曹鵬飛+陳銀華+周慧娟+范芳娟+楊繼

摘要： 為研究抗青枯病病原菌的植物殺菌劑，以8種植物為材料，從中篩選出抑菌效果較好的有效植物，并采用單因素和二次正交旋轉(zhuǎn)組合試驗(yàn)對(duì)其最適乳油配方及其穩(wěn)定性進(jìn)行研究。結(jié)果表明，銀杏、馬尾松2種提取物的抑菌效果均顯著高于農(nóng)用鏈霉素，其中馬尾松提取物的抑菌效果最好，抑菌圈直徑達(dá)9.06 mm。植物提取物在丙酮中溶解效果好于其他溶劑，在吐溫-80中的分散最佳，且最穩(wěn)定。有效植物提取物的最適乳油配方為：506 mg/mL水杉提取物，827 mg/mL馬尾松提取物，481 mg/mL銀杏提取物，409 mg/mL野艾蒿提取物，0.205 mL/mL溶劑的乳化劑。該試驗(yàn)結(jié)果可為植物源殺菌劑的綜合開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞： 青枯?。恢参镌礆⒕鷦?；二次正交旋轉(zhuǎn)組合試驗(yàn)；植物源殺菌劑

中圖分類號(hào)： S482.2+92 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2017）22-0102-06

青枯病是一種全世界范圍廣泛分布的細(xì)菌性土傳病害，在高溫、高濕的熱帶、亞熱帶地區(qū)大量流行，是農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的主要障礙之一[1]。青枯病害往往發(fā)生在梅雨季節(jié)過后，造成植物連片死亡和大幅度減產(chǎn)，發(fā)病后期，治療比較困難，是一種系統(tǒng)侵染病害，如果土壤酸化嚴(yán)重、板結(jié)厲害，青枯病會(huì)大面積發(fā)生，甚至造成毀園。該病是由青枯假單胞桿菌[茄科勞爾氏菌（Ralstonia solanacearum）]引起的[2]，通過根和莖的傷口或次生根的根冠進(jìn)入植物體，侵染寄主的木質(zhì)部，然后在整個(gè)維管束中蔓延，引起嚴(yán)重的萎蔫最終導(dǎo)致植物死亡[3]。青枯病菌在農(nóng)作物中分布范圍廣，能侵染多達(dá)50個(gè)科200種作物，在番茄、辣椒、煙草等茄科作物中普遍發(fā)生。

近年來，青枯病的防治主要以化學(xué)藥劑為主，如琥珀酸銅、青枯靈和噻菌銅等。但防治青枯病主要以推遲發(fā)病高峰期、減輕發(fā)病程度為目的，尤其在大面積發(fā)病時(shí)才進(jìn)行用藥防治已經(jīng)基本沒有效果。此外，長期使用化學(xué)農(nóng)藥易導(dǎo)致植株產(chǎn)生抗藥性，造成土壤惡化、生態(tài)平衡破壞、農(nóng)藥殘留等問題，危害到人類身體健康，并且造成很大的經(jīng)濟(jì)損失[4]。因此，尋求安全性高且不易產(chǎn)生抗藥性的殺菌劑，已受到廣泛關(guān)注。據(jù)相關(guān)研究表明，幾乎每種植物都能產(chǎn)生抑菌活性，但是抑菌效力和抑菌范圍還存在差異[5-7]，且研究表明銀杏[8]、大蒜[9]、黃花蒿[10]、紫莖澤蘭[11]等對(duì)青枯病菌有較好的抑制作用，因此研究開發(fā)安全生態(tài)的抗青枯病病原菌的植物源殺菌劑具有一定的可行性。

本研究以銀杏外種皮、樟樹枝葉、水杉枝葉、馬尾松針、八角金盤葉、冬青衛(wèi)矛葉、龍葵根、野艾蒿等為植物材料，篩選出具有較強(qiáng)抗青枯病病原菌能力的有效植物，并對(duì)各植物提取物的最適抑菌濃度、最佳溶劑、最適乳化劑及其濃度進(jìn)行優(yōu)化，旨在制備出具有最佳抑菌效果的乳油劑型，旨在為植物源殺菌劑的綜合開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 試驗(yàn)材料

