìn)行測(cè)定研究，該種液相色譜儀具有靈敏度高、穩(wěn)定性能好的特點(diǎn)，其最低檢測(cè)濃度可以達(dá)到0.01μg/kg，測(cè)定蘇丹紅的保留時(shí)間的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.85%～2.95%，峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為0.95%～1.65%；梯度洗脫基線平直，無(wú)漂移，噪聲低，樣品回收率能夠達(dá)到80%～95%。

1 材料與方法

1.1 試劑

正己烷A.R.、丙酮色譜純、甲酸A.R.、乙腈色譜純、三氧化二鋁、純水重蒸餾水、蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。蘇丹紅Ⅰ為指示劑，蘇丹紅Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ為A.R.，蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

1.2 儀器

LC 5500高效液相色譜儀、254nm紫外檢測(cè)器、多孔硅膠型鍵合相YWG一CH,顆粒度10u、微量注射器、P-101高壓泵(雙泵)、恒溫柱箱、超聲波清洗器。

1.3 色譜條件

檢測(cè)器：紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器、色 譜 柱 M18柱、5.6mm ×480mm，10μm，流動(dòng)相A液（B泵），0.1%甲酸-乙腈+丙酮，B液(A泵)0.1%甲酸-水+乙腈。梯度洗脫程序如下。

開(kāi) 始0min時(shí)，B液85%，A液35%；15min時(shí)，B液 85%，A液35%；33min時(shí)，B液 150%，A液0%；40min時(shí)，B液150%，A液0%；45min時(shí)，B液 85%，A液 35%；50min時(shí)，B液85%，A液35%。

進(jìn)樣量20μL。繪制蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)色譜圖。

2 結(jié)果與討論

2.1 靈敏度測(cè)試

將蘇丹紅混合溶液（0.2 μg/mL）加入HPLC之中，然后再繪制出其色譜圖像，取蘇丹紅溶液5g，那么其最低檢測(cè)濃度為0.04 μg/kg。

2.2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

根據(jù)實(shí)驗(yàn)方法將蘇丹紅混合液（10μg/ML）進(jìn)行連續(xù)的8次測(cè)定，對(duì)其保留時(shí)間與峰面積進(jìn)行測(cè)定，然后計(jì)算其算數(shù)平均值、偏差以及標(biāo)準(zhǔn)差，得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下。

蘇丹紅1R平均值 8.55，標(biāo)準(zhǔn)差0.121，CV 1.68%；蘇丹紅1 A平均值158545，標(biāo)準(zhǔn)差1831.4，CV 1.14%。

蘇丹紅2R平均值12.33，標(biāo)準(zhǔn)差0.2953，CV 2.954%；蘇丹紅2A平均值332013，標(biāo)準(zhǔn)差5473.6，CV 1.60%。

蘇丹紅3R平均值18.25，標(biāo)準(zhǔn)差0.3066，CV 2.32%；蘇丹紅3A平均值472762，標(biāo)準(zhǔn)差4565.2，CV 0.95%。

蘇丹紅4 R平均值26.88，標(biāo)準(zhǔn)差0.1565，CV 0.84%；蘇丹紅4 A平均值430633，標(biāo)準(zhǔn)差6902.3，CV 1.63%。

2.3 線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)

蘇丹紅Ⅰ、II、III、Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)系列混合溶液配制采用蘇丹紅I、II、III、Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制標(biāo)準(zhǔn)系列混合溶液，濃度分別為2.0、1.5、2.5、3.0、3.5μg/mL，根據(jù)其實(shí)驗(yàn)儀器測(cè)定鋒面面積，以此繪制出其校準(zhǔn)曲線。

蘇丹紅I、Ⅱ、III在2.0～3.5μg/mL，蘇丹紅Ⅳ在2.0～ 3.0μg/mL的區(qū)間都呈現(xiàn)出了較好的擬合線性關(guān)系。它們相關(guān)系數(shù)分別為0.98877、0.98850、0.98840、0.98834。 從 而證明出了蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度與其峰面積基本上屬于單調(diào)的正比例函數(shù)關(guān)系，其峰面積隨著濃度的增加而增加。

2.4 樣品測(cè)定和加標(biāo)回收率試驗(yàn)

分別取辣椒油3g和香辣脆5g各4份,然后對(duì)這兩種樣本中所含的蘇丹紅成分進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)前文的方法將辣椒油樣品和香辣脆樣品加入蘇丹紅四種標(biāo)準(zhǔn)溶液之中，然后測(cè)定其濃度，最后計(jì)算其平均回收率，如下。

辣椒油和香辣脆的8份加標(biāo)量都為25.0 μg，辣椒油4份測(cè)得量分別是：15.5、19.0、16.5、15.0，香辣脆4份測(cè)得量分別是：16.5、14.5、17.0、14.5。辣椒油4份回收率為：80%、90.5%、85.5%、80% ，香辣脆4份回收率為：75.5%、85%、75.5%、78.6%。

上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，所選定的兩種樣本中都未測(cè)得蘇丹紅，但是所測(cè)定的回收率的值偏低，這也許是由于A2l03活性以及基質(zhì)干擾等因素的影響，具體是什么原因還需要進(jìn)一步的驗(yàn)證研究，對(duì)于不同廠家與批號(hào)的A2l03需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定其活性成分以及程度，然后在選取實(shí)驗(yàn)所需要的A2l03。

3 結(jié)論

通過(guò)本文的研究可知，采用高效液相色譜儀法測(cè)定食品中蘇丹紅成分的方法具有較高的靈敏性和準(zhǔn)確性，且具備良好的線性關(guān)系，是一種高效、實(shí)用的檢測(cè)方法。