蘭小英 蘇秋妮 洪國粦

科學(xué)技術(shù)日新月異，現(xiàn)在先進(jìn)的全血細(xì)胞分析儀技術(shù)幾乎完全替代了傳統(tǒng)的手工分析，全血細(xì)胞分析是各個醫(yī)院中運(yùn)用最多的一種血液檢驗(yàn)方法[1]，其檢測過程具有簡便、高效、快捷、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，新的檢測技術(shù)的高速發(fā)展在帶來方便的同時，也會讓操作人員忽略一點(diǎn)：檢測結(jié)果容易受到儀器和標(biāo)本自身因素、環(huán)境因素等的影響[2-3]。血細(xì)胞分析結(jié)果的準(zhǔn)確性直接影響臨床醫(yī)生對疾病的診斷和治療，檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和分析前、中、后的質(zhì)量控制密切相關(guān)，在這其中，很重要的一個就是標(biāo)本本身存在一些干擾因素：比如冷凝集、脂血、溶血等，筆者就冷凝集素對血細(xì)胞分析儀檢測參數(shù)的影響及處理方法進(jìn)行探討。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象

選取本院2015年1月—2017年8月門診和住院患者，篩選出有RBC冷凝集的標(biāo)本40例，其中男性26例，女性14例，年齡1～56歲，其中10例肺癌患者，13例肝硬化患者，4例上呼吸道感染患者，1例為先天性乳頭內(nèi)陷患者，12例溶血性貧血患者。選取的冷凝集的血常規(guī)標(biāo)本，搖勻的過程中均可以觀察到管壁上有細(xì)沙樣的顆粒，同時Hb和RBC的比例嚴(yán)重失調(diào)，一般認(rèn)為兩者的比例在正常成人中是30∶1[4]；血液標(biāo)本剛制的血片上有許多細(xì)小顆粒；儀器直方圖、散點(diǎn)圖異常，另外，冷凝集試驗(yàn)均為陽性。

1.2 儀器與試劑

SYSMEX XN-2000全血細(xì)胞分析儀配套試劑和質(zhì)控品，儀器每年2次校準(zhǔn)，質(zhì)控每天均在控。

1.3 方法

分別采集EDTA-K2抗凝靜脈全血2ml，立即顛倒混勻4～5次后在30分鐘內(nèi)，用SysmexXN-2000全血細(xì)胞分析儀對該40例標(biāo)本常溫下進(jìn)行全血細(xì)胞分析，記錄檢測結(jié)果并分析細(xì)胞散點(diǎn)圖及儀器報警信息。然后將該40例標(biāo)本置于37℃恒溫水浴箱水浴30分鐘，在此期間，把儀器的手動模式調(diào)好，時間一到迅速取出標(biāo)本并充分混勻后立即上機(jī)檢測。

1.4 處理有效的判斷

處理后異常增高的 MCH、MCHC恢復(fù)正常，RBC和Hb的比值趨于合理，散點(diǎn)圖正常，儀器報警信息消失，試管壁上未見細(xì)沙樣顆粒，顯微鏡鏡下血涂片未見紅細(xì)胞聚集現(xiàn)象 。

1.5 數(shù)據(jù)處理

結(jié)果用統(tǒng)計軟件SPSS 17.0進(jìn)行處理，采用配對t 檢驗(yàn)對結(jié)果進(jìn)行比較分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

40例冷凝集標(biāo)本的血常規(guī)檢測結(jié)果中WBC，Hb和PLT的數(shù)值在水浴前后沒有明顯的變化，對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；RBC，HCT，MCV，MCH，MCHC的數(shù)值水浴前后對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），冷凝集標(biāo)本在水浴前后的檢測結(jié)果見表1。

3 討論

冷凝集現(xiàn)象是由自身抗體（冷凝集素）引起的，冷凝集素是一種針對RBC膜抗原的IgM 型自身抗體，在寒冷環(huán)境下可以和自身的RBC，“O”型 RBC 或其同型 RBC發(fā)生凝集反應(yīng)。健康人體內(nèi)有低效價的IgM型冷凝集素，一般不會引起RBC凝集，但當(dāng)冷凝集素滴度增高時，則可引起比較嚴(yán)重的RBC凝集，這時就要及時判斷血常規(guī)結(jié)果的準(zhǔn)確性。血液溫度較低達(dá)到特定溫度時，紅細(xì)胞抗原會結(jié)合自身抗體，從而引起自身凝集。特定溫度又叫冷凝集閾值溫度，通常范圍在4～25℃，大部分＜25℃，少數(shù)可超過30℃，患者通常無特異性臨床表現(xiàn)[5-6]。從表1可以清楚地看到：血常規(guī)檢測結(jié)果中RBC、HCT、MCV、MCH、MCHC的數(shù)值水浴前后有明顯的變化，對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。有冷凝集現(xiàn)象的血液標(biāo)本對血常規(guī)檢測結(jié)果的影響是顯而易見的，水浴前血常規(guī)RBC的計數(shù)結(jié)果明顯降低，MCV假性增高。這是因?yàn)镾ysmexXN-2000檢測RBC的原理是鞘流直流電阻抗法，稀釋后的血液樣本從噴頭的前端噴出，被鞘液包著的血細(xì)胞從小孔中央，沿著一定的軌道一個一個通過，而冷凝集的血液樣本，多個紅細(xì)胞聚集后形成的紅細(xì)胞團(tuán)一起通過計數(shù)孔，引起RBC計數(shù)降低，同時聚集的細(xì)胞團(tuán)也引起脈沖增大，導(dǎo)致MCV假性升高[7-8]，但二者又以 RBC計數(shù)減少為主，由此引起HCT也降低，從而造成由RBC、MCV、HCT計算得出的MCH、MCHC結(jié)果異常增高。水浴后，冷凝集現(xiàn)象消失，RBC正常計數(shù)，儀器散點(diǎn)圖正常，報警信息消失。