櫻桃番茄青枯病病原菌，自行分離得到。

銀杏外種皮、樟樹（枝葉）、水杉（枝葉）、馬尾松針、八角金盤（葉）、冬青衛(wèi)矛（葉）、龍葵（根）、野艾蒿（花序）等植物材料，采自浙江省麗水市蓮都區(qū)白云山、納愛斯廣場、麗水學(xué)院校園以及南明山等地。

1.1.2 主要試劑

吐溫-80、N，N-二甲基甲酰胺、吐溫-20、二乙醇胺、BY-130、農(nóng)乳-600，以上試劑均為化學(xué)純。1%的纖維二糖、1%乳糖、1%麥芽糖、1%己六醇、1%甘露醇、1%山梨醇丙酮、苯、乙酸乙酯、甲醇、丙酮、冰醋酸，以上試劑均為分析純。

1.1.3 培養(yǎng)基

TTC培養(yǎng)基[12]、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基[13]、休和利夫森二氏培養(yǎng)基[14]、SPA培養(yǎng)基[15]、NA培養(yǎng)基[16]。

1.1.4 主要儀器

雙人單面凈化工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備有限公司，SW-CJ-2FD）、立式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠，LDZX-75KB）、生物顯微鏡（麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司，BA210）、生化培養(yǎng)箱（上海益恒實(shí)驗(yàn)儀器有限公司，LRH-250）、723C可見分光光度計(jì)（上海欣茂儀器有限公司，Q/TBCR2）、智能恒溫?fù)u床（太倉市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠，DHZ-C）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鞏義市英峪予華儀器廠，RE-52A）、SHZ-95型循環(huán)水式多用真空泵（河南鞏義市英峪予華儀器廠，1230211405）等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 植物樣品的采集與處理

隨機(jī)選取樣品植株（銀杏外種皮、樟樹枝葉、水杉枝葉、馬尾松針、八角金盤葉、冬青衛(wèi)矛葉、龍葵根、野艾蒿花序）裝入塑封袋中，標(biāo)上樣品序號(hào)、采樣地點(diǎn)等數(shù)據(jù)信息，帶回實(shí)驗(yàn)室。將植物樣品洗凈，于 60 ℃ 烘干后粉碎過40目篩備用。

1.2.2 植物提取物的制備

取植物粉碎樣品，加入4倍體積的丙酮，置于避光陰涼處，140 r/min震蕩提取3次，每次振蕩時(shí)間為24 h，合并3次濾液后，旋轉(zhuǎn)減壓濃縮至膏狀物。

1.2.3 青枯病病原菌菌懸液的制備

將病原菌接種至SPA培養(yǎng)基中，于30 ℃條件下培養(yǎng)2 d后，將青枯病病原菌菌懸液稀釋至1.0×108個(gè)/mL備用。

1.2.4 植物提取物抑菌效果的測(cè)定

采用濾紙片法[17]測(cè)定植物提取物的抑菌效果。

1.2.5 抗青枯病病原菌植物提取物的篩選

將有效植物提取物稀釋至50 mg/mL，測(cè)定其抑菌圈直徑（mm），以篩選出具有抑菌作用的有效植物提取物。

1.2.6 抗青枯病病原菌有效植物提取物乳油配方的單因素試驗(yàn)

1.2.6.1 植物提取物最適殺菌濃度的確定

用丙酮將有效植物提取物稀釋至25、50、100、200、400、800 mg/mL，篩選出最佳濃度。

1.2.6.2 溶劑的篩選

將4種有效植物提取物均等混合，取約10 mg點(diǎn)于凹形載玻片的凹面內(nèi)，再用移液槍吸取50 μL的溶劑（丙酮、苯、乙醇、乙酸乙酯、甲醇）點(diǎn)于濃縮物的一側(cè)，加蓋玻片，觀察擴(kuò)散速度；室溫靜置1 h后，觀察溶解情況。

