呂洪波，王媛媛，趙麗然

（黑龍江省大慶龍南醫(yī)院消化內(nèi)科，黑龍江 大慶 163453）

檢測Notch3、Lgr5、NF-kB在大腸腺癌組織中表達(dá)情況的意義

呂洪波，王媛媛，趙麗然

（黑龍江省大慶龍南醫(yī)院消化內(nèi)科，黑龍江 大慶 163453）

目的：探討檢測Notch3、Lgr5（富含亮氨酸重復(fù)序列G蛋白偶聯(lián)受體5）、NF-kB（核轉(zhuǎn)錄因子KB）在大腸腺癌組織中表達(dá)情況的意義。方法：檢測50例大腸腺癌患者癌組織中Notch3、Lgr5、NF-kB的MOD（光密度）值，然后對比這三個指標(biāo)在不同大腸腺癌病理組織中的MOD值。結(jié)果：Notch3、Lgr5、NF-kB在浸潤T3＋T4中、Dukes分期C＋D中、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中的MOD值高于其在T1＋T2中、Dukes分期A＋B中、不存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中的MOD值，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：Notch3、Lgr5、NF-kB在浸潤T3＋T4中、Dukes分期C＋D中、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中存在高表達(dá)的狀態(tài)。

NF-kB；Lgr5；Notch3；大腸腺癌；表達(dá)

大腸腺癌是一種發(fā)病率較高的消化系統(tǒng)惡性腫瘤。此病的發(fā)病率在我國所有惡性腫瘤中排在第三位。由于此病具有病情進(jìn)展快、復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率高的特點(diǎn)，因此，如何準(zhǔn)確地評估此病患者的病情和預(yù)后就成為了臨床上關(guān)注的焦點(diǎn)。Notch3、Lgr5（富含亮氨酸重復(fù)序列G蛋白偶聯(lián)受體5）、NF-kB（核轉(zhuǎn)錄因子KB）都是臨床上常見的腫瘤標(biāo)志物[1]。有研究證實(shí)，Notch3、Lgr5、NF-kB與大腸腺癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移存在密切的關(guān)系。在本次研究中，我們主要探討檢測Notch3、Lgr5、NF-kB在大腸腺癌組織中表達(dá)情況的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2014年2月至2016年12月在黑龍江省大慶龍南醫(yī)院接受手術(shù)治療的50例大腸腺癌患者作為研究對象。這50例患者中有男26例，女24例；其年齡為42～73歲之間，平均年齡為（60.26±5.12）歲。他們均簽署了自愿參加本次研究的知情同意書。本次研究獲得了我院醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)。取這50例患者的大腸腺癌組織。將取得的大腸腺癌組織做成石蠟標(biāo)本，以供本次研究使用。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器和方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)用儀器 本次研究使用的儀器為：德國LEICA公司提供的BM2135型切片機(jī)、HI1220型烤片機(jī)、DM2500型光學(xué)顯微鏡、冰箱、壓力鍋。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 使用免疫組織化學(xué)染色法檢測石蠟標(biāo)本中Notch3、Lgr5、NF-kB的MOD值，具體的檢測方法是：將具有抑制NF-KB、Lgr5、Notch3陽性表達(dá)作用的病理組織作為陽性對照品。用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照品。嚴(yán)格按照一抗說明書的規(guī)定進(jìn)行操作，先對石蠟標(biāo)本進(jìn)行脫蠟脫水處理，然后對標(biāo)本進(jìn)行滅活內(nèi)源性過氧化酶、抗原修復(fù)、血清封閉加抗、顯色、復(fù)染和封片等操作[2]，最后由經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師分析并計(jì)算標(biāo)本的MOD值。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察NF-KB、Lgr5、Notch3在不同大腸腺癌病理組織中（包括腫瘤體積大小不同的大腸腺癌病理組織、分化程度不同的大腸腺癌病理組織、浸潤深度不同的大腸腺癌病理組織、Dukes分期不同的大腸腺癌病理組織和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的大腸腺癌病理組織）的MOD值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對本次研究中的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

Notch3、Lgr5、NF-kB在浸潤T3＋T4中、Dukes分期C＋D中、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中的MOD值高于其在T1＋T2中、Dukes分期A＋B中、不存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中的MOD值，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳情見表1。