從表1可以看出：冷凝集標(biāo)本水浴前后WBC、Hb、PLT這三個數(shù)值沒有明顯的變化，對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。這是因?yàn)镾YSMEX-XN2000全血細(xì)胞分析儀檢測WBC和RBC計數(shù)不在一個通道，冷凝集影響的是RBC計數(shù)通道，對WBC幾乎無影響。Hb檢測采用的是SLS-Hb衍生物法，利用溶血劑裂解紅細(xì)胞釋放出Hb，后者與溶血劑中的SLS結(jié)合形成SLS-Hb衍生物，儀器是采用波長為555 nm的激光照射，通過測定它的吸光度變化而換算出Hb的含量。本研究中Hb未受冷凝集影響，表明凝集的紅細(xì)胞已全部被溶血劑破壞。PLT雖然和RBC在一個通道檢測，但是因?yàn)轶w積和RBC相差比較大且數(shù)量較多，比較不容易受紅細(xì)胞包裹的影響，所以計數(shù)未受明顯影響[9]。

血細(xì)胞分析是各個醫(yī)院中最基本、最常規(guī)的一種血液檢驗(yàn)方法。血液分析儀檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性對臨床有非常重要的影響，有時會直接影響到醫(yī)生對患者病情的評估和治療方案的制定。檢驗(yàn)結(jié)果的質(zhì)量保證是實(shí)驗(yàn)室永恒的主題，為臨床提供準(zhǔn)確可靠的檢驗(yàn)結(jié)果是檢驗(yàn)科工作的目標(biāo)和責(zé)任。檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確，除了檢驗(yàn)前標(biāo)本的正確采集，檢驗(yàn)中儀器的正確檢測，還包括檢驗(yàn)后檢驗(yàn)者對檢測結(jié)果的評估。重視和堅持做好分析后的質(zhì)量控制工作也是獲得準(zhǔn)確實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重要環(huán)節(jié)。在報告審核過程中也可以發(fā)現(xiàn)標(biāo)本的異常情況。比如本文中提到的有冷凝集現(xiàn)象出現(xiàn)的血常規(guī)結(jié)果：RBC和Hb的比例嚴(yán)重失調(diào)，MCH和MCHC結(jié)果異常升高，對于肉眼難于識別的輕微冷凝集情況，可以從檢測結(jié)果和儀器的報警信息中得到提示：如出現(xiàn)“RBCAgglut？（紅細(xì)胞凝集？）”和“T urb/H b？（混濁/血紅蛋白干擾？）” 等報警信息，以及嗜堿通道的右側(cè)出現(xiàn)長長的拖尾現(xiàn)象，一旦發(fā)現(xiàn)此種提示，要高度懷疑冷凝集現(xiàn)象的發(fā)生。對于一般的冷凝集標(biāo)本，首選37℃水浴30分鐘，標(biāo)本水浴過程中，將儀器切換到手動模式，編好號，時間一到，立即上機(jī)檢測，如果儀器離水浴箱比較遠(yuǎn)，則可以將標(biāo)本放置在溫水的容器中運(yùn)送至儀器邊上，以防止再次凝集的發(fā)生。對于環(huán)境溫度比較低的城市，建議采用開放暖氣的方式讓實(shí)驗(yàn)室的溫度控制在25℃左右，以減少冷凝集現(xiàn)象的發(fā)生[10]。

表1 冷凝集標(biāo)本水浴前后結(jié)果比較 （ ±s）

表1 冷凝集標(biāo)本水浴前后結(jié)果比較 （ ±s）

處理 RBC（×1012/L） HCT MCV （fl） MCH（pg ） MCHC（g / L） PLT（×109/L） WBC（×109/L）Hb（g / L）水浴前 0.79±0.11 0.115±0.10 115.00±6.23 125.00±29.10 800.00±102.00 248.00±103.00 6.46±2.86 125.00±22.35水浴后 3.51±0.92 0.39±0.07 93.00±6.77 30.00±2.32 321.00±13.00 250.00±102.00 7.00±3.10 124.00±21.88 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05

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