1.2.6.3 乳化劑的篩選及其最適濃度的確定

將4種有效植物提取物均等混合，取100 mg植物提取物，2 mL丙酮，每種乳化劑（吐溫-20、吐溫-80、農(nóng)乳-600、BY-130）設(shè)5個(gè)濃度（0.05、0.10、0.15、0.20、0.25 mL），用溶劑溶解濃縮物后，配制成乳油，進(jìn)行乳油分散情況和穩(wěn)定性的觀察試驗(yàn)，能迅速地自動(dòng)分散為乳白色透明溶液，靜置后為均乳、無分離物，則為合格。

1.2.7 二次正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)優(yōu)化有效植物提取物最適乳油配方

在上述單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，以各有效植物提取物和乳化劑濃度為試驗(yàn)因素，以抑菌圈大小為考察指標(biāo)，采用二次正交旋轉(zhuǎn)組合試驗(yàn)優(yōu)化有效植物提取物的最適乳油配方，旨在制備出具有最佳抑菌效果的乳油劑型。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)分析均用DPS 9.50軟件完成。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗青枯病病原菌有效植物提取物的篩選

方差分析結(jié)果表明，不同植物提取物的抑菌效果具有極顯著差異（F=12.561，P<0.01）。由圖1可知，銀杏、馬尾松提取物抑菌效果均顯著高于農(nóng)用鏈霉素，其中馬尾松提取物抑菌效果最好，最大抑菌直徑為9.06 mm。水杉、野艾蒿提取物的抑菌效果明顯高于農(nóng)用鏈霉素，但不顯著。香樟提取物則與農(nóng)用鏈霉素抑菌效果相當(dāng)。因此，選擇水杉、銀杏、馬尾松、野艾蒿這4種植物提取物作為乳油配方的有效提取物。

2.2 抗青枯病病原菌有效植物提取物乳油配方單因素試驗(yàn)

2.2.1 有效植物提取物濃度對(duì)青枯病病原菌的抑菌效果

由圖2～圖5可知，在25～800 mg/mL濃度范圍內(nèi)，4種植物提取物的抑菌效果隨其濃度的增加而逐漸增強(qiáng)。當(dāng)水杉、馬尾松、銀杏提取物濃度在100～400 mg/mL時(shí)，其抑菌圈直徑均明顯增加。在800 mg/mL時(shí)，抑菌圈直徑均達(dá)到最大值，分別為1069、10.84、11.13 mm。野艾蒿提取物在50～400 mg/mL 濃度范圍內(nèi)，抑菌圈直徑隨濃度的增加明顯增大，抑菌效果隨濃度升高呈明顯上升趨勢(shì)。在400～800 mg/mL濃度范圍內(nèi)，抑菌圈直徑基本保持不變，抑菌效果趨于穩(wěn)定，抑菌圈直徑在10.50 mm左右。

2.2.2 最佳溶劑、乳化劑的篩選及其最適濃度的確定

4種植物提取物混合后在6種溶劑 （丙酮、苯、甲醇、乙酸乙酯、乙醇、N，N-二甲基甲酰胺）中的溶解度分別為0200、0.125、0、0.091、0.200、0.125 mg/μL，擴(kuò)散速度大小依次為：丙酮>苯>甲醇>乙酸乙酯=乙醇>N，N-二甲基甲酰胺。這表明丙酮和乙醇均具有良好的溶解效果，但考慮到乙醇擴(kuò)散速度不佳，故選用丙酮作為溶劑。

由表1可知，4種乳化劑在乳化過程均具有較好的穩(wěn)定性，在放置1 h后均未出現(xiàn)分層現(xiàn)象。但就分散情況而言，4種乳化劑表現(xiàn)出不同的結(jié)果。吐溫-80的分散效果最佳，且當(dāng)吐溫-80在0.20 mL/mL溶劑濃度下制備的乳油分散效果明顯優(yōu)于其他乳化劑，乳油清亮無渾濁，長久放置不分層，故乳油配方選用吐溫-80為乳化劑。

2.3 二次正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)優(yōu)化有效植物提取物最適乳油配方