表1 Notch3、Lgr5、NF-kB在不同大腸腺癌病理組織中的MOD值（±s）

表1 Notch3、Lgr5、NF-kB在不同大腸腺癌病理組織中的MOD值（±s）

病理特征指標(biāo) n Lgr5 NF-kB Notch3腫瘤大小 ＜10cm 24 0.1560±0.0248 0.2376±0.0221 0.3298±0.0462≥ 10cm 26 0.1501±0.0220 0.2065±0.0783 0.3500±0.0298分化程度 高 13 0.1673±0.0082 0.2411±0.0712 0.3452±0.0272中33 0.1723±0.0046 0.2629±0.0141 0.3372±0.0282低4 0.1593±0.0367 0.2365±0.0781 0.3523±0.2463浸潤深度 T1＋T2 10 0.1592±0.0301 0.1634±0.0380 0.2472±0.0521 T3 ＋ T4 40 0.1720±0.0051* 0.2681±0.0162 0.3568±0.0439 Dukes分期 A＋B 26 0.1588±0.0104 0.1701±0.0143 0.3021±0.0164 C＋D 24 0.1886±0.0137* 0.3421±0.0175 0.3774±0.0237淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 有 21 0.1907±0.0050* 0.3501±0.0198 0.3801±0.0230無29 0.1581±0.0072 0.1748±0.0130 0.3049±0.0172

3 討論

NF-kB、 Notch、Lgr5都是臨床上重要的腫瘤標(biāo)志物。它們與腫瘤的形成、發(fā)展和轉(zhuǎn)移存在密切的關(guān)系。不過，目前關(guān)于這三個腫瘤標(biāo)志物與大腸腺癌的關(guān)系在臨床上的研究較少。

在本次研究中，我們將 MOD值作為觀察指標(biāo)，是考慮MOD值能夠準(zhǔn)確客觀地反應(yīng)免疫組化圖片染色的強(qiáng)度，并能間接地反應(yīng)癌組織中腫瘤標(biāo)志物的陽性相對濃度[3]。

本次研究的結(jié)果顯示，Notch3、Lgr5、NF-kB在浸潤T3＋T4中、Dukes分期C＋D中、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中的MOD值較高。其中，Notch3在浸潤T3＋T4中、Dukes分期C＋D中、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中的MOD值較高可能與其對腫瘤細(xì)胞的分化、發(fā)育、生長和凋亡具有促進(jìn)作用有關(guān)[4]。Lgr5在浸潤T3＋T4中、Dukes分期C＋D中、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中的MOD值較高可能與其具有多項(xiàng)分化、增值和自我更新的能力有關(guān)。NF-kB在浸潤T3＋T4中、Dukes分期C＋D中、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中的MOD值較高可能與其對腫瘤細(xì)胞的浸潤、分化和轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用有關(guān)。

本次研究的結(jié)果證實(shí)，Notch3、Lgr5、NF-kB在浸潤T3＋T4中、Dukes分期C＋D中、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中存在高表達(dá)的狀態(tài)。檢測Notch3、Lgr5、NF-kB在大腸腺癌組織中表達(dá)情況可作為臨床上判斷大腸腺癌患者病情和預(yù)后的主要方法。

[1] 趙小芳,王紅.Notch信號通路在結(jié)直腸腫瘤干細(xì)胞中的作用[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥,2015,(14):18-20.

[2] 呂轉(zhuǎn),李礪鋒,范智蕊,等.干細(xì)胞基因Lgr5在食管鱗癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J].腫瘤防治研究,2016,43(10):863-869.

[3] 隋華,付曉伶,潘樹芳,等.PI3K/Akt/NF-κB通路調(diào)控ABCB1/P-gp介導(dǎo)的人結(jié)腸癌細(xì)胞多藥耐藥的研究[J].中國癌癥雜志,2014,11(2):106-111.

[4] 任文匯.Notch信號通路在B細(xì)胞分化發(fā)育以及B細(xì)胞淋巴瘤中作用的研究進(jìn)展[J].中國腫瘤生物治療雜志,2016,23(2):282-286.

R735

B

2095-7629-（2017）20-0038-02

呂洪波，女，1972年出生，副主任醫(yī)師