師延娟

（青海省海東市中心血站，青海 海東 810600）

酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）是常用血液檢測方法，通過酶復(fù)合物與抗體相結(jié)合而顯色，具有良好的保持免疫活性的功能，且靈敏性較高，價格低廉等優(yōu)勢在臨床中應(yīng)用廣泛。核酸檢測法（NAT）可有效縮短檢測窗口期，針對隱匿性乙肝病毒具有良好的檢測效果，還可降低輸血時病原體的傳播風(fēng)險[1]。為明確兩種檢測方式對乙肝病毒診斷效果，特開展相應(yīng)研究，現(xiàn)匯報如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

于2018年1月至2018年5月隨機(jī)抽取1128份無償獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本，ALT化學(xué)檢測結(jié)果顯示初篩合格。

1.2 儀器設(shè)備與方法

檢測方法：將每份標(biāo)本平均分為兩份，一份裝入抗凝真空管中行ELISA檢測；一份裝入分離膠抗凝真空管中行NAT檢測。每個試管均貼唯一條形碼。使用離心機(jī)對標(biāo)本進(jìn)行離心處理，后將其放置于溫度為4℃的環(huán)境中靜置待檢，所有標(biāo)本檢測均需于48 h內(nèi)完成。

試劑與儀器：ELISA檢測設(shè)備選擇瑞士哈密頓公司生產(chǎn)的全自動酶聯(lián)免疫分析儀；NAT檢測設(shè)備選擇美國羅氏公司生產(chǎn)的實(shí)時熒光定量檢測系統(tǒng)。乙肝病毒檢測試劑選擇廈門英科新創(chuàng)公司生產(chǎn)的常規(guī)血清篩查試劑盒及配套試劑。

1.3 質(zhì)量控制方法

標(biāo)本采集后直至開展NAT檢測過程中，按照生化實(shí)驗室SOP標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行相關(guān)操作，根據(jù)試劑盒內(nèi)標(biāo)、實(shí)驗室內(nèi)質(zhì)控品、檢測結(jié)果陰陽性質(zhì)控品全程對NAT操作質(zhì)量進(jìn)行控制。同時本次研究所在實(shí)驗室為定期參加國家衛(wèi)生部門臨床檢驗中心開展的國家國際輸液感染防控質(zhì)量評價環(huán)節(jié)，結(jié)果顯示質(zhì)量測評合格。同時參與國家血站核酸擴(kuò)增檢測相關(guān)實(shí)驗室質(zhì)量評價環(huán)節(jié)，結(jié)果顯示質(zhì)量測評合格。

1.4 觀察指標(biāo)

①記錄兩種檢測方法對血液標(biāo)本中乙肝病毒的陽性檢出率，以1g HBV-DNA水平超過2.7可標(biāo)記為陽性[2]，乙肝病毒HBV標(biāo)志物主要包含乙型肝炎表面抗原及抗體（HBsAg、HBsAb）、乙肝e抗原及抗體（HBeAg、HBeAb）以及乙肝核心抗體（HBcAb）。②同時記錄并比較兩種檢測方法對乙肝病毒檢測的窗口期。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

本次實(shí)驗過程中擇取SPSS 17.0版本的統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計量資料以“±s”表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用x2檢驗；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩種檢測方法陽性率比較

ELISA法陽性標(biāo)本10份，陽性率（0.89%）；NAT法陽性標(biāo)本16份，陽性率（1.42%），組間數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=1.4008，P＞0.05）。

其中，ELISA法檢測呈陽性，而NAT檢測呈陰性標(biāo)本3份，ELISA法檢測呈陰性，而NAT檢測呈陽性標(biāo)本5份。

2.2 兩種檢測方法敏感性、特異性比較

ELISA法敏感性96.81%（1092/1128），NAT法敏感性98.49%（1111/1128），組間數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=6.9752，P＞0.05）；ELISA法特異性96.54%（1089/1128），NAT法敏感性98.22%（1108/1128），組間數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=6.2830，P＞0.05）。

2.3 兩種檢測方法窗口期及漏診率比較

ELISA法窗口期（35.12±1.08）d，NAT法窗口期（20.35±1.04）d，組間數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（T=330.8544，P＜0.05）。

ELISA法漏診率0.62%（7/1128），NAT法漏診率0.09%（1/1128），組間數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=4.5160，P＞0.05）。

3 討 論

乙肝病毒（HBV）可通過血液傳播，患者感染后可引發(fā)乙型肝炎疾病，屬于病毒性傳染疾病之一[3]。大年我國HBV流行度較高，受到多種因素的影響乙肝在我國發(fā)病率有著不斷上升的趨勢。HBV傳播預(yù)防的有效措施是加強(qiáng)獻(xiàn)血人群的血液篩查，其中ELISA是檢測HBV常見方法，主要以HBsAg為常規(guī)檢測指標(biāo)，操作簡單、檢測快捷，價值檢測費(fèi)用較低等優(yōu)勢具有廣泛的應(yīng)用。但是HBV感染有一定的隱匿性和窗口期，因此其漏檢率較高。而NAT是血清學(xué)檢測的補(bǔ)充方法之一，屬于分子生物學(xué)診斷方法。NAT可對HBV-DNA含量進(jìn)行測定，以直觀對感染情況進(jìn)行反映，具有較高的靈敏度，在獻(xiàn)血人群血液篩查中的應(yīng)用較多[4]。

在本次研究中，隨機(jī)抽取1128份血液標(biāo)本進(jìn)行ELISA及NAT檢測，結(jié)果顯示二者HBV陽性率無顯著差異，而NAT相比ELISA具有更高的檢測敏感性和特異性，窗口期更短，可見NAT的應(yīng)用價值更高。其中ELISA法檢測呈陽性，而NAT檢測呈陰性標(biāo)本3份，造成這種情況的原因可能與患者在臨床治療過程中，使用藥物方案，導(dǎo)致其血液中有一定量的HBsAg殘留所致，因為HBsAg中無病毒DNA，且其傳染性偏低，復(fù)制率不高，因此檢測在NAT中呈陰性[5]。另有ELISA法檢測呈陰性，而NAT檢測呈陽性標(biāo)本5份，經(jīng)分析造成該種情況出現(xiàn)的原因，可能與HBV早期感染時只有較少的病毒數(shù)量，ELISA法檢測指標(biāo)為HBsAg，對其無法檢測，而在血清中存在一定的DAN，因此導(dǎo)致NAT檢測結(jié)果呈陽性[6]。有研究結(jié)果顯示，NAT檢測可有效縮短窗口期，在本次研究中，該結(jié)論也被證明。

綜上，NAT及ELISA針對HBV陽性具有良好一致性，但是相對來講NAT可靠性更高，針對HBV傳播具有良好的控制效果，因此可在各地區(qū)血液篩查中開展NAT檢測，有效控制乙肝發(fā)病率。