根據(jù)上述單因素試驗(yàn)結(jié)果，以抑菌圈直徑大小為考察目標(biāo)，以水杉提取物濃度（X1）、馬尾松提取物濃度（X2）、銀杏提取物濃度（X3）、野艾蒿提取物濃度（X4）、乳化劑濃度（X5）為考察因素，進(jìn)行5因素5水平的二次正交旋轉(zhuǎn)試驗(yàn)，以確定最適的乳油配方。試驗(yàn)因素水平編碼如表2所示，試驗(yàn)方案與結(jié)果如表3所示。

2.3.1 回歸模型建立與檢驗(yàn)

采用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)對(duì)表3中的結(jié)果進(jìn)行二次多項(xiàng)式逐步回歸分析，得到水杉提取物、馬尾松提取物、銀杏提取物、野艾蒿提取物、乳化劑濃度的回 歸模型：Y=9.215 57+0.236 18X1+0.407 26X2-0.182 55X3- 0096 47X4+0.205 97X5+0.304 84X12-0.064 04X22+0165 21X32-0.117 73X42-0.165 60X52+0.355 70X1X2- 0251 77X1X3-0.123 33X1X4-0.106 92X1X5+0.164 73X2X3-0324 70X2X4+0.311 45X2X5-0.058 36X3X4-0.052 52X3X5+ 0010 42X4X5。

由表4可知，回歸方程的失擬性檢驗(yàn)，F(xiàn)1=1.498 64F0.01（20，15）=3.372，達(dá)到極顯著水平，說明模型的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確，模型成立，可用于描述水杉、馬尾松、銀杏、野艾蒿提取物濃度、乳化劑濃度變化的規(guī)律。X1、X3、X5、X32、X52、X1X3具有顯著性差異，X2、X12、X1X2、X2X4、X2X5具有極顯著性差異，在P=0.01顯著水平上剔除不顯著項(xiàng)后，簡化的回歸方程為：

Y=9.215 57+0.236 18X1+0.407 26X2-0.182 55X3+0.205 97X5+0.304 84X12+0.165 21X32-0.165 60X52+0355 70X1X2-0.251 77X1X3-0.324 70X2X4+0311 45X2X5。

2.3.2 主效應(yīng)分析

P值即概率，反映某一事件發(fā)生的可能性大小。各因素的P值可以反映出各因素對(duì)試驗(yàn)指標(biāo)的重要性，P值越小，表明該因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響越大，即重要性越大。由表4可知，5個(gè)試驗(yàn)因素對(duì)抑菌效果影響大小依次為馬尾松提取物濃度>水杉提取物濃度>乳化劑濃度>銀杏提取物濃度>野艾蒿提取物濃度。

2.3.3 單因子效應(yīng)分析

當(dāng)水杉提取物濃度、馬尾松提取物濃度、銀杏提取物濃度、野艾蒿提取物濃度、乳化劑濃度這5個(gè)影響因素中的任意4個(gè)為0，其中一個(gè)對(duì)抑菌效果的影響見圖6。由圖6可知，在-2.0～0水平下，水杉和銀杏提取物的抑菌效果隨濃度升高而下降，但在0～2.0水平時(shí)，卻隨濃度升高而升高，這可能是由于植物提取物間存在著抑制作用，在低濃度時(shí)，水杉和銀杏對(duì)其他植物的抑制較弱，體現(xiàn)了其他植物較好的抑菌效果，而到達(dá)0水平時(shí)，抑菌效果的下降則與水杉和銀杏與其他植物間的抑制作用逐漸增強(qiáng)直接相關(guān)。到達(dá)高水平時(shí)，抑菌效果又明顯增加，表明銀杏和水杉提取物的抑菌效果強(qiáng)于植物間的抑制作用。

在-2.0～0水平下，馬尾松提取物和乳化劑濃度的升高均可以增加抑菌效果，但在0～2.0水平時(shí)，再增加乳化劑濃度卻使抑菌效果略微下降，這可能是乳化劑濃度過高導(dǎo)致植物提取 物不能充分溶解；而抑菌效果隨馬尾松提取物濃度的增加呈線性上升趨勢(shì)，表明馬尾松提取物濃度對(duì)抑菌效果的影響明顯。野艾蒿提取物濃度的改變對(duì)抑菌效果的影響不明顯。

