李桃

（江蘇省南通市腫瘤醫(yī)院腫瘤內(nèi)科 江蘇 南通 226001）

培美曲塞作為一種多靶點抗葉酸藥，在晚期NSCLC肺腺癌中取得了較好的療效，臨床中需篩選出培美曲塞優(yōu)勢人群。研究發(fā)現(xiàn)，培美曲塞通過以下靶點發(fā)揮作用：胸苷酸合成酶（TS）、二氫葉酸還原酶（DHFR）、甘氨酸核糖核苷甲?；D(zhuǎn)移酶（GARGT）和氨基咪唑羧酰胺核苷甲酰基轉(zhuǎn)移酶（AICARFT），以上藥物的作用位點，可能為本研究提供有效的療效預(yù)后標(biāo)志[1]。

1.對象與方法

1.1 研究對象

選擇100例2016.7-2018.06年南通市腫瘤醫(yī)院住院的接受培美曲塞治療的初治晚期NSCLC 患者。組織類型明確，PS0-1分。

1.2 研究方法

1.2.1 化療方案 100例患者均接受以培美曲塞聯(lián)合順鉑（cisplatin， DDP）或卡鉑（carboplatin，CBP）為主的方案化療。兩周期進(jìn)行療效評價，分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、穩(wěn)定（SD）和進(jìn)展（PD）。如出現(xiàn)CR、PR為對化療敏感；如為SD或PD，則對化療不敏感。

1.2.2 基因檢測 采用熒光定量PCR方法檢測患者化療前外周血中TS、DHFRmRNA的表達(dá)水平。抽取每位受試者的外周靜脈血5ml，EDTA抗凝。用淋巴細(xì)胞分離液分離出白細(xì)胞。按Trizol試劑說明提取總RNA，-80℃保存?zhèn)溆?。cDNA合成反應(yīng)體系：5×逆轉(zhuǎn)錄buffer（含有探針）4μl、上游引物（10pmol/μl）0.4μl、下游引物（10pmol/μl）0.4μl、dNTPs（10mmol/μl）0.2μl、逆轉(zhuǎn)錄酶（200U/μl）1μl、DEPC 水 9μl、RNA 模板 5μl、總體積20μl。每個樣本重復(fù)測量3次。分別以2種基因表達(dá)的Ct值的平均值作為分界點。另選取同期100例健康體檢者外周血作對照。

1.2.3 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS21統(tǒng)計軟件。TS、DHFR基因表達(dá)情況與化療療效的相關(guān)性分析采用卡方檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 循環(huán)TSmRNA、DHFRmRNA與NSCLC療效的關(guān)系

NSCLC組血清TSmRNA組的表達(dá)為0.88±0.12，對照組的TSmRNA水平為2.23±0.21，血清DHFRmRNA的表達(dá)為0.25±0.16，對照組的DHFRmRNA水平為1.23±0.22，NSCLC組的TSmRNA、DHFRmRNA水平低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。100例NSCLC患者無CR，PR 25例，SD 45例，PD 30例。25例化療敏感者的TS水平為（0.67±0.19）pmol/L，75例化療抵抗者的TS水平為（1.59±0.18）pmol/L，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。25例化療敏感者的DHFR 水平為（0.21±0.11）pmol/L，75例化療抵抗者的DHFR水平為（0.71±0.18）pmol/L，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05） 。

3.討論

TS是培美曲塞治療作用機(jī)制中的主要靶點，TS表達(dá)與培美曲塞的敏感性相關(guān)，即TS表達(dá)越高，培美曲塞的敏感性越低[2]。TS表達(dá)檢測需要肺癌組織，其來源相對困難。而培美曲塞的另一個關(guān)鍵靶點，二氫葉酸還原酶基因（DHFR）是生物體內(nèi)重要的酶，Levy等[3]回顧性研究發(fā)現(xiàn)，40例白血病患兒顯示DGFR活性與患者預(yù)后相關(guān)，通常表達(dá)活性高的患者預(yù)后差。

本研究發(fā)現(xiàn)，25例化療敏感者的DHFR水平為（0.21±0.11）pmol/L，75例化療抵抗者的DHFR水平為（0.41±0.18）pmol/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。提示外周血循環(huán)TS可作為預(yù)測應(yīng)用培美曲塞化療晚期肺癌患者預(yù)后的分子標(biāo)志，DHFR可能作為近期療效的預(yù)測因子。因此，晚期肺腺癌外周血循環(huán)中檢測TS及DHFR轉(zhuǎn)錄水平對培美曲塞治療療效的預(yù)測有一定的價值，通過可檢測的臨床指標(biāo)，篩選優(yōu)勢人群，使化療更具針對性。