★ 宋曉光 王少平 王升光 李秉潤 代龍 高鵬*（山東中醫(yī)藥大學(xué) 濟(jì)南 250355）

銀翹消疹合劑是由金銀花、連翹、黃芩、藿香、牛蒡子、白鮮皮、浮萍、甘草8味藥物組成，具有清熱燥濕，祛風(fēng)解毒等功效，主要用于小兒手足口病的治療。由于原生產(chǎn)工藝制備的合劑中含有鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)［1］，鞣質(zhì)含有多個(gè)酚羥基，其與蛋白質(zhì)分子、生物堿和多糖易形成氫鍵，生成不溶于水的沉淀，使藥液渾濁，影響口服液制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性，蛋白質(zhì)又易使藥液腐敗變質(zhì)或產(chǎn)生沉淀，從而影響藥液的質(zhì)量和外觀，為改善澄明度、提高產(chǎn)品的質(zhì)量［2］，本實(shí)驗(yàn)采用乙醇和殼聚糖對(duì)銀翹消疹合劑進(jìn)行澄清工藝研究，以澄明狀況、得膏率以及抗病毒成分中的連翹苷、黃芩苷的轉(zhuǎn)移率為優(yōu)選標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，優(yōu)選最佳澄清工藝［3-4］。

1 儀器與試劑

1.1 樣品與試劑磷酸（天津科密歐化學(xué)試劑有限公司）；甲醇（天津賽孚瑞科技有限公司）；乙腈（天津賽孚瑞科技有限公司）；以上試劑為色譜純。銀翹消疹合劑水提液（實(shí)驗(yàn)室自制）;水為去離子水。其余試劑為分析純。

連翹苷對(duì)照品（批號(hào)：110821-200406，中國藥品生物制品檢定所）；黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)：110715-201117，中國食品藥品檢定研究院）。殼聚糖（山東奧康生物科技有限公司）。

1.2 儀器與設(shè)備AB135-S十萬分之一型天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）；AL-204型萬分之一天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）；KQ-500B型超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）；島津LC-2010A高效液相色譜儀。

2 方法與結(jié)果

2.1 乙醇沉淀法澄清工藝準(zhǔn)確量取銀翹消疹合劑水提液250mL，濃縮至25mL，置于燒杯中，加入適量無水乙醇，慢加快攪，使溶液含醇量達(dá)到75%，密封冷藏2天，過濾，洗滌沉淀，合并濾液和洗滌液，回收乙醇，加去離子水至250mL，備用。

2.2 殼聚糖絮凝沉降法澄清工藝

2.2.1 殼聚糖溶液的配制準(zhǔn)確稱取殼聚糖1.0g，均勻撒在100mL1.0 %的冰醋酸溶液表面，密封溶脹24h，攪勻，備用。

2.2.2 殼聚糖絮凝沉降法［5］準(zhǔn)確量取銀翹消疹合劑水提液250mL，調(diào)節(jié)pH到5.0左右，50℃保溫，準(zhǔn)確量取“2.2.1”項(xiàng)下的殼聚糖溶液24mL加入水提液中，快攪2min，后慢攪10 min，密封冷藏過夜，離心，洗滌沉淀，合并上清液和洗滌液，加去離子水至250mL，備用。

2.3 連翹苷、黃芩苷的含量測(cè)定

2.3.1 黃芩苷的含量測(cè)定

2.3.1.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil 100-5C18柱（4.6mm×150mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.4%磷酸溶液（42∶58）；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長：280nm；柱溫：25℃。

2.3.1.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取60℃減壓干燥4h后的黃芩苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含60μg的溶液，即得。

2.3.1.3 供試品溶液的制備 精密量取澄清后的溶液各20mL，置于水?。?0℃）上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，定容?0mL，即得。

2.3.1.4 藥液標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 精密量取水提液25mL，水浴蒸干，用甲醇定容至25mL，即得。

2.3.1.5 線性關(guān)系考察 分別吸取對(duì)照品溶液2，5，10，15，20，25μL，進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，以黃芩苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到以下回歸方程：Y=3×106X-2.79×104，r=0.9999。結(jié)果表明，黃芩苷進(jìn)樣量在0.1225～1.5312μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.1.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取同一批號(hào)5份樣品，按供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣，記錄峰面積，結(jié)果黃芩苷RSD＝0.97%，表明方法重復(fù)性良好。

2.3.1.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取同一批號(hào)已知含量的6份銀翹消疹合劑2mL，加入黃芩苷對(duì)照品適量，按照供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1，表明黃芩苷的平均加樣回收率為99.42%，RSD為2.19%。

表1 黃芩苷加樣回收結(jié)果

2.3.2 連翹苷的含量測(cè)定

2.3.2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil 100-5C18柱（4.6mm×150mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（19∶81）；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長：277nm；柱溫：25℃。

2.3.2.2 對(duì)照品溶液的制備：取連翹苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。

2.3.2.3 供試品溶液的制備：同為“2.3.1.3”項(xiàng)下的供試品溶液。

2.3.2.4 藥液標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：同為“2.3.1.4”項(xiàng)下的藥液標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3.2.5 線性關(guān)系考察 分別吸取對(duì)照品溶液2，5，10，15，20，25μL，進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，以連翹苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到以下回歸方程Y= 6×108X+ 4.64×103，r = 0.9999。結(jié)果表明，連翹苷進(jìn)樣量在0.402～5.025μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取同一批號(hào)5份樣品，按供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣，記錄峰面積，結(jié)果連翹苷RSD=1.34%，表明方法重復(fù)性良好。

2.3.2.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取同一批號(hào)已知含量的六份銀翹消疹合劑10mL，加入連翹苷對(duì)照品適量，按照供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表2，表明連翹苷的平均加樣回收率為98.86%，RSD為1.33%。

表2 連翹苷加樣回收結(jié)果

2.4 各批次樣品黃芩苷和連翹苷的保留率對(duì)6批樣品中黃芩苷和連翹苷含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表3-4。

表3 乙醇沉淀法樣品轉(zhuǎn)移率結(jié)果

表4 殼聚糖絮凝樣品轉(zhuǎn)移率結(jié)果

2.5 得膏率的測(cè)定 結(jié)果見表5。

表5 各樣品得膏率測(cè)定結(jié)果

3 討論

（1）經(jīng)過乙醇沉淀法和殼聚糖絮凝法處理的銀翹消疹合劑水提液，澄明度都得到很大改善，穩(wěn)定性得到提高，放置數(shù)天，幾乎無沉淀產(chǎn)生，精制效果明顯。

（2）通過HPLC法測(cè)定黃芩苷和連翹苷的轉(zhuǎn)移率，乙醇沉淀法中連翹苷和黃芩苷的平均轉(zhuǎn)移率分別為99.05%和82.13%，殼聚糖絮凝法中連翹苷和黃芩苷的平均轉(zhuǎn)移率分別為82.04%和77.33%，雖然殼聚糖絮凝法連翹苷的轉(zhuǎn)移率基本和乙醇沉淀法一樣，但由于藥液本身pH在6.0左右，殼聚糖使用時(shí)pH為5.0，不利于黃芩苷的保留，所以黃芩苷轉(zhuǎn)移率偏低。

（3）得膏率的測(cè)定結(jié)果說明兩種方法都可以減小干膏量，但乙醇沉淀法的效果更加明顯。

綜上所述，將醇沉法作為銀翹消疹合劑的最佳精制工藝。