2.3.4 雙因子效應(yīng)分析

從交互項(xiàng)系數(shù)可以看出，馬尾松與水杉提取物、馬尾松提取物與乳化劑以及馬尾松與野艾蒿提取物3種組分的交互作用達(dá)到極顯著水平；水杉與銀杏提取物的交互作用達(dá)到顯著水平，表明4種組分之間的配比對(duì)抑菌作用有顯著影響，響應(yīng)面結(jié)果如圖7至圖10所示。

在水杉提取物濃度較低時(shí)，馬尾松提取物濃度的增加對(duì)抑菌效果的影響不明顯，而當(dāng)濃度增大到0～2.0水平時(shí)，馬尾松提取物濃度的改變對(duì)抑菌效果的影響明顯。在馬尾松提取物為低濃度水平時(shí)，水杉濃度在-2.0～0.5水平時(shí)，抑菌直徑呈下降趨勢(shì)，在1.0～2.0水平，則有所上升?？梢娫?-0.5～1.0水平下的水杉與其他植物間具有較強(qiáng)的抑制作用，在低于這個(gè)濃度時(shí)，其他植物的抑菌效果顯然強(qiáng)于水杉的抑制作用，而高濃度的水杉提取物則對(duì)抑菌效果影響明顯。

當(dāng)乳化劑濃度處于較低水平時(shí)，馬尾松提取物濃度的增加對(duì)抑菌效果的影響不明顯，可能是馬尾松提取物并未能全部溶于溶劑中，但在高濃度的乳化劑下，隨著馬尾松提取物濃度的增加抑菌效果明顯；而馬尾松提取物濃度較低時(shí)，乳化劑濃度的增加可使馬尾松提取物濃度下降導(dǎo)致抑菌效果減弱。

在水杉提取物濃度最低和銀杏提取物濃度最高以及銀杏提取物濃度最低和水杉提取物濃度最高時(shí)，抑菌直徑達(dá)到最大。而在銀杏和水杉濃度都為最高時(shí)，抑菌直徑卻較小，可見這2種植物間存在抑制作用。

在馬尾松提取物濃度為-2.0水平時(shí)，隨野艾蒿提取物濃度的增加抑菌效果呈上升趨勢(shì)；當(dāng)野艾蒿濃度為-2.0水平時(shí)，隨著馬尾松提取物濃度增加抑菌效果逐漸加強(qiáng)。而在-2.0～1.5水平時(shí)，隨著兩者濃度等量增大時(shí)抑菌效果也逐漸增大，兩者都處于2.0水平時(shí)，抑菌效果卻下降，可見兩者存在相互促進(jìn)作用，而高濃度提取物的抑菌效果的下降可能與提取物不能充分溶解有關(guān)。

2.3.5 有效植物提取物最適乳油配方尋優(yōu)及驗(yàn)證

對(duì)不同設(shè)計(jì)水平下的組合進(jìn)行模擬試驗(yàn)，從55=3 125個(gè)組合中，獲得抑菌直徑>9.30 mm的方案1 940個(gè)。根據(jù)頻次分析結(jié)果和實(shí)際情況取任一值即可得出優(yōu)化組合，現(xiàn)取中值可得出，各組分的優(yōu)化組合為水杉提取物濃度506 mg/mL，馬尾松提取物濃度827 mg/mL，銀杏提取物濃度481 mg/mL，野艾蒿提取物濃度 409 mg/mL，乳化劑濃度0.205 mL/mL溶劑，預(yù)測(cè)抑菌直徑為9.49 mm。經(jīng)多次的驗(yàn)證性試驗(yàn)，該乳油配方的抑菌直徑為9.2 8 mm，與預(yù)測(cè)值無顯著差異（F=2177，P>0.05），說明該模型與試驗(yàn)相吻合，能適用于生產(chǎn)實(shí)踐。

3 討論

3.1 抗青枯病病原菌植物提取物的篩選

相關(guān)研究表明，幾乎每種植物都能產(chǎn)生抑菌活性，但是抑菌效力和抑菌范圍存在著差異。冀玉良等研究發(fā)現(xiàn)，銀杏、大蒜、黃花蒿、紫莖澤蘭等植物對(duì)青枯病菌均有較好的抑制作用[8，10，18-19]。本試驗(yàn)從銀杏、樟樹、水杉、馬尾松、八角金盤、冬青衛(wèi)矛、龍葵、野艾蒿中篩選出銀杏、馬尾松、野艾蒿、水杉4種較農(nóng)用鏈霉素具有明顯抑菌效果的植物，其中馬尾松的抑菌效果最強(qiáng)，這可能與其所含的萜類化學(xué)物質(zhì)有關(guān)，如薄采穎等研究表明，松針葉二萜酸對(duì)番茄灰霉病菌也有明顯抑制作用[20]。由此表明，馬尾松提取物具有較強(qiáng)的抑菌作用，可作為新型植物源農(nóng)藥重點(diǎn)開發(fā)的研究對(duì)象。

3.2 有效植物提取物乳油配方的優(yōu)化

大量研究證明，二次正交旋轉(zhuǎn)組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)與傳統(tǒng)的單因子試驗(yàn)法、正交試驗(yàn)法相比，能根據(jù)預(yù)測(cè)值直接尋求最優(yōu)區(qū)域，從多角度對(duì)模型進(jìn)行模擬分析，以充分發(fā)掘模型所提供的信息[21-23]。故本試驗(yàn)以各有效植物提取物、乳化劑濃度為試驗(yàn)因素，采用二次正交旋轉(zhuǎn)組合試驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化，得到最優(yōu)乳油配方為： 水杉提取物506 mg/mL， 馬尾松提取物 827 mg/mL，

銀杏提取物481 mg/mL，野艾蒿提取物409 mg/mL，吐溫-80 0205 mL/mL溶劑，經(jīng)驗(yàn)證試驗(yàn)后抑菌直徑與預(yù)測(cè)值 9.49 mm 無顯著差異。由單因子效應(yīng)分析可知，馬尾松提取物濃度與抑菌效果的關(guān)系呈線性上升趨勢(shì)，較其他植物提取物對(duì)抑菌效果有極顯著影響。毛勝鳳等研究發(fā)現(xiàn)，馬尾松提取物在濃度為12.5～100.0 mg/mL時(shí)抑菌效果隨著濃度的增大而增大[24]。本試驗(yàn)中馬尾松濃度在25～400 mg/mL范圍內(nèi)，抑菌直徑呈線性上升趨勢(shì)，而濃度高于400 mg/mL后抑菌效果趨于平緩，表明在低濃度時(shí)馬尾松抑菌效果隨濃度增大而顯著增大，但高于一定水平時(shí)，馬尾松的抑菌效果則會(huì)趨于穩(wěn)定，這可能與溶劑的溶解度大小有關(guān)。從雙因子互作效應(yīng)分析可知，馬尾松提取物濃度較高時(shí)，隨著乳化劑濃度的增加抑菌效果明顯增加，研究表明天然的植物源殺菌劑在作用于寄主時(shí)，其滲透性、延展性都是有限的，須添加助劑使其充分發(fā)揮藥效[25-26]。本試驗(yàn)研究表明，吐溫-80乳化劑的添加能增加有效植物提取物的滲透性和延展性，可達(dá)到增效的作用。在乳油劑型中，溶劑是其加工和使用中不可或缺的重要組分，用于溶解和稀釋原藥協(xié)助乳化分散，增加乳油流動(dòng)性[27-28]。根據(jù)蔡亞東的研究表明，龍葵素乳油具較好擴(kuò)散性和溶解度的溶劑為N，N-二甲基甲酰胺和二甲苯，而丙酮?jiǎng)t相對(duì)效果較差[29]。本試驗(yàn)通過對(duì)溶劑的擴(kuò)散情況和溶解度的測(cè)定，確定丙酮為有效植物提取物乳油的最佳溶劑。由此可見，溶劑的選擇具有針對(duì)性。

綜上所述，經(jīng)二次正交旋轉(zhuǎn)組合試驗(yàn)優(yōu)化得到植物提取物的最適乳油配方，抑菌效果顯著優(yōu)于農(nóng)用鏈霉素。但該乳油配方仍存在著不少問題，如植物活性成分難分離、易分解的問題還有待解決，乳油劑型的穩(wěn)定性還有待進(jìn)一步研究